28 октября 2016г.
2,6-Дитретбутилфенол (Агидол-0) - является базовым сырьевым продуктом для получения агидола -1 (4-метил-2,6-ди-третбутилфенола) и других эффективных фенольных антиоксидантов (светостабилизаторов, термостабилизаторов), защищает от окисления смазочные и трансформаторные масла, бензины, различные виды топлива.
По физическим свойствам это бесцветные прозрачные кристаллы хорошо растворимые в спирте, ацетоне, углеводородах нормального строения, толуоле, практически не растворимые в воде.
2,6-диТБГОБ находит применение в медицинской промышленности. Используется также в производстве антиоксидантов в авиационном топливе, стабилизаторов, синтетических смол, некоторых неионных ПАВ [1, 6].
2,6-Дитретбутилфенол, как и многие другие алкилфенолы, обладает токсическими свойствами по отношению к теплокровным животным и человеку. Описаны случаи отравления алкилфенолами, в том числе с летальным исходом [1, 2].
Токсичность моногидроксиаренов, в том 2,6-диТБГОБ, их широкое применение делают необходимым изучение данных веществ в химико-токсикологическом аспекте [3, 4].
До настоящего времени 2,6-диТБГОБ недостаточно хорошо изучен в химико- токсикологическом отношении. В частности, относительно мало изучена устойчивость вещества в биологических объектах и сохраняемость его в трупном материале [2, 5].
Цель настоящей работы - изучить сохраняемость данного соединения в гнилостно разлагающемся биологическом (трупном) материале.
Материалы и методы исследования.
Объектом исследования явился 2,6-дитретбутилгидроксибензол (2,6-диТБГОБ) (содержание вещества ≥99%).
Изучение сохраняемости 2,6-диТБГОБ в гнилостно разлагающемся трупном материале проводили при температурах 0-2оС, 8-10оС и 18-22оС.
Для этого к мелкоизмельченной (размер частиц 0,2-0,5 см) ткани трупной печени прибавляли исследуемое вещество (размер частиц 5-50 мкм) из расчета 0,1 г на 100 г печени и тщательно перемешивали печеночную ткань с веществом. Полученные искусственные смеси сохраняли в плотно закрытых склянках темного стекла, содержимое которых в дальнейшем периодически перемешивали. В подобных же условиях хранили контрольные образцы печени, не содержащие анализируемое вещество.
Искусственные смеси и контрольные образцы с целью определения 2,6-диТБГОБ исследовали через 1,5 часа после начала эксперимента и далее – через определенные равные промежутки времени – до тех пор, пока объект исследования не переставал обнаруживаться в трупном материале.
При этом в каждом опыте брали по 5 г искусственной смеси, содержащей исследуемое вещество или такое же количество контрольного образца печени и настаивали дважды по 45 мин с порциями этилацетата по 10 мл каждая. Отдельные извлечения объединяли и испаряли растворитель. Остаток растворяли в 5 мл ацетона.
Предварительная идентификация методом ТСХ. 1,5 мл ацетонового раствора вносили в выпарительную чашку, испаряли в токе воздуха при температуре 18-20оС до сухого остатка. Остаток растворяли в незначительном объёме ацетона (0,4-0,6 мл) и количественно переносили на линию старта пластины «Sorbfil» ПТСХ-АФ-А-УФ. Хроматографировали, применяя элюент гексан-ацетон (9,5:0,5), в присутствии вещества- свидетеля и проявляли хроматограммы в УФ-свете. Рассчитывали значение Rf анализируемого вещества.
Подтверждающая идентификация на основе образования аци-нитропроизводного. 1,5 мл ацетонового раствора вносили в выпарительную чашку, испаряли в токе воздуха при температуре 18-20оС до получения сухого остатка. Остаток обрабатывали 0,5 мл 10% раствора нитрата калия в концентрированной серной кислоте. Через 5 минут к реакционной смеси прибавляли 1 мл воды и 8,5 мл 10% раствора гидроксида натрия. Наблюдали появление окраски реакционной смеси.
Подтверждающая идентификация методом УФ-спектрофотометрии и количественное определение. После хроматографирования методом ТСХ пятно вещества вырезали из хроматограммы, элюировали вещество из сорбента этанолом15 минут и исследовали поглощение элюата в интервале длин волн 200-360 нм на фоне контрольного раствора. Оптическую плотность измеряли при 275 нм на фоне контрольного элюата. По уравнению градуировочного графика рассчитывали количество извлеченного 2,6- диТБГОБ.
Результаты и их обсуждение.
При обнаружении и проведении предварительной идентификации методом ТСХ анализируемое вещество проявлялось в УФ-свете в виде темного розово-коричневого пятна на более светлом общем фоне пластины. Идентифицировали 2,6-диТБГОБ по величине Rf, которая совпадала с величиной Rf стандарта и составляла 0,51±0,03.
В процессе подтверждающей идентификации на основе реакции образования аци- нитропроизводного 2,6-диТБГОБ идентифицировали по характерному жёлтому окрашиванию реакционного раствора.
При определении методом УФ-спектрофотометрии на основе особенностей поглощения в этаноле анализируемое соединение идентифицировали по характерной форме спектральной кривой и положению максимумов полос поглощения. Спектральная кривая, вещества, извлекаемого из биологического материала в каждом случае имела характерную форму, близкую к форме спектральной кривой вещества-стандарта.
В УФ-спектре 2,6-диТБГОБ, изолированного из биологического материала на различных сроках сохранения, обнаруживалось, как и в УФ-спектре стандартного вещества, присутствие двух выраженные полос поглощения: в области 210±2 нм и 275±1 нм.
Уравнение градуировочного графика для фотометрического определения 2,6- диТБГОБ по поглощению УФ- излучения в среде этанола имело вид:
А = 0,007912·C - 0,009748, где А-оптическая плотность, С – содержание анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.
Относительная ошибка среднего результата при определении 2,6-диТБГОБ методом УФ-спектрофотометрии не превышала 0,8 % (n=6; Р=0,95).
Результаты исследования сохраняемости 2,6-диТБГОБ в гнилостно- разлагающемся трупном материале в трёх различных температурных режимах представлены на рис. 1.
Рисунок 1 – Зависимость степени извлечения 2,6-диТБГОБ от температуры и
продолжительности сохранения биологического
материала
Как видно из представленного рисунка, количества 2,6-диТБГОБ, находимые в биологическом материале, последовательно уменьшались с увеличением
продолжительности сохранения биологических объектов для всех выбранных
температурных режимов сохранения. Отмечено, что при сохранении в режиме 0-2°С в
течение первого месяца с момента начала эксперимента уменьшение содержания 2,6- диТБГОБ в сохраняемом биоматериале было довольно незначительным. При температурах 8-10оС и 18-22оС отмечалось резкое падение содержания
анализируемого
вещества в гнилостно разлагающейся биологической матрице уже на третий день наблюдения.
Полученные данные показывают, что 2,6-диТБГОБ в гнилостно-разлагающемся
трупном материале может быть идентифицирован и количественно определён в
течение 14 месяцев в условиях сохранения при температурах от 0°С до 22°С.
Установленные сроки сохранения 2,6-диТБГОБ в биоматериале позволят при проведении экспертиз летальных отравлений данным соединением правильно оценить
целесообразность проведения химико-токсикологического исследования и ориентировочно предположить
давность наступления смерти по результатам проведения
подобного исследования.
Выводы.
1. На примере модельных смесей с тканью печени исследована сохраняемость 2,6- диТБГОБ в
гнилостно разлагающемся
трупном материале.
2. Показано, что при температуре 0-22оС продолжительность сохранения 2,6-диТБГОБ в
модельных смесях составляет
14 месяцев.
Список
литература
1.
Грушко
Я.М.
Вредные органические соединения в промышленных
сточных водах.
- Л.: Химия, 1982. - 216 с.
2.
Распределение гидроксибензола
и 4-метилгидроксибензола в организме
теплокровных животных при летальных отравлениях
/
Асташкина А.П., Пугачёва О.И., Шорманов
В.К. и др. // Фармация. – 2016.
– Т. 65, № 1. – С. 35- 38.
3.
Определение 2,4-дитретбутилфенола в биожидкостях методом
производной спектрофотометрии / В.К. Шорманов,
Е.П. Цацуа, А.П.
Асташкина, М.А. Останин // Проблемы современной медицины: актуальные
вопросы: Сборник научных трудов по итогам международной научно-практической конференции.
(Красноярск, 6 ноября 2014 г.). – Красноярск:
ИЦРОН, 2014. – С. 196-199.
4.
Особенности распределения
2,6-ди-трет-бутил-4-метилгидроксибензола в организме теплокровных животных
/
В.К. Шорманов,
О.И. Пугачёва,
А.П. Асташкина, Е.П. Цацуа // Судебно-медицинская экспертиза. – 2016. – Т. 59, № 1. – С. 29-34.
5.
Пат. 2456597 Российская Федерация.
Способ
определения
2-метокси-4- аллилгидроксибензола
в
биологическом материале
/
В.К. Шорманов, А.П.
Асташкина, М.К. Елизарова, А.В. Киричёк // заявитель и патентообладатель: ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU). - № 2011113156; Заявл.
05.04.2011;
Опуб.20.07.2012. – БИ. – 2012. – № 16
6.
Drug synthesis
methods and manufacturing technology 2,6- di-tert-butyl-4- methylphenol (dibunol, ionol, tonarol): a classical antioxidant
|
Zarudii
F.S., Gil’mutdinov G.Z., Zarudii R.F. e. a. // Pharmaceutical chemistry journal. - 2001. - Vol. 35, N 3. - P. 162-168.