16 января 2016г.
Присутствие в крови антигена является предпосылкой для развития иммунопатологического процесса, но не означает обязательной реализации аутоиммунного процесса. Представление об исключительно патогенной роли аутоантител (аАТ) меняется более обоснованным положением о регулирующей роли как в норме так и в патологии. ААТ направлены к ферментам, гормонам, медиаторам и регулируют их активность, являясь в одном случае сдерживающим механизмом, в другом провокатором хронического процесса [3. Б.И.Кузник 2005, 5. Н.Н. Цыбиков 2012]. Дефензины (HNP-α human neutrophil peptides-α) и белки теплового шока (HSC-70 –Heat Shock Protein), являются неотъемлемой частью всего «белкового хозяйства» во врожденном и приобретенном иммунитете. Уровень HNP-α и HSC – 70 регулируется ОРР, вместе с тем может контролироваться аутоантителами, и хемоатрактантом IL-8 для дефензина. Исхо дя из этого, нам представлялось интересным оценить уровень IL-8 и аутоантител в исследуемых субстратах как в здоровом пародонте, так и при воспалительных заболеваний пародонта (ВЗП), и проследить корреляционные связи.
Цель исследования – оценить концентрацию HNP-α, HSC – 70 и аАТ к ним, в здоровом пародонте и при воспалительныхзаболеваниях: хронический гингивит (ХГ) и хронический пародонтит (ХП).
Материалы и методы
В исследовании принимали участие 45 человек: 15 – с интактным пародонтом, 15 пациентов с диагнозом ХГ средней степени тяжести, 15 – с ХП средней степени тяжести. Материалом для исследования служили: ротовая жидкость (РЖ), сыворотка (СВ) и смывы из десневой борозды (СДБ) при здоровом пародонте и хроническом гингивите, смывы из пародонтального кармана (СПК) при пародонтите Концентрацию (пг/мл) пептидов определяли в РЖ, СВ, СДБ и СПК методом ИФА: дефензин – (реактивы фирмы «Hycult Biotech»), белок теплового шока – ИФА (реактивы фирмы «Assay Designs»). ИЛ-8 – ИФА (реактивы фирмы «Вектор-Бест», Новосибирск). Уровень аАТ к HNP-α и HSC – 70 исследовали оригинальным методом (OD450) (2. Цыбиков Н.Н. и др., 2010), результат выражали в единицах оптической плотности – ед.оп.. Статистический анализ проведен в программе STATISTICA® 6.0. При сравнении групп использовался U – критерий Манна – Уитни, различия считали значимыми при р<0,05. Результаты исследования представлены как Ме – медиана, SD – среднее квадратичное отклонение. При анализе корреляционных взаимосвязей применялся метод Спирмена.
Результаты и обсуждение
HNP-α – катионные пептиды нейтрофилов микробицидный эффект которых обусло влен активацией врожденного иммунитета и положительным зарядом молекулы образующим ионные каналы. [1. Будихина А.С. 2008].
У лиц со здоровым пародонтом в СДБ выявлена высокая концентрация HNP-α (946,3±16,7 пг/мл), что коррелирует (r=0,5 р<0,03) с Ил-8 (21,61±8,8) и отражает влияние хемокина на уровень пептида. ААТ (0,183 ± 0,2) блокируют активность HNP-α в СДБ, что подтверждается корреляционной связью (r=0,7 р<0,004). При ХГ содержание пептида (900,6±69,3) в СДБ остается значительным, и коррелирует (r=0,4 р<0,12) с высоким уровнем Ил-8 (440,70±27,6). Прослеживаются следовые значения аАТ (0,091±0,1), это дает возможность пептиду участвовать в иммунном ответе в полном объеме. Низкая концентрация НNP-α (709,1±224,8) в СПК при ХП возможно является следствием потребления пептида в ходе воспаления или уменьшения ИЛ-8 (42,39±25,2), или активного синтеза аАТ (0,215±0,1), что является блокирующим эффектом работы пептида и предполагает защитный механизм от разрушающего действия, сохраняя воспалительный процесс стабильно хроническим.. Но ни одна из двух последних причин не нашла своего подтверждения в корреляционном анализе.
В РЖ уровень HNP-α (105,7±14,9) здорового пародонта в 9 раз ниже, чем в СДБ, так как нейтрофилы в полости рта менее активны, чем в зубодесневой бороздке [2. А.С.Григорьян 2004, 8. Lakschevitz F.S. 2012]. В свою очередь концентрация аАТ (0,183±0,2) класса sIgА на хо дится на более высоком уровне и блокирует активность пептида и не дает развиться асептическому воспалению. При ХГ (303,5±20,4) и в большей степени при ХП (519,0±20,5) содержание пептида в РЖ повышается, что отражает активность местного иммунитета и характеризует его интенсивность в борьбе с патогенной микрофлорой. Уровень аАТ класса sIgА этих нозологических групп регистрировался на низших значениях (108±0,04) и (135,0±0,1) соответственно, это в свою очередь позволяет функционировать HNP-α в полном объеме.
Концентрация НNP-α в СВ (271,6±23,3) у пациентов без ВЗП коррелировала (r=0,5 р<0,03) с уровнем аАТ (0,237±0,1) класса Ig G, что является необходимым во избежание системного воспаления. В СВ как при ХГ (477,8±24,5), так и ХП (402,0±22,9) содержание НNP-α увеличивается по сравнению со здоровыми, что возможно объясняется способностью некоторых пародонтопатогенных микроорганизмов проникать в сосудистое русло [ 6. G. Hajishengallis 2002]. Содержание аАТ при ХП (402,0±22,9) класса Ig G значительно выше по сравнению со здоровыми (р <0,05) и ХГ (0,188±0,3), это предполагает защитный механизм от разрушающего действия пептида на системном уровне, сохраняя воспалительный процесс стабильно хроническим.
HSC – 70 постоянно присутствуют в клетке, участвует в реорганизации частично денатурированного белка и доставляет деградированные протеины в лизосомы. Высвобождаясь во внеклеточное пространство, блокирует передачу пролиферативных, апоптотических, воспалительных сигналов [4. В.Н.Титов 2010, 7. L. E.Hightower 2000].
У здоровых лиц содержание HSC–70 в РЖ было несколько выше (0,497±0,1 р2 <0,05), чем в СДБ (0,305±0,1) и СВ (0,239±0,2), что на наш взгляд, свидетельствует о динамичном равновесии регулируемого гомеостаза организма. Определялась концентрация аАТ класса sIgА в высоких значениях в РЖ (0,762±0,1), снижение в СБД (0,345±0,1) и минимальное в СВ (0,257±0,1) класса Ig G. Умеренная корреляционная связь между HSC – 70 в СДБ и уровнем аАТ класса sIgА (r=0,5 р<0,02), что объясняется необ ходимостью поддерживать оптимальный уровень микроэкологии полости рта.
При ХГ высокие значения HSC – 70 регистрировались в СДБ (2,51±1,1), умеренные в РЖ (1,02±0,4 р <0,05), несколько снижались в СВ (0,899±0,4) хо тя уровень аутоантител был обратно пропорционален и наблюдался в значительных концентрациях в РЖ (0,987±0,2 р <0,05) по сравнению с СДБ (0,519±0,2) и минимальным в СВ (0,337±0,2). В дополнение к этому определяется умеренная корреляция между HSC – 70 и аутоантителами класса sIgА в СДБ (r=0,4 р<0,09).
ХП знаменуется подъемом уровня HSC – 70 в РЖ (2,522±1,03) . Но высокое содержание аАТ (1,56±0,7) класса sIgА тормозит провоспалительную деятельность белка. Данный факт отражает хроническое течение воспалительного процесса, что подтверждается корреляционной связью (r=0,6 р<0,01). В СПК содержание пептида (1,41±0,7) и аАТ (1,238±0,3) класса sIgА снижено по сравнению с РЖ (р 2 <0,05), что связано с потреблением белка в хо де реакции воспаления. Сильная корреляция между HSC – 70 и аАТ (r=0,6 р<0,01), подтверждает блокирующий ме ханизм последних в отношении белка, со храняя воспалительный процесс стабильно хроническим. В СВ (0,405±0,7) концентрация HSC – 70 уменьшалась по сравнению ХГ (р1 <0,05), но в противоположность к этому уровень аАТ (1,053±0,6) значительно выше, чем у лиц без ВЗП (р <0,05) и при ХГ(р1 <0,05), что тормозит работу пептида и снижает его презентативные свойства для А ПК [9. M Nishikawa 2008.].
Выводы. Таким образом, уровень HNP-α и HSC – 70 отражает иммунный потенциал полости рта при ВЗП. Аутоантитела и хемокин Ил-8 способны регулировать концентрацию пептидов у лиц со здоровым пародонтом и пациентов с хроническим гингивитом и пародонтитом.
Список литературы
1. Будихина А.С. α-Дефезины – антимикробные пептиды нейтрофилов: свойства и функции / А.С. Будихина, Б.В. Пинегин // Иммунология. – 2008. – N 5.-С.317-320.
2. Григорьян А.С. Болезни пародонта / А.С. Григорьян, А.И. Грудянов, Н.А. Рабухина. – М. : МИА, 2004. – С. 28– 229.
3. Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н. Аутоиммунные механизмы регуляции системы гемостаза // Сибирский онкологический журнал. – 2005. – № 1.(13) – С. 88-95.
4. Титов В.Н., Крылин В.В. Стресс, белки-шапероны, нарушение биологической функции эндоэкологии и биологических реакций экскреции, воспаления и артериального давления. / В.Н.Титов, В.В.Крылин, // Клиническая лабораторная диагностика. – 2-10. – №5. – С. 20-35
5. Цыбиков Н.Н., Кузник Б.И. Аутоантитела как основные регуляторы гомеостаза в норме и патологии /Н.Н.Цыбиков, Б.И. Кузник // Вопросы патогенеза типовых патологических процессов : Труды IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. – Новосибирск. – 2012г. – С. 303 - 305.
6. Hajishengallis G., Sharma A., Russell M.W., Genco R.J. Interactions of Oral Pathogens With Toll-Like Receptors: Possible Role in Atherosclerosis / Annals of Periodontology. – 2002. – Vol. 7. – № 1 – Р. 72–78.
7. Hightower L. E. The heat shock response, a brake on inflammation // Molecular Chaperones and the heat shock response: Cold Spring Harbor, N. Y. – 2000. –. 118 р.
8. Lakschevitz F.S. Oral Neutrophils Display a Site-Specific Phenotype Characterized by Expression of T-Cell Receptors/ F.S. Lakschevitz, G.M. Aboodi, M.Glogauer // J. Periodontology. – 2012. – V. 3. – Р. 1493-1503.
9. Nishikawa M , Таkеmоtо S., Таkаkurа Y. Heat shock protein derivatives for delivery of antigens to antigen presentigs cells / M Nishikawa , S.Таkе mоtо, Y Таkаkurа.// International J. Pharmaceutics. – 2008. – Vol. 354 (1- 2) – Р. 23-7.
