29 марта 2016г.
Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) чаще всего протекает доброкачественно и бессимптомно, но в ряде случаев может развиваться цирроз печени, портальная гипертензия и печеночная недостаточность. К этиологическим факторам, приводящим к развитию данного заболевания, относятся сахарный диабет 2 типа, ожирение и гиперлипидемия. Основная роль в патогенезе НАСГ отводится повышенному содержанию в печени свободных жирных кислот, которые являются высокоактивным субстратом перекисного окисления липидов (ПОЛ) [5]. В ходе ПОЛ происходит повреждение мембран, что ведет к некрозу клеток и формированию гигантских митохондрий. Одним из главных факторов, сдерживающих чрезмерную интенсификацию ПОЛ, выступает восстановленный глутатион (GSH). Данный тиол участвует в регуляции клеточного редокс-зависимого сигналинга и активности транскрипционных факторов. Также основной ролью данного метаболита является обезвреживание свободных радикалов. Установлено, что дисбаланс в регуляции GSH наблюдается при широком ряде патологий [6]. В настоящей работе нами был использован препарат, содержащий в своем составе мелатонин– мелаксен. Известно, что данный гормон применяется для восстановления нормального ритма бодрствования и сна. Однако помимо ритморганизующего эффекта мелатонин обладает выраженным антиоксидантным и иммуномодулирующим действием [1].
Таким образом, целью настоящей работы явилось определение активности γ- глутамилтранспептидазы (ГГТП), отражающей состояние функции печени, и концентрации GSH у больных с НАСГ, развивающимся при сахарном диабете 2 типа, и проведение корреляционного анализа данных показателей на фоне комбинированной терапии с мелаксеном.
Материалы и методы. В клиническое исследование было включено 59 человек с сахарным диабетом 2 типа, осложненным НАСГ. Среди них 21 мужчина (37,9%) и 38 женщин (62,1%). Возраст больных составлял от 38 до 75 лет: средний возраст – 56,5±17,5 года. Первая группа пациентов (33 человека) находилась на базисном лечении: сахароснижающая терапия, витаминотерапия, гепатопротекторы: карсил, эссливер форте в течение 10 дней. Вторая группа пациентов (26 человек) дополнительно к базисной терапии получала мелаксен (Unifarm, Inc., США) по одной таблетке 1 раз в день за 30-40 минут перед сном в течение 10 дней. Активность ГГТП оценивали по скорости реакции переноса глутамилового остатка с гамма–L–(+)–глутамил– 4–нитроанилида на глицилглицин (Био-тест, PLIVA – Lachema Diagnostika). Концентрацию восстановленного глутатиона (GSH) определяли на спекторофотометре Hitachi U-1900 с помощью реакции с 5,5 – дитио – бис – (2 – нитробензойной) кислотой, в результате которой образуется тионитрофенильный анион (ТНФА), имеющий максимум поглощения при 412 нм. Ассоциативные взаимосвязи между параметрами изучали при помощи корреляционного анализа с расчетом коэффициента корреляции Спирмена (r). Статистическая обработка материала включала в себя использование стандартных методов вариационной статистики (расчет средних значений (М), ошибка средних значений (m), t–критерия Стьюдента) и непараметрического теста Вилкоксона с использованием прикладных программ «STATISTICA 6.0». Достоверными считались различия при р≤0,05.
Результаты и их обсуждение. О нарушении функционирования печени у больных свидетельствовала активность ГГТП, которая до назначения лечения была в среднем в 3,2 (p<0,05) раза выше по сравнению с нормой. После проведения базисного лечения активность данного фермента снижалась в 2,0 раза, после комбинированного лечения с мелаксеном – в 2,7 (p<0,05) раза. Содержание GSH в сыворотке крови было ниже в среднем в 1,9 (p<0,05) раза относительно контрольного уровня. Вероятно, восстановленная форма данного антиоксиданта расходовалась на обезвреживание образующихся активных форм кислорода и на поддержание окислительно-восстановительного гомеостаза клетки, нарушенного при патологии. Кроме того, причиной падения концентрации глутатиона может быть снижение интенсивности функционирования пентозофосфатного пути при сахарном диабете, вследствие чего уменьшается доступность НАДФН, необходимого для регенерации восстановленного глутатиона [4]. Полученные нами результаты соотносятся с литературными данными, согласно которым снижение концентрации глутатиона также было выявлено в плазме и эритроцитах больных с сахарным диабетом 1 типа и длительно протекающим сахарным диабетом 2 типа [2]. После проведения базисного лечения наблюдалось незначительное увеличение концентрации GSH, но достоверных различий по сравнению с данными до лечения выявлено не было.
Во 2-ой группе больных при поступлении в стационар уровень GSH в сыворотке крови был ниже в среднем в 2,0 (p<0,05) раза по сравнению с нормой. После проведения комбинированного лечения, включающего мелаксен, происходило повышение содержания GSH в среднем на 26,2% по сравнению с результатами, полученными до лечения. По-видимому, за счет реализации антиоксидантного действия мелатонина, входящего в состав применяемого препарата, происходило уменьшение степени развития оксидативного стресса и, как следствие, расходования восстановленной формы глутатиона в организме больных. Полученные данные согласуются с результатами, полученными нами при применении экзогенного мелатонина при экспериментальном гепатите у животных [3]. При корреляционном анализе были выявлены ассоциации между активностью ГГТП и концентрацией GSH. Так, перед лечением имела место отрицательная связь между ГГТП и GSH (r=-0,50; р=0,011). Полученные данные подтверждают, что расходование GSH происходило в результате окислительного стресса, развивающегося при поражении печени, на что указывает высокая активность ГГТП. После проведения базисного лечения связь характеризовалась корреляционным коэффициентом, r=-0,51; p=0,010, а после комбинированной терапии с мелаксеном усиливалась (r=-0,62; р=0,001). Таким образом, существенное возрастание уровня GSH на фоне приема мелаксена, очевидно, могло оказывать позитивный эффект не только за счет протективного действия на гепатоциты и уменьшения воспалительного процесса, но и повышения антиоксидантного статуса организма больных СД2 в целом.
Работа поддержана стипендией Президента РФ молодым ученым № СП-1606.2015.4.
Список литературы
1. Агарков А.А. Оценка степени фрагментации ДНК, активности аконитатгидратазы и уровня цитрата при сахарном диабете 2 типа у крыс и введении мелатонина/ А.А. Агарков, Т.Н. Попова, Л.В. Матасова // Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. – 2012. – № 3. – С. 21-26
2. Глутатион и ферменты его метаболизма у больных сахарным диабетом 2 типа / Л.С. Колесниченко [и др.] // Сибирский медицинский журнал. – 2009. – Т. 85, № 2. – С. 56-58.
3. Состояние системы глутатиона и активность некоторых NADPH-генерирующих ферментов в печени крыс при действии мелатонина в норме и при токсическом гепатите/ А.Н. Пашков [и др.] // Бюлл. экспериментальной биологии и медицины. – 2005. – Т. 139, № 5. – С. 520-524.
4. Biswal S.S. Glutathione Oxidation and Mitochondrial Depolarization as Mechanisms of Nordihydroguaiaretic Acid-Induced Apoptosis in Lipoxygenase-Deficient FL5.12 Cells / S.S. Biswal, K. Datta, S.D. Shaw // Toxicolog. Sci. – 2000. – Vol. 53. – P. 77-83.
5. Pera N. Oxidative stress in hepatic fibrogenesis: implications from a nutritional model of nonalcoholic steatohepatitis / N. Pera, N. Phung, G.C. Farrell // Hepatology. – 1999. – Vol. 30. – 493.
6. Townsend D.M. The importance of glutathione in human disease, / D.M. Townsend, K.D. Tew, H. Tapiero //Biomedicine & Pharmacotherapy. – 2003. – V. 57. – Р. 145–155.
