2,4-Дитретбутилфенол (агидол-10) (в дальнейшем 2,4-диТБФ) применяется в производстве неионных ПАВ, пластификаторов, антиоксидантов, стабилизаторов, синтетических смол, пестицидов. Известно также применение 2,4-диТБФ в медицинской промышленности [2, 4].
По физическим свойствам это прозрачные кристаллы от светло до темно-желтого цвета, не растворим в воде, хорошо растворяется в этаноле, ацетоне, толуоле, нормальных парафина х.
2,4-диТБФ, как и многие другие алкилфенолы, обладает токсическими свойствами по отношению к теплокровным животным и человеку. Описаны случаи отравления алкилфенолами, в том числе с летальным ис ходом [1].
Отравления могут происходить при контакте с подобными веществами в процессе их производства, применения, вследствие загрязнения объектов окружающей среды выбросами в атмосф еру и сточными водами предприятий, при авариях, сопровождающихся разливом значительных количеств топлива, содержащего антиоксиданты.
Токсичность и широкое применение 2,4-диТБФ обусловливают его важное химико-то ксикологическое значение. Представляется необходимым разработка методик определения 2,4-диТБФ в биожидкостях, которые могли бы применяться при проведении химико-токсикологических экспертиз.
Цель настоящей работы - разработка методики количественного определения 2,4 -диТБФ в биологических жидкостях (крови и плазме), которая отличается необходимой селективностью и точностью.
Материалы и методы исследования
Объект исследования - 2,4-дитретбутилфенол (2,4-диТБФ) с содержанием основного вещества ≥ 99%. Аналитическим методом явилась производная спектрофотометрия, позволяющая уменьшить влияние фонового поглощения эндогенных веществ биожидкостей на спектрофотометрическое определение веществ, извлечѐнных из биологического материала.
Электронный спектр поглощения 2,4-диТБФ в среде этанола в интервале длин волн 190 -360 нм обнаруживает выраженную полосу поглощения, достаточно близкую по форме к Гауссовой кривой в области 260-290 нм. Для количественного определения рассчитывали производные второго порядка в области максимума поглощения 283 нм. Данные для расчѐта производных спектров получали, измеряя оптическую плотность растворов 2,4-диТБФ в этаноле в диапазоне 190-360 нм. Оптическую плотность снимали через каждые 5 нм (прибор СФ-56; кюветы с толщиной рабочего слоя 10 мм) на фоне этанола.
Производные спектров рассчитывали методом численного дифференцирования. Для снижения влияния шума, при пере ходе от первых ко вторым производным, уменьшали шаг дифференцирования.
УФ-спе ктр 2,4-диТБФ в этаноле, а также его производная второго порядка представлены на Рисунках 1 и 2.


Рис.1. УФ-спектр 2,4-диТБФ в этаноле (0,004% раствор)


Рис.2. Производные второго порядка для спектра 2,4 -диТБФ в этаноле (0,004% раствор)

Построение градуировочного графика. Измеряли оптические плотности ряда стандартных растворов 2,4- диТБФ в этаноле на приборе СФ-56 с шагом 5 нм и рассчитывали производные второго порядка для каждого раствора. Значения второй производной, взятые по модулю, умножали на 1000. По результатам измерений строили график зависимости второй производной (A′′•1000) в области 284 нм от концентрации 2,4-диТБФ в исследуемом растворе и рассчитывали уравнение градуировочного графика, которое в данном случае имело вид: (A′′•1000) = 9,28325•С +5,10899, где С – содержание анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.
Определение 2,4-диТБФ в биожидкостях. Готовили модельные смеси 2,4-диТБФ с биологическим материалом, содержащие 2,5-50 мг вещества в 25 г биологической жидкости (крови или плазм ы крови человека). Осуществляли двукратное изолирование 2,4-диТБФ из модельных смесей (навеска 5 г) смесью растворителей ацетон-этилацетат в соотношении 1:1 (по объѐму) при соотношении изолирующего агента и биологического материала 2:1 (по массе). Продолжи тельность каждого настаивания - 45 минут [3]. Полученные извлечения из каждой модельной смеси объединяли, точное количество объединѐнного извлечения наносили на пластины ТСХ «Сорбфил» с люминесцентным индикатором и хроматографировали в подвижной фазе гекса н-хлороформ (5:5 по объѐму) в присутствии вещества-свидетеля. Хроматограммы детектировали в УФ-свете. Элюировали исследуемое вещество из сорбента этанолом (10 мл) в течение 15 минут. Оптическую плотность полученного элюата измеряли на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм на фоне элюата, полученного при исследовании контрольного образца биожидкости, в диапазоне 190 -360 нм с шагом 5 нм. Рассчитывали производные второго порядка. Количество 2,4-диТБФ в извлечениях на хо дили, используя полученное выше уравнение градуировочного графика.
Результаты пяти параллельных определений различных концентраций 2,4-диТБФ в биологическом материале представлены в Табл.1.
                                                                                                                            Таблица 1
Результаты количественного определения 2,4-диТБФ в биожидкостях методом производной спектрофотометрии (n = 5; P = 0,95)

Биологический объект	Внесено 2,4-диТБФ, мг в 25 г биологического объекта	Найдено, %
		х	S х	S	Dх
Кровь	2,50	89,45	3,06	6,84	8,52
	5,0	89,86	2,86	6,39	7,96
	10,0	90,12	2,62	5,86	7,47
	25,0	90,27	2,45	5,48	6,88
	50,0	90,39	2,24	5,01	6,42
Плазма крови	2,50	90,24	2,85	6,37	7,94
	5,0	90,95	2,57	5,75	7,26
	10,0	91,31	2,38	5,31	6,63
	25,0	91,47	2,29	5,12	6,40
	50,0	91,68	2,16	4,83	6,19

Как свидетельствуют полученные данные, разработанная методика позволяет селективно определять 89,45-91,68% 2,4-дитретбутилфенола в извлечениях из биожидкостей (крови и плазмы крови) человека в присутствии соэкстрагирующихся веществ биоматериала с достаточной д ля подобного рода исследований воспроизводимостью и правильностью. При содержании 2,5-50,0 мг анализируемого вещества в 25 г биологического объекта значения полуширины доверительного интервала составляют 8,52-6,42 (исследование плазмы) и 7,94-6,19 (исследование крови).
Выводы
1. Методом численного дифференцирования рассчитаны вторые производные электронного спектра 2,4 - дитретбутилфенола в этаноле.
2. Показана возможность применения производной спектрофотометрии второго порядка для определения 2,4-дитретбутилфенола в извлечениях из биожидкостей.

Список литературы

1. Асташкина А.П., Шорманов В.К., Киричек А.В., Симонов Е.А., Су хомлинова Е.А., Гришечко О.И. Определение 2-метокси-4-аллилгидроксибензола при химико-токсикологическом исследовании биологического материала // Судебно-медицинская экспертиза. -2012.- № 6. - С. 42-45.
2. Грушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных вода х. - Л.: Химия, 1982. - 216 с.
3. Шорманов В.К., Коваленко Е.А., Дурицын Е.П., Маслов С.В., Галушкин С.Г., Прониченко Е. И. Определение карбофурана при судебно-химическом исследовании биологического материала // Судебно- медицинская экспертиза.-2013.-Т. 56, № 4.-С. 30-34.
4. Zarudii F.S., Gil’mutdinov G.Z., Razudii R.F., Myshkin M.A., Gershanov F. B. and Novikov T.A. Drug synth esis methods and manufacturing technology 2,6- di-tert-butyl-4-methylphenol (dibunol, ionol, tonarol): a classical antioxidant // Pharmaceutical chemistry journal. - 2001. - Vol. 35, N 3. - P. 162-168.