Чебоксары
13 октября 2015г.
Гломерулярное поражение почек – гломерулонефрит (ГН) является одной из серьезных медико-экономических проблем. В основе гломерулярного поражения при ГН лежит иммуновоспалительный процесс [3]. Различия в механизмах иммунопатологического повреждения клубочков обусловливают существование многообразия клинических вариантов ГН – мочевого (латентного) ГН, гипертонического, нефротического и смешанного. В последние годы получено много данных об участии цитокинов в патогенезе различных морфологических форм ГН [1, 3]. Однако к настоящему времени не исследовано влияние про- и противовоспалительных цитокинов на состояние иммунной системы больных различными клиническими вариантами ГН. С целью изучения данного вопроса было проведено обследование 86 больных ГН, проходивших стационарное лечение в нефрологическом отделении БУ «Республиканская клиническая больница» Минздравсоцразвития Чувашии. Длительность заболевания – от дебюта ГН до 30 лет (в среднем 9,4 ± 8,1 года). В дебюте заболевания исследовано 16 больных (острый ГН), в обострении хронического ГН – 70 пациентов. Среди обследованных – 36 женщин и 50 мужчин. Обследованные пациенты были разделены на 4 клинические группы, рандомизированные по полу, возрасту, представленности различных морфологических форм. Группа I (n=30) включала больных латентным вариантом ГН, группа II(n=20) – нефротическим вариантом, группа III(n=18) – гипертоническим и группа IV(n=18) – смешанным.
Методы исследования. Помимо общепринятых исследований проводили количественное определение концентрации основных циркулирующих в крови цитокинов – интерлейкина-1β (IL-1β), интерлейкина-2 (IL-2), интерлейкина-10 (IL-10), интерферона-γ (IFN-γ) и рецепторного антагониста IL-1β – Rа-IL-1β методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием стандартных наборов («Цитокин», С-Петербург) в соответствии с прилагаемой к набору методикой. Оценка иммунного статуса включала: определение концентрации циркулирующих иммунных комплексов методом осаждения полиэтиленгликолем -6000, сывороточных иммуноглобулинов – IgM, IgG, IgA методом радиальной иммунодиффузии в геле, иммунофенотипирование лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител CD3, CD4, CD8, CD20, CD25, CD95 («Cорбент», Москва), исследование фагоцитарной активности в латекс-тесте [2]. Объектом исследования служила венозная кровь. Исследования проводили до начала лечения (на 2-3 сутки от момента поступления больных в стационар) и к концу стационарного лечения – на 12-14 сутки лечения. Полученные данные обрабатывали с использованием прикладного рабочего пакета статистического анализа «Statistica v. 6.0». Данные представляли в виде М±SD, где М – средняя арифметическая, SD– стандартное отклонение. При сравнении двух выборок для оценки достоверности различий применяли t-критерий Стьюдента (р). При асимметричном распределении совокупности значений показателей в группах вычисляли медиану (Ме), границы варьирования изучаемой совокупности определяли в пределах от нижнего до верхнего квартилей (Р25–Р75), а достоверность различий оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни (pm-w)для независимых группировок и Вилкоксона (pw) для сопряженных групп. Достоверность связи между двумя рядами наблюдений оценивали на основании вычисления коэффициента корреляции рангов Спирмена (rs), достоверность коэффициентов считалась приемлемой при prs<0,05.
Результаты исследования и обсуждение. Анализ показателей цитокинового профиля в клинических группах показал, что у пациентов с нефротическим ГН повышен относительно других групп больных исходный уровень провоспалительного цитокина IL-1β и снижен уровень IFN-γ, определенный на 12-14 дни стационарного лечения; у больных латентным ГН повышен исходный уровень IL -10, в то время как уровень Rа-IL-1β снижен (Табл.1). В последней группе больных снижались в процессе стационарного лечения уровни IL-1β и Rа-IL-1β. У больных нефротическим ГН снижалась концентрация IFN-γ.
Таблица 1
Особенности цитокинового профиля у больных различными вариантами ГН
Цитокины, пг/мл
|
Клинические варианты ГН
|
Латентный
|
Нефротический
|
Гипертонический
|
Смешанный
|
Me (P25; P75)
|
Me (P25; P75)
|
Me (P25; P75)
|
Me (P25; P75)
|
IL -1β
|
(1)
|
13,0(6,0;40,5)
|
68,3(15,3;216,7)#
|
13,8(5,3;141,6)
|
25,9(4,7;353,2)
|
(2)
|
8,2(3,2;18,2)*
|
57,0(12,1;127,1)
|
20,7(12,6;24,4)
|
35,3(20,9;209,9)
|
IL -2
|
(1)
|
29,8(18,4;83,3)
|
34,4(27,7;40,1)
|
32,7(18,7;61,2)
|
23,6(19,1;40,3)
|
(2)
|
30,5(17,8;80,4)
|
25,0(20,3;26,4)
|
30,4(17,8;41,7)
|
39,2(18,9;80,0)
|
IL -10
|
(1)
|
5,2(4,3;8,6)##
|
2,6(1,9;3,4)
|
2,7(1,8;3,5)
|
2,8(2,0;3,7)
|
(2)
|
2,8(2,5;4,2)
|
2,8(1,7;3,2)
|
2,7(2,3;2,9)
|
3,1(2,8;7,3)
|
Rа-IL-1β
|
(1)
|
442(266;634)#
|
1335(506;2425)
|
521(416;1729)
|
1300(353;1855)
|
(2)
|
413(136;760) *
|
963(260;1660)
|
1546(578;2313)
|
525(356;1600)
|
IFN-γ
|
(1)
|
74,2(41,1;142,4)
|
61,5(54,0;66,4)
|
56,1(44,8;77,7)
|
44,1(40,2;129,3)
|
(2)
|
56,8(48,6;171,2)
|
35,2(33,1;42,2)* ##
|
56,5(55,9;62,6)
|
78,9(51,6;107,0)
|
Примечания: (1) и (2) – уровни цитокинов на 2-3 дни и 12-14 дни стационарного лечения соответственно; * – рw< 0,05 – достоверность различия уровней (1) и (2); #– pm-w<0,05, ## – pm-w<0,01 – достоверность различия относительно значений больных другими вариантами ГН.
Известно, что продукция и биологические эффекты цитокинов теснейшим образом связаны с состоянием иммунной системы. Инициация иммунного ответа на инфекционные этиопатогены приводит к возбуждению большинства звеньев иммунного ответа и каскадной реакции системы цитокинов [4]. В этой связи определенный интерес представляют результаты изучения корреляционных связей уровней цитокинов и показателей иммунного ответа. Больше всего связей обнаружено у исходного уровняIL-1β, коррелировавшего отрицательно с исходным и конечным содержанием IgG (rs= -0,40,prs=0,006 и rs = -0,34, prs= 0,030 соответственно), положительно – с исходными уровнями IgА (rs = 0,34, prs=0,030)и IgM(rs = 0,46, prs= 0,003). В отличие от IL-1β, исходный уровень противовоспалительного цитокина – IL-10 находился в прямой связи с конечным уровнем IgG (rs = 0,46, prs= 0,003). Исходный уровень Rа-IL-1β имел корреляционные связи со значениями двух иммунологических показателей, определенными в конце стационарного лечения – прямую с уровнем IgM (rs = 0,46, prs= 0,003)и обратную с абсолютным числом CD25+-клеток(rs = -0,34, prs= 0,033).
С позиций установленных связей между показателями цитокинового и иммунного статуса можно объяснить выявленные в группах больных особенности иммунологических проявлений заболевания (Табл.2).
Таблица 2
Статистически значимые различия показателей иммунного статуса при различных вариантах ГН
Показатель, ед. измерения
|
Клинические варианты ГН
|
Латентный
|
Нефроти-ческий
|
Гипертони-ческий
|
Смешанный
|
M±SD
|
M±SD
|
M±SD
|
M±SD
|
IgM, г/л
|
(1)
|
1,6±0,6
|
2,4±0,5*
|
1,6±0,7
|
1,5±0,6
|
(2)
|
1,3±0,4*
|
1,6±0,8
|
1,8±0,7
|
2,1±0,8*
|
IgG, г/л
|
(1)
|
12,4±3,4
|
8,1±2,1*
|
11,4±3,2
|
10,4±2,8
|
(2)
|
13,5±2,1*
|
7,9±2,2*
|
11,5±3,5
|
9,5±3,7
|
IgA, г/л
|
(1)
|
2,0±0,7
|
2,5±0,6*
|
1,6±0,6
|
1,9±0,7
|
(2)
|
1,9±0,7
|
2,1±0,8
|
2,2±0,8
|
2,1±0,6
|
CD25+-клетки, ×109/л
|
(2)
|
111±58*
|
106±60
|
83±30
|
83±30
|
Примечания: (1) и (2) – значения показателей на 2-3 дни и 12-14 дни стационарного лечения соответственно; * – р< 0,05 –достоверность различия относительно значений больных другими вариантами ГН.
У больных нефротическим ГН, отличавшихся высоким исходным содержанием провоспалительного цитокина – IL-1β, были повышены исходные концентрации IgM и IgA, положительно коррелировавшие с уровнем данного цитокина. В то же время уровень IgG, отрицательно коррелировавший с уровнем IL-1β, у этих больных был снижен. У больных латентным ГН обнаружены максимальные значения исходной продукции противовоспалительного цитокина – IL-10 и уровня IgG в конце лечения, что также являлось отражением прямой корреляционной связи между парой этих показателей. Минимальный уровень Rа-IL-1β, выявленный у больных рассматриваемым вариантом ГН до лечения, определял наименьшее содержание IgM и максимальное абсолютное содержание CD25+-клеток в конце лечения.
Заключение. Выявлены различия в уровнях продукции про- и противовоспалительных цитокинов и коррелирующие с ними особенности в иммунном ответе у больных ГН в зависимости от формирующихся клинических вариантов заболевания. Наиболее заметное влияние на иммунологические показатели при различных вариантах ГН оказывал провоспалительный цитокин IL-1β, его рецепторный антагонист и противовоспалительный цитокин – IL-10, от уровня продукции которых зависело преимущественно гуморальное звено адаптивного иммунитета.
Список литературы
1. Корякова Н.Н. Патогенетические особенности различных клинико-морфологических вариантов хронического гломерулонефрита //Нефрология. - 2005. – Т. 9. - №1. – С.58-62.
2. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. - М.: Изд-во ВНИРО, 1995. – 219 с.
3. Ifuku M., Miyake K., Watanebe M. et al. Various roles of Th cytokine mRNA expression in different forms of glomerulonephritis //Am. J. Nephrol.– 2013 - Vol.38. – N 2. – P. 115-123.
4. Kawai T., Akira S. The role of pattern-recognition receptors in innate immunity: update on Toll-like receptors // Nat. Immunol. – 2010. – Vol. 11. – P. 373–384.
|