ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ НЕОДНОРОДНОСТЬ И АПОПТОЗ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ И СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИИ: КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

Исследованиями последних лет убедительно доказано, что развитие системной красной волчанки (СКВ) и системной склеродермии (ССД) сопровождается нарушением регуляции апоптоза лейкоцитов и ассоциировано с поражением внутренних органов, прежде всего легких и сердечно -сосудистой системы. Увеличение уровня апоптоза нейтрофилов, наряду с окислительным повреждением ДНК клеток, является фактором аутоантигенного эксцесса и иммунной активации у больных СКВ и ССД.
Известно, что нейтрофилы представляют собой неоднородное подмножество лейкоцитов, а циркулирующие нейтрофилы могут демонстрировать существенные различия в своих параметра х, таких как фагоцитоз, синтез белка и окислительный метаболизм. Установлено, что нейтрофилы, обладая значительной пластичностью, могут формировать различные фенотипы или подмножества в ответ на широкий спектр физиологических и патологических условий.
Целью работы являлось определение клинико-патогенетического значения феноменов функциональной неоднородности и программированной гибели нейтрофилов у больных СКВ и ССД.
Материалы и методы
Обследованы 50 женщин с СКВ в возрасте от 18 до 73 лет (в среднем 39,911,3 лет), длительностью заболевания 1–32 лет (в среднем 8,2±7,4 лет) и 28 женщин, больных ССД, в возрасте от 18 до 72 лет (в среднем 45,5±16,2 лет), длительностью заболевания 8,63±5,21 года (от 1 до 26 лет). В контрольную группу включены 15 женщин в возрасте от 18 до 53 лет (в среднем 44,2±9,7 года).
Диагноз СКВ устанавливали на основании клинических проявлений заболевания, данных лабораторных, инструментальных методов исследования и классификационных критериев Американской ассоциации ревматологов (1982). Для верификации диагноза ССД использовали критерии Американской ревматологической ассоциации (1980).
Выделение нейтрофилов периферической крови проводили на двойном градиенте плотности фиколла - урографина. Функциональную активность (ФА) клеток исследовали хемилюминесцентным методом. Для усиления хемилюминесценции (ХЛ) использовали люминол (ЛЛ), а также люцигенин (ЛН), который является селективным индикатором супероксид-аниона. О функциональном резерве клеток судили по коэффициентам активации хемилюминесценции (КА ХЛлл и КА ХЛлн), которые рассчитывали как отношение индуцированного показателя (иХЛлл и иХЛлн) к спонтанному (сХЛлл и с ХЛлн). В качестве индуктора кислородзависимого метаболизма нейтрофилов использовали 1109 взвесь убитых нагреванием клеток S. aureus штамма p-209.
Для определения экспрессии проапоптозного антигена bak на поверхности нейтрофилов использовали стрептавидин-биотиновый метод (реагенты «DAKOCytomation», Дания). Исследование проводили в соответствии со стандартным протоколом, учитывая процент bak-положительных клеток.
Статистическая обработка данных проводилась при помощи пакета прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoft Inc., США). Осуществлялась проверка нормальности распределения количественных признаков. Для количественных признаков, имеющих распределение отличное от нормального, производилось вычисление медиан и интерквартильных интервалов (Me (25%; 75%)). Для сравнения двух независимых групп по одному признаку применяли критерий Манна -Уитни. Для изучения взаимосвязи двух признаков использовался корреляционный анализ по Спирмену. При установлении референтного интервала для количественных признаков использовалось процентильное определение нормы, основанное на измерениях, предпринятых на здоровой популяции. Критическое значение уровня статистической значимости принималось равным 5%.
Результаты исследования
Выявлено, что у пациентов с СКВ в группе с высокой активностью нейтрофилов чаще встречается повышение уровня СРБ, чем в группе, характеризующейся средним уровнем активности нейтрофилов (9 (69,2%)>4 (14,8%), p=0,04). В тоже время в группе со средним уровнем функциональной активности нейтрофилов, более часто встречается повышение ЦИК в сравнении с группой с высоким уровнем функциональной активности клеток (5 (38,5)<23 (85,1), p=0,018).
Установлено, что в группе больных ССД, нейтрофилы которых демонстрировали высокую функциональную активность, более часто наблюдалось повышение уровня ЦИК в сравнении с группами больны х, у которых нейтрофилы демонстрировали низкий и средний уровень функциональной активности клеток (4 (100)>9 (64,2), p=0,04 и 4 (100)>9 (64,2), p=0,047, соответственно).
Поражение сосудов достоверно чаще встречалось в группе пациентов с ССД с высокой функциональной активностью нейтрофилов в сравнении с группой больных со средним уровнем активности клеток (3 (75,0)>9 (64,2), p=0,049).
Корреляционный анализ изучаемых показателей функциональной активности нейтрофилов и  клиническими проявлениями СКВ и ССД продемонстрировал следующие результаты (Табл. 1 и 2).

                                                                                                                           Таблица 1

 Корреляционная матрица (RS) показателей функциональной активности нейтрофилов и клиническими проявлениями СКВ

Примечание: *p < 0,05 по сравнению с контролем.

Обнаружена средняя корреляция между уровнем продукции активных форм кислорода, супероксидного анион-радикала и концентрацией СРБ ( r=0,48, p=0,0003 и r=0,36, p=0,009 соответственно). Системные проявления СКВ коррелируют с уровнем продукции супероксидного анион-радикала (r=-0,34, p=0,014). Резерв продукции супероксидного аниона нейтрофилами обратно коррелирует с уровнем СРБ ( r=-0,34, p=0,013).

                                                                                                                             Таблица 2 

Корреляционная матрица ( RS) показателей функциональной активности нейтрофилов и клиническими проявлениями ССД

Примечание: *p < 0,05 по сравнению с контролем.

В Табл. 2 представлены данные, демонстрирующие взаимосвязи между уровнем функциональной активности нейтрофилов и клиническими проявлениями заболевания. Обнаружена прямая средняя корреляция между уровнем продукции кислородных радикалов и поражением легких (r=0,38, p=0,042) и уровнем СРБ (R=0,48, p=0,009), а так же сильная прямая корреляционная взаимосвязь между уровнем продукции активных форм кислорода и концентрацией IgA (r=0,65, p=0,001).
При анализе взаимосвязи уровня иммуноглобулинов и активности нейтрофилов выявлена умеренная прямая корреляция между уровнем IgA и резервом продукции супероксидного анион радикала ( r=0,43, p=0,026); умеренная прямая зависимость между концентрацией Ig G и резервом выработки кислородных радикалов (r=0,39, p=0,04).
Концентрация СРБ коррелирует с уровнем активных форм кислорода (r=-0,37, p=0,046). Поражение нервной системы взаимосвязано с уровнем продукции супероксидного анион-радикала (r=0,41, p=0,029).
Выявлена прямая умеренная корреляционная взаимосвязь между уровнем готовых к апоптозу клеток и концентрацией иммуноглобулинов A и G (r=0,44, p=0,043 и r=0,56, p=0,008).
Выводы
1. При СКВ образование свободных радикалов кислорода, в том числе супероксид-аниона, на хо дится в зависимости от концентрации СРБ. Системные проявления СКВ коррелируют с уровнем продукции супероксидного анионрадикала нейтрофилами.
2. У больных ССД уровень функциональной активности нейтрофилов прямо коррелирует с концентрацией СРБ, IgA, поражением легких и нервной системы. Резерв продукции свободных радикалов кислорода нейтрофилами, а также уровень апоптоза клеток находятся в зависимости от содержания IgA и Ig G.