30 марта 2016г.
Введение
В настоящее время актуальным является поиск дополнительных источников лекарственного растительного сырья. Пищевые растения как возможные источники лекарственного растительного сырья для дальнейшего внедрения в фармацевтическую практику считаются наиболее перспективными. Например, интерес для изучения представляют такие объекты как коричник китайский и коричник цейлонский, которые широко используются в качестве пищевых растений (пряностей) в различных странах. Кора коричника широко используется в научной медицине многих стран. Монографии на кору коричника цейлонского представлены в Европейской [11], Британской [10], Испанской [14] и Украинской [2] фармакопеях, а монографии на кору коричника китайского приведены в Японской [15] и Китайской [13] фармакопеях.
Ранее проведенные нами исследования позволили установить, что кора коричника представляет значительный интерес для дальнейшего изучения и использования в отечественной медицине как источника ценных биологически активных веществ [6-8, 12]. В частности, в коре коричника цейлонского и в коре коричника китайского была идентифицированы сахара [9].
Целью данной работы являлась разработка и валидация методики количественного содержания сахаров в коре коричника.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования служили промышленные серии коры коричника (корицы), соответствующие требованиям ГОСТ 29049-91 "Пряности. Корица. Технические условия".
В основу методики количественного определения была положена методика количественного определения суммы полисахаридов и свободных сахаров, изложенная в ФС.2.5.0027.15 «Мать-и-мачехи обыкновенной листья» [5]. Количественное определение свободных моносахаров после гидролиза полисахаридов проводили методом спектрофотометрии после образования окрашенных комплексов моносахаридов с пикриновой кислотой в щелочной среде и последующим измерением оптической плотности при длине волны 470 нм.
Результаты исследования и их обсуждение
Для количественной оценки сахаров в коре коричника проводили экстракцию полисахаридного комплекса из сырья водой с добавлением хлористоводородной кислоты концентрированной, образование окрашенного комплекса продуктов гидролиза (моносахаридов) с пикриновой кислотой в щелочной среде и последующее измерение оптической плотности. В ходе разработки методики были изучены следующие параметры: измельченность сырья, соотношение сырья и экстрагента и время экстракции. В результате было установлено, что оптимальным является использование сырья измельченного до частиц, проходящих сквозь сито размера отверстий 1 мм, при однократной экстракции в течение 90 мин и соотношении сырья и экстрагента 1:100. Для подтверждения образования окрашенного комплекса моносахаридов с раствором пикриновой кислоты были сняты спектры поглощения окрашенных в красный цвет комплексов моносахаридов с пикриновой кислотой для сырье, а также спектр комплекса стандартного образца глюкозы с пикриновой кислотой. Спектр поглощения снимали на спектрофотометре «Сary-50» в интервале длин волн от 300 до 600 нм. Согласно полученным данным, продукты взаимодействия извлечения с пикриновой кислотой имели спектральные кривые идентичные спектральной кривой комплекса глюкозы с пикриновой кислотой.
Полученные окрашенные комплексы имели тот же максимум поглощения при длине волны 470 нм, что и комплекс глюкозы с пикриновой кислотой. Предложено проводить определение суммы моносахаридов после гидролиза полисахаридов в пересчете на глюкозу при аналитической длине волны 470 нм. Условия проведения анализа одинаковы для Коричника цейлонского коры и в Коричника китайского коры.
Валидацию методики проводили по следующим показателям: линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и правильность [1, 3, 4].
Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций гиперозида – 20%, 50%, 100%, 150%, 200%, от нормируемого значения. Значение оптической плотности рассчитывалось как среднее из трех измерений. Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции и если его величина близка единице, то совокупность данных можно описать прямой линией. Величина коэффициента корреляции должен быть не менее 0,995. Коэффициент корреляции в эксперименте составил 0,9958.
Повторяемость методики определяли на одном образце сырья в 6 повторностях в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов и оборудования. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно превышать 10 %. Он составил 4,88 %, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости.
Определение внутрилабораторной воспроизводимости методики проводили 2 инженера-химика на 3 образцах в трех повторностях. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно было превышать 15 %. Он составил 7,97 %, что указывает на прецизионности методики в условиях воспроизводимости.
Правильность методики устанавливали путем измерения количественного содержания суммы полисахаридов и свободных сахаров в пересчете на глюкозу в растворах, полученных путем добавления необходимого количества стандарта к исследуемому раствору для концентраций 119 %, 137 %, 156 %, 175 % (четыре уровня). Критерием приемлемости являлся средний % восстановления при использовании растворов концентраций 119 %, 137 %, 156 %, 175 % скорректированный на 100 % и его средняя величина должна находиться в следующих пределах 100+5 %. Показано, что % восстановления находился в пределах от 100,40% до 102,80 %, и его средняя величина составила – 101,50 %.
На основании полученных результатов данную методику можно считать прошедшей валидацию.
В ходе исследований установлено, что методика легко воспроизводима, доступна, не требует дорогостоящих реактивов. Она позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья коричника, используемое для получения лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые вещества.
Анализ предлагаемой методикой промышленных партий сырья показал, что сумма полисахаридов и свободных сахаров в пересчете на глюкозу колеблется для коры коричника цейлонского от 0,12 до 0,15 %, а для коры коричника китайского от 0,21 до 0,28 % (Табл.1).
Таблица 1 Результаты определения содержания суммы полисахаридов и свободных сахаров в коре коричника (среднее из 6 определений)
|
|
Содержание суммы полисахаридов и свободных сахаров в
пересчете на глюкозу, %
|
|
кора коричника цейлонского
|
|
Коричника кора цельная, «Spicery Shop»,
2012 г.
|
0,12
|
|
Коричника кора цельная, «Spicery Shop»,
2013 г.
|
0,15
|
|
Коричника кора цельная, «Sonnentor»,
2013 г.
|
0,14
|
|
Коричника кора цельная, «Sonnentor»,
2014 г.
|
0,15
|
|
кора коричника китайского
|
|
Коричника кора цельная, ООО «ПК
«МЭТР», 2012 г.
|
0,21
|
|
Коричника кора цельная, ООО «Здрава
Краса», 2012 г.
|
0,26
|
|
Коричника кора цельная, ООО «Здрава
Краса», 2013 г.
|
0,28
|
|
Коричника кора цельная, «Kota`nyi»,
2014 г.
|
0,24
|
Это позволяет предложить норму содержания биологически активных веществ для коры коричника цейлонского не менее 0,1 %, а для коры коричника китайского не менее 0,2 %.
Выводы
Разработана методика количественного определения суммы полисахаридов и свободных сахаров в пересчете на глюкозу в Коричника цейлонского коре и в Коричника китайского коре. Установлены параметры линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности разработанной методики. Предложена норма содержания биологически активных веществ в Коричника цейлонского коре и в Коричника китайского коре для включения в нормативную документацию на лекарственное растительное сырье.
Список литературы
1. Валидация аналитических методик (ОФС.1.1.0012.15) (http://193.232.7.107/feml).
2. Государственная фармакопея Украины. Дополнения 1.0–1.4// Харьков: Научно-экспертный фармакопейный центр. 2012 г.
3. Евдокимова О.В. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в столбиках с рыльцами кукурузы. //Фармация. -2008. №7. -С. 14-17.
4. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве пастушьей сумки// Журнал "Традиционная медицина". – 2011. - №1 (24). - С.50-53.
5. Мать-и-мачехи обыкновенной листья (ФС.2.5.0027.15) (http://193.232.7.107/feml).
6. Ненелева Е.В., Евдокимова О.В. Кора корицы: анализ фенольных соединений// Фармация. – №7.- 2014. – С.19-21.
7. Ненелева Е.В., Евдокимова О.В. Оценка содержания полифенолов в коре коричника цейлонского// Журнал «Вопросы обеспечения качества лекарственных средств». - №3 (8).- 2015 - С.44-47.
8. Ненелева Е.В., Евдокимова О.В. Содержание водорастворимых веществ в двух видах коричника// Журнал «Международный научный институт «Educatio»». - №3 (10)- 2015 – С. 9-10.
9. Ненелева Е.В., Евдокимова О.В. Сравнительный анализ состава свободных сахаров и органических кислот коры Cinnamomum zeylanicum Blume и коры Cinnamomum cassia (L.) C. Presl// Журнал «Сеченовский вестник». - №1 (15).- 2014 – С. 136-137.
10. British Pharmacopoeia. V. 1-4// British Pharmacopoeia Commission, 2013 (электронный ресурс).
11. European Pharmacopoeia. Seventh Edition. Vol. 1, Vol. 2, Supplement 7.1-7.8// EDQM, 2011–2012.
12. Evdokimova O.V., Neneleva E.V., Tarrab I., Glazkova I.Y. Comparison of Lipophilic Substances of the Bark of Chinese (Cinnamomum cassia (L.) C. Presl.) and Ceylon Cinnamon (Cinnamomum zeylanicum Blume)// World Applied Sciences Journal, 27 (1): 70-73, 2013.
13. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. V.1, V.2 // Beijing: China Medical Science Press, 2010, рр: 2970.
14. Real Farmacopea Española, 2 Edition, Supplement 2.1-2.2, 2002-2003, рр: 742.
15. The Japanese Pharmacopeia Sixteenth Edition// Pharmaceuticals and medical devices agency, 2011, рр: 2320.
