ХРАНЕНИЕ ШТАММОВ ЭЙМЕРИЙ КУР В КОЛЛЕКЦИИ ПАРАЗИТИЧЕСКИХ ПРОСТЕЙШИХ

В работе приведены условия хранения и порядок пересева аттенуированных штаммов: Л–2–15 E. acervulina, Л–4–18 E. necatrix, Л–1–23 E. tenella и Л–3–2 E. maxima, из коллекции ВНИВИП - филиала ФГБНУ ВНИТИП РАН. Показано сохранение жизнеспособности культур и стабильности биологических свойств штаммов в процессе хранения. Полученные результаты по репродуктивному индексу и продолжительности препатентного периода исследованных культур совпадают с таковыми, указанными в паспортах на штаммы эймерий.

Ключевые слова: эймерии, штамм, препатентный период, часов после заражения (чпз), шизонты Коллекции микроорганизмов объединяют уникальные микробиологические ресурсы и являются неотъемлемой частью любого биотехнологического изыскания. Они гарантируют сохранение микробного разнообразия, предоставление широкого спектра микроорганизмов и информации о них для научных, образовательных, производственных и других учреждений.

Коллекции по своим функциям обычно подразделяются на исследовательские, созданные в процессе выполнения конкретных научных задач, и сервисные, обеспечивающие проведение фундаментальных, прикладных, в том числе и поисковых скрининговых исследований.

Коллекция эймерий ВНИВИП филиала ФГБНУ ВНИТИП РАН является единственной коллекцией паразитических одноклеточных простейших в РФ. Она создана в процессе выполнения научно- исследовательских работ по изучению видового разнообразия и биологических особенностей эймерий кур, а также вопросов химиопрофилактики и иммунопрофилактики кокцидиозов домашней птицы.

Основу коллекции эймерий составляют аттенуированные лабораторные штаммы видов E. tenella, E. acervulina, E. necatrix, E. maxima.

Поддержание штаммов эймерий в лабораторных условиях осуществляется пассажированием через организм восприимчивой птице. Этот процесс трудоёмкий, продолжительный во времени и требующий аккуратности в исполнении, поскольку всегда существует вероятность загрязнения культуры эймерий другими видами паразита.

Аттенуированные  культуры  получены  из  полевых  изолятов  эймерий,  поэтому  существует вероятность возвращения вирулентных и репродуктивных свойств в исходное состояние. Поэтому помимо поддержания жизнеспособности штаммов, исследуется стабильность биологических свойств паразитов по ряду критериев: продолжительность препатентного периода, репродуктивный индекс, степень поражения в отделах кишечника у инвазированной птице.

Цель работы – поддержание жизнеспособности штаммов эймерий в лабораторных условиях и сохранение стабильности их биологических свойств.

Проведено шесть пассажей аттенуированных штаммов эймерий кур, хранившихся в 2,5 % растворе калия двухромовокислого 5 – 7 месяцев при температуре (6 – 8)°С, через организм восприимчивой птицы: по два штамма Л–2–15 E. acervulina и штамма Л–4–18 E. necatrix; по одному штамма Л–1–23 E. tenella и штамма Л–3–2 E. maxima.

Размножение эймерий проводили на цыплятах-бройлерах, полученных из хозяйства благополучного по инфекционным и паразитарным болезням. Птицу выращивали до 7 - 19 суток в условиях исключающих спонтанное заражение паразитами. Формировали группы от 4 до 20 голов птицы. Помёт от цыплят- бройлеров, начиная с возраста 5 суток, до момента заражения и после заражения в течение препатентного периода исследовали на наличие ооцист.

Заражение цыплят, получение ооцист, подсчет их количества проводили по общепринятым методикам. Помет от зараженных цыплят собирали за четыре дня патентного периода (за этот период обычно выделяется от 95 до 98% ооцист при однократном заражении).

Видовую чистоту штаммов оценивали по биометрическим, морфологическим характеристикам ооцист, продолжительности препатентного периода, а также по локализации эндогенных стадий развития паразита в слизистой кишечника инвазированной птицы. С этой целью умерщвляли 1-2 головы на третий, четвёртый или пятый день после заражения (в зависимости от вида паразита и продолжительности эндогенного развития).

В результате проведённых исследований установлено, что препатентный период штамма Л–2–15 E. acervulina составляет 93-94 часов после заражения (чпз); количество ооцист, выделенных в расчете на одну голову, колеблется от 102 до 300 млн. (таблица 1). На третьи сутки после заражения (72 чпз) в соскобах с эпителия двенадцатиперстной кишки обнаруживают шизонты и свободные мерозоиты. Вид E. acervulina является самым репродуктивным видом эймерий.

Препатентный период штамма Л–4–18 E. necatrix длится 120 чпз; количество ооцист, выделенных в расчете на одну голову, колеблется от 1,0 до 2,7 млн. (таблица 2). На четвертые сутки после заражения (96 - 100 чпз) в соскобах с эпителия среднего отдела тонкой кишки обнаруживают небольшие скопления крупных шизонтов (размер до 80 мкм). Данный вид эймерий является самый низкорепродуктивным.

У штамма Л–1–23 E. tenella препатентный период составляет 116 чпз; количество ооцист, выделенных в расчете на одну голову, - 16 млн. (таблица 3). На пятые сутки после заражения (120-124 чпз) в соскобах со слизистой оболочки слепых отростках кишечника обнаруживают большое количество шизонтов, гамонтов и ооцист.

Препатентный период штамма Л–3–2 E. maxima длится 120 чпз; количество ооцист, выделенных в расчете на одну голову, - 3 млн. (таблица 4). На пятые сутки после заражения (120-125 чпз) в соскобах со слизистой среднего отдела тонкой кишки обнаруживают небольшие скопления шизонтов в виде островков.

Таблица 1 – Культуральные свойства штамма Л–2–15 E. acervulina при пассажировании через организм восприимчивой птицы

Таким образом, проведенные исследования показывают, что свойства аттенуированных штаммов E. acervulina, E. maxima, E. tenella, E. necatrix, после хранения и очередных пассажей через организм восприимчивой птицы, стабильны и соответствуют биологическим критериям вида.

В литературе подробно описаны свойства аттенуированных штаммов E. tenella [1], E. mitis [2], E. acervulina [3], E. maxima [4], E. necatrix [5].

Таблица 2 – Культуральные свойства штамма Л–4–18 E. necatrix при пассажировании через организм восприимчивой птицы

Таблица 3 – Культуральные свойства штамма Л–1–23 E. tenella при пассажировании через организм восприимчивой птицы

Таблица 4 – Культуральные свойства штамма Л–3–2 E. maxima при пассажировании через организм восприимчивой птицы

Штамм H E. acervulina аттенуирован серией пассажей через организм восприимчивой птицы. После одиннадцати пассажей продолжительность препатентного периода составляла 72-74 часа, а выход ооцист 640,0 тыс. [3].

Аттенуация E. maxima серией пассажей на восприимчивой птице, описанная в работе V. McDonald с соавторами, позволила сократить по времени препатентный период с 120 часов и менее [4]. Наши данные совпадают с полученными результатами.

Продолжительность  препатентного  периода  и  репродуктивный  потенциал  штамма  Л–4–18 E. necatrix совпадают с таковыми штамма HP E. necatrix, полученного и описанного M. W. Shirley и M. A. Bellatti [5].

Список литературы

1.                   Jeffers, T. K. Attenuation of Eimeria tenella through selection for precociousness / T. K. Jeffers // J. Parasitol. – 1975. – V. 61 - P. 1083–90.

2.                   McDonald, V. and Ballingall, S. Attenuation of Eimeria mivati (=E. mitis) by selec-tion  for precocious development / V. McDonald, S. Ballingall // Parasitology. – 1983. – V. 86. – P. 371-379.

3.                   McDonald, V., Ballingall, S. and Shirley, M. W. A preliminary study of the nature of infection and immunity in chickens given an attenuated line of Eimeria acervulina / V. McDonald, S. Ballingall, M. W. Shirley // Parasitology. – 1982. – V. 84. P. 21-30.

4.                   McDonald, V., Shirley, M. W. and Bellatti, M. A. Eimeria maxima: characteristics of attenuated lines obtained by selection for precocious development in the chicken / V. McDonald, M. W. Shirley and M. A. Bellatti // Experimental Parasitology. – 1986. – V. 61. – P. 192-200.

5.                   Shirley, M. W. and Bellatti, M. A. Eimeria necatrix: production and characteristics of a precocious line / M. W. Shirley and M. A. Bellatti // Avian Pathology. – 1984. – V. 13. – P. 657-668.