15 июня 2018г.
Возраст исходных маточных растений имеет определенное значение для успешного микроклонального размножения. В связи с особенностями развития колонновидных форм яблони (они образуют мало боковых побегов, а значит и почек), почки, предназначенные для микроклонального размножения, брали в тот период, когда растения имели оптимальные размеры, чтобы не нанести ущерб их общему состоянию. Этот возраст составлял 5 -6 лет. Растения-доноры были без видимых признаков поражения грибными и вирусными заболеваниями.
Имеет значение также время сбора почек. Ряд исследователей считает, что наиболее благоприятным периодом для введения в культуру in vitro яблони является фаза выхода растений из состояния покоя (февраль-март) [1,2]. Проведенные исследования показали, что для колонновидных форм яблони лучшие результаты дает введение в культуру in vitro меристем из апикальных почек, собранных в период начала вегетации растений. В зависимости от погодных условий этот период приходится на середину или конец апреля, когда происходит естественное набухание и распускание почек. Меристемы из почек, собранных в марте, не дали положительных результатов, как по выходу стерильного материала, так и по способности к дальнейшему развитию.
В культуру in vitro вводили меристематические верхушки размером 0,2 -0,4 см, которые изолировали из развивающихся почек, освобождая их от покровных тка ней, что обеспечивало достаточно эффективную стерилизацию. В качестве стерилизующего агента использовали 0,1 % раствор ртути (сулемы), было испытано две экспозиции продолжительностью от 40 сек до 1 -й мин (табл. 1).
Лучшие результаты по выходу стерильных эксплантов были получены у всех испытанных сортов при экспозиции 1 мин. В зависимости от конкретного генотипа уровень инфицированности был различен. Наибольший выход стерильных эксплантов отмечен у сорта Московское ожерелье (73,0%), Президент (65,0%), Валюта (69,6%), наименьший – сорта Васюган (48,4%) и Малюха (53,1%).
Экспозиция 40 сек у всех генотипов оказалась недостаточной для получения стерильного материала, его выход составил от 0 до 13,3% (рис.1).
Таблица 1 – Влияние времени стерилизации исходного материала 0,1 % раствором сулемы на выход стерильных и жизнеспособных эксплантов
|
Форма
|
Экспозиция, мин
|
Выход стерильных
эксплантов, %
|
Жизнеспособность
почек, %(от числа исходных эксплантов)
|
|
Московское
ожерелье
|
40 секунд
|
11,3
|
11,3
|
|
1 минута
|
73,0
|
61,0
|
|
Малюха
|
40 секунд
|
0
|
0
|
|
1 минута
|
53,1
|
32,4
|
|
Васюган
|
40 секунд
|
0
|
0
|
|
1 минута
|
48,4
|
29,6
|
|
Президент
|
40 секунд
|
11,8
|
11,8
|
|
1 минута
|
67,0
|
45,0
|
|
Валюта
|
40 секунд
|
0
|
0
|
|
1 минута
|
65,3
|
65,3
|
Также в качестве стерилизующего агента был испытан раствор «Белизны» в разведении 1:1,5 при экспозиции 5 мин. Такой вариант обработки использовался нами на листовых эксплантах и дал положительные результаты. Однако при обрабо тке меристемах выход, как стерильных, так и жизнеспособных почек у всех генотипов был существенно ниже, чем при обработке сулемой (табл. 2). У сортов Малюха и Президент все почки после стерилизации оказались не жизнеспособными (рис. 2).
Таблица. 2 – Влияние стерилизации исходного материала р-ром «Белизны»
(1:1,5), 5 мин. на выход стерильных и жизнеспособных эксплантов
|
Форма
|
Выход стерильных эксплантов,
%
|
Жизнеспособные
почки, %
|
|
Московское ожерелье
|
51,1
|
19,4
|
|
Васюган
|
23,6
|
14,3
|
|
Валюта
|
40,8
|
8,1
|
|
Малюха
|
35,7
|
0
|
|
Президент
|
42,8
|
0
|
Таким образом, при микроклональном размножении для стерилизации апикальных почек колонновидных сортов яблони следует использовать 0,1% раств ор сулемы с экспозицией 1 мин. Выход стерильных эксплантов в зависимости от
генотипа составляет при этом
от
48,4 до 73,0%, жизнеспособных – 29,6-65,3%.
Список литературы
1.
Матушнина, О. В. Технология клонального микроразмножения яблони и груши / О. В. Матушнина, И. Н. Пронина / Методические рекомендации. – Мичуринск-наукоград РФ, 200 . − 32 с.
2.
Муратова, С. А. Размножение садовых культур in vitro / Методические рекомендации / С. А. Муратова, Д. Г. Шорников, М. Б. Янковская.− Мичуринск, 2008. − 69 с.
