ОПРЕДЕЛЕНИЕ 2,4-ДИТРЕТБУТИЛФЕНОЛА В БИОЖИДКОСТЯХ МЕТОДОМ ПРОИЗВОДНОЙ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ

2,4-Дитретбутилфенол (агидол-10) (в дальнейшем 2,4-диТБФ) применяется в производстве неионных ПАВ, пластификаторов, антиоксидантов, стабилизаторов, синтетических смол, пестицидов. Известно также применение 2,4-диТБФ в медицинской промышленности [2, 4].
По физическим свойствам это прозрачные кристаллы от светло до темно-желтого цвета, не растворим в воде, хорошо растворяется в этаноле, ацетоне, толуоле, нормальных парафина х.
2,4-диТБФ, как и многие другие алкилфенолы, обладает токсическими свойствами по отношению к теплокровным животным и человеку. Описаны случаи отравления алкилфенолами, в том числе с летальным ис ходом [1].
Отравления могут происходить при контакте с подобными веществами в процессе их производства, применения, вследствие загрязнения объектов окружающей среды выбросами в атмосф еру и сточными водами предприятий, при авариях, сопровождающихся разливом значительных количеств топлива, содержащего антиоксиданты.
Токсичность и широкое применение 2,4-диТБФ обусловливают его важное химико-то ксикологическое значение. Представляется необходимым разработка методик определения 2,4-диТБФ в биожидкостях, которые могли бы применяться при проведении химико-токсикологических экспертиз.
Цель настоящей работы - разработка методики количественного определения 2,4 -диТБФ в биологических жидкостях (крови и плазме), которая отличается необходимой селективностью и точностью.
Материалы и методы исследования
Объект исследования - 2,4-дитретбутилфенол (2,4-диТБФ) с содержанием основного вещества ≥ 99%. Аналитическим методом явилась производная спектрофотометрия, позволяющая уменьшить влияние фонового поглощения эндогенных веществ биожидкостей на спектрофотометрическое определение веществ, извлечѐнных из биологического материала.
Электронный спектр поглощения 2,4-диТБФ в среде этанола в интервале длин волн 190 -360 нм обнаруживает выраженную полосу поглощения, достаточно близкую по форме к Гауссовой кривой в области 260-290 нм. Для количественного определения рассчитывали производные второго порядка в области максимума поглощения 283 нм. Данные для расчѐта производных спектров получали, измеряя оптическую плотность растворов 2,4-диТБФ в этаноле в диапазоне 190-360 нм. Оптическую плотность снимали через каждые 5 нм (прибор СФ-56; кюветы с толщиной рабочего слоя 10 мм) на фоне этанола.
Производные спектров рассчитывали методом численного дифференцирования. Для снижения влияния шума, при пере ходе от первых ко вторым производным, уменьшали шаг дифференцирования.
УФ-спе ктр 2,4-диТБФ в этаноле, а также его производная второго порядка представлены на Рисунках 1 и 2.


Рис.1. УФ-спектр 2,4-диТБФ в этаноле (0,004% раствор)


Рис.2. Производные второго порядка для спектра 2,4 -диТБФ в этаноле (0,004% раствор)

Построение градуировочного графика. Измеряли оптические плотности ряда стандартных растворов 2,4- диТБФ в этаноле на приборе СФ-56 с шагом 5 нм и рассчитывали производные второго порядка для каждого раствора. Значения второй производной, взятые по модулю, умножали на 1000. По результатам измерений строили график зависимости второй производной (A′′•1000) в области 284 нм от концентрации 2,4-диТБФ в исследуемом растворе и рассчитывали уравнение градуировочного графика, которое в данном случае имело вид: (A′′•1000) = 9,28325•С +5,10899, где С – содержание анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.
Определение 2,4-диТБФ в биожидкостях. Готовили модельные смеси 2,4-диТБФ с биологическим материалом, содержащие 2,5-50 мг вещества в 25 г биологической жидкости (крови или плазм ы крови человека). Осуществляли двукратное изолирование 2,4-диТБФ из модельных смесей (навеска 5 г) смесью растворителей ацетон-этилацетат в соотношении 1:1 (по объѐму) при соотношении изолирующего агента и биологического материала 2:1 (по массе). Продолжи тельность каждого настаивания - 45 минут [3]. Полученные извлечения из каждой модельной смеси объединяли, точное количество объединѐнного извлечения наносили на пластины ТСХ «Сорбфил» с люминесцентным индикатором и хроматографировали в подвижной фазе гекса н-хлороформ (5:5 по объѐму) в присутствии вещества-свидетеля. Хроматограммы детектировали в УФ-свете. Элюировали исследуемое вещество из сорбента этанолом (10 мл) в течение 15 минут. Оптическую плотность полученного элюата измеряли на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм на фоне элюата, полученного при исследовании контрольного образца биожидкости, в диапазоне 190 -360 нм с шагом 5 нм. Рассчитывали производные второго порядка. Количество 2,4-диТБФ в извлечениях на хо дили, используя полученное выше уравнение градуировочного графика.
Результаты пяти параллельных определений различных концентраций 2,4-диТБФ в биологическом материале представлены в Табл.1.
                                                                                                                            Таблица 1
Результаты количественного определения 2,4-диТБФ в биожидкостях методом производной спектрофотометрии (n = 5; P = 0,95)

Как свидетельствуют полученные данные, разработанная методика позволяет селективно определять 89,45-91,68% 2,4-дитретбутилфенола в извлечениях из биожидкостей (крови и плазмы крови) человека в присутствии соэкстрагирующихся веществ биоматериала с достаточной д ля подобного рода исследований воспроизводимостью и правильностью. При содержании 2,5-50,0 мг анализируемого вещества в 25 г биологического объекта значения полуширины доверительного интервала составляют 8,52-6,42 (исследование плазмы) и 7,94-6,19 (исследование крови).
Выводы
1. Методом численного дифференцирования рассчитаны вторые производные электронного спектра 2,4 - дитретбутилфенола в этаноле.
2. Показана возможность применения производной спектрофотометрии второго порядка для определения 2,4-дитретбутилфенола в извлечениях из биожидкостей.

Список литературы

1. Асташкина А.П., Шорманов В.К., Киричек А.В., Симонов Е.А., Су хомлинова Е.А., Гришечко О.И. Определение 2-метокси-4-аллилгидроксибензола при химико-токсикологическом исследовании биологического материала // Судебно-медицинская экспертиза. -2012.- № 6. - С. 42-45.
2. Грушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных вода х. - Л.: Химия, 1982. - 216 с.
3. Шорманов В.К., Коваленко Е.А., Дурицын Е.П., Маслов С.В., Галушкин С.Г., Прониченко Е. И. Определение карбофурана при судебно-химическом исследовании биологического материала // Судебно- медицинская экспертиза.-2013.-Т. 56, № 4.-С. 30-34.
4. Zarudii F.S., Gil’mutdinov G.Z., Razudii R.F., Myshkin M.A., Gershanov F. B. and Novikov T.A. Drug synth esis methods and manufacturing technology 2,6- di-tert-butyl-4-methylphenol (dibunol, ionol, tonarol): a classical antioxidant // Pharmaceutical chemistry journal. - 2001. - Vol. 35, N 3. - P. 162-168.