Ифосфамид (N,3-бис (2-хлорэтил) тетрагидро-2Н-1,3,2-оксазофосфорин-2-амин-2-окись) – это лекарственное вещество алкилирующего типа действия, являющееся по своей структуре производным бис-(β-хлорэтил) - амина. Широко применяется в медицине как противоопухолевое лекарственное средство [1].

По физическим свойствам представляет собой белый гигроскопичный кристаллический порошок с температурой плавления 49^оС. Растворим в воде, ацетоне, метиленхлориде.

LD₅₀ для крыс при пероральном введении составляет 143 мг/кг, для мышей штамма Balb/C при внутрибрюшинном введении – 694±14 мг/кг [5].В доступной литературе имеются данные об острых и летальных отравлениях этим веществом [3, 4].

Широкое применение ифосфамида, его высокая токсичность, наличие случаев летальных отравлений делают его потенциальным объектом химико-токсикологического анализа.

В то же время, ифосфамид в химико-токсикологическом отношении изучен недостаточно. В частности, в доступной литературе отсутствуют данные о его сохраняемости в трупном материале.

Целью данной работы явилось изучение сохраняемости ифосфамида в гнилостно разлагающемся биологическом (трупном) материале.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования явилась субстанция ифосфамида (производитель – ОАО «Верофарм») с содержанием основного вещества не менее 99%.

Изучение сохраняемости ифосфамида в гнилостно разлагающемся биологическом материале проводили при температурах–12⁰С, 1,5-2^оС, 8-10^оС, 18-22^оС и 36^оС.

Для этого готовили модельные смеси ифосфамида с мелкоизмельченной трупной печенью из расчета 0,2 г вещества на 100 гпечени. Полученные модельные смеси сохраняли при одной из указанных температур в плотно закрытых склянках темного стекла. В тех же условиях выдерживали контрольные образцы печени

Исследования модельных смесей и контрольных образцов проводили через 24 часа, на 3, 7, 14 сутки после их приготовления и далее через определенные промежутки времени до тех пор, пока исследуемое вещество не перестанет обнаруживаться в биоматериале. В каждом случае на анализ отбирали по 25 г модельной смеси или контрольного образца.

Изолирование ифосфамида из биоматериала проводили методом двукратного настаивания. Изолирующим агентом при этом являлся ацетон, продолжительность настаивания – 45 минут, масса ацетона, необходимая для одного настаивания – 50 г. Отдельные извлечения объединяли и испаряли растворитель. Сухой остаток растворяли в 10 мл ацетона – «исходный раствор».

Идентификация методом ТСХ. В выпарительную чашку вносили 0,2-2,5 мл «исходного раствора» и испаряли растворитель в токе воздуха до сухого остатка. Полученный остаток растворяли в небольшом объеме этанола и количественно переносили на линию старта пластины «Сорбфил» марки ПТСХ-АФ-А-УФ. Хроматографировали, используя элюент гексан-диоксан-пропанол-2 (10:5:1), в присутствии вещества-свидетеля. Полученные хроматограммы проявляли в УФ-свете, после чего рассчитывали значение абсолютной хроматографической подвижности (Rf)анализируемого вещества.

Идентификация и количественное определение методом УФ-спектрофотометрии. После хроматографирования методом ТСХ пятно вещества вырезали из пластины, помещали в пробирку, после чего элюировали вещество из сорбента этанолом двукратно порциями по 5 мл в течение 10 и 5минут. Элюаты объединяли и упаривали до сухого остатка. Вещество в сухом остатке нитровали 10% раствором нитрата калия в концентрированной серной кислоте. Исследовали светопоглощение полученных растворов в среде 10% раствора натрия гидроксида в интервале длин волн 200-400 нм на спектрофотометре СФ-56 в кварцевых кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм на фоне контрольного раствора. По величине оптической плотности, измеренной при 255,2 нм,по уравнениюградуировочного графика рассчитывали количественное содержание анализируемого вещества.

Результаты исследования

При идентификации ифосфамида методом ТСХ анализируемое вещество обнаруживается в УФ-свете в виде темного пятна на более светлом общем фоне пластины. Значение Rf вещества, извлеченного из биоматериала, совпадало с величиной Rf стандарта и составляло 0,58±0,02.

При определении методом УФ-спектрофотометрии ифосфамид идентифицировали по форме спектральной кривой и положению максимумов полос поглощения его аци-нитросоли (255±2 и 363±2 нм). Спектральная кривая аци-нитросоли ифосфамида, извлекаемого из биоматериала, в каждом случае имела характерную форму, близкую к форме спектральной кривой аци-нитросоли вещества-стандарта.

Уравнение градуировочного графика для фотометрического определения ифосфамида по поглощению продуктов его нитрования в УФ-области спектра имело вид: А=0,00867·С–0,00797, где А – оптическая плотность, С – концентрация анализируемого вещества (мкг/мл) [2].

Результаты исследования сохраняемости ифосфамида в гнилостно-разлагающемся трупном материале представлены на Рисунке 1.

Как свидетельствуют полученные данные, ифосфамид обнаруживается в гнилостно разлагающемся трупном материале в течение 2 недель при 36 °С, 3 недель при 18-22°С, 5 недель при 1,5-10 °С и 7 недель при –12 °С.

Установленные сроки сохранения ифосфамида в биоматериале могут быть использованы для оценки сроков наступления смерти и определения промежутка времени с момента гибели организма, в течение которого целесообразно проведение судебно-химических исследований.

Рис.1. Зависимость степени извлечения ифосфамида из биологического материала от температуры и длительности сохранения

Выводы

1. На примере модельных смесей с тканью печени изучена сохраняемость ифосфамида в гнилостно разлагающемся трупном материале.

2. Установлено, что сроки сохранения ифосфамида в гнилостно разлагающемся биологическом материале составляют 2-3 недели при 18-36 °С, 5 недель при 1,5-10°С и 7 недель при –12°С.

Список литературы

1.       Машковский, М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей / М.Д. Машковский. – М.: Новая волна, 2008. – 1206 с.

2.       Шорманов, В.К. Спектрофотометрическое определение циклофосфана и ифосфамида на основе получения их нитропроизводных / В.К. Шорманов, М.Л. Столяров // Научные ведомости БелГУ. Серия Медицина. Фармация. – 2014. – № 11 (182). – С. 256-259.

3.       Imtiaz, S. Ifosfamideneurotoxicty in a young female with a remarkable response to thiamine / S. Imtiaz, N. Muzaffar // J. Pak. Med. Assoc. – 2010. – Vol. 60, N 10. – Р. 867-869.

4.       Patel, P.N. Methylene blue for management of ifosfamide-induced encephalopathy / P. N. Patel // Ann. Pharmacother. – 2006. – Vol. 40, N 2. – Р. 299-303.

5.       Snyder, N.K. Circadian variation in the susceptibility of male Balb / C mice to ifosfamide / N. K. Snyder, M. H. Smolensky, B.P. Hsi // Chronobiologia. – 1981. – Vol. 8, N 1. – Р. 33-44.