ОПЫТ ИЗУЧЕНИЯ МУТАЦИЙ ГЕНОВ АНГИОТЕНЗИНОГЕНА И АНГИОТЕНЗИН- ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА ПРИ ГИПЕРТРОФИЯХ ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА

Гипертрофия левого желудочка (ГЛЖ) является прогностически неблагоприятным фактором при различных заболеваниях сердца [3]. Причины возникновения ГЛЖ разнообразны, она возникает не у всех больных при артериальной гипертензии (АГ) и ИБС. Не исключена роль генетического фактора в развитии ГЛЖ при указанных заболеваниях. В то же время, примером заболевания с генетически обусловенным развитием ГЛЖ является гипертрофическая кардиоимопатия (ГКМП) [1]. Генами – кандидатами, чьи мутации могут способствовать развитию АГ и ИБС, а также, вероятно, возникновению ГЛЖ при данных заболеваниях, являются гены, кодирующие белки ренин-ангиотензиновой системы. В то же время, есть данные о связи мутаций данных генов с особенностями течения ГКМП [2].
Цель работы – выявить возможную роль мутаций некоторых генов, связанных с развитием АГ и ИБС как факторов развития ГЛЖ, а также возможную роль данных мутаций в развитии ГЛЖ при ГКМП.
Материал и методы исследования. Обследованы 111 больных, 59 женщин и 52 мужчины. Средний возраст пациентов составил 50,8 ±12,1 года. Из их числа с ГКМП – 20 пациентов, 3 пациента – дети больных ГКМП. Остальные 88 больных имели АГ либо ИБС, либо их сочетание. У 9 пациентов имела место АГ как проявление гипертонической болезни (ГБ) I стадии, у 41 – ГБ II стадии. ГБ III стадии на фоне сочетания ГБ и ИБС выявлена у 36 пациентов, последствия острых нарушений мозгового кровообращения – у 3 больных. Сахарный дибет 2 типа имел место у 24 пациентов, 1 типа – у 3. Фибрилляция предсердий выявлена у 15 пациентов с АГ.
Проводили ЭКГ, ЭхоКГ и допплерэхокардиографию по стандартной методике. ГЛЖ определяли по индексу массы миокарда левого желудочка, согласно существующим рекомендациям [4]. Генетический анализ – выявление полиморфизмов генов ангиотензиногена (АГТ) и ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) с помощью полимеразной цепной реакции выполнялся на базе лаборатории биологического факультета ЧелГУ.
Определение однонуклеотидного полиморфизма T174M (rs 4762) гена ангиотензиногена (АГТ) проводилось с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР-РТ) с двумя парами аллель-специфичных праймеров с флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени (НПФ «Литех», Россия). Интерпретация результатов ПЦР-РТ: Генотип Т174Т – дикий тип (предпочтительный), благоприятный. Генотип Т174М – гетерозигота, генотип М174М – гомозигота по редкому (мутантному) аллелю. Последние два варианта полиморфизмов могут предрасполагать к развитию АГ, ИБС, особенностям течения ГКМП [2]. В 1 случае при ГКМП определить данный аллель не удалось по техническим причинам. Определение инсерции/делеции Alu- повтора (rs4646994) в гене ангиотензин I -превращающего фермента (АПФ) проводилось с помощью полимеразной цепной реакции с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в 2% агарозном геле (НПФ «Литех», Россия). Варианты интерпретации результатов: гомозигота по инсерции (генотип «ACE I/I»), гомозигота по делеции (генотип «ACE D/D»), гетерозигота (генотип «ACE I/D»). Присутствие D-аллеля предрасполагает к развитию АГ и ИБС, может отвечать за повышенную активность АПФ, предрасполагает к риску внезапной смерти при ГКМП [2,3].
Результаты и обсуждение. При проведении генетического анализа получены результаты, отраженные в Табл.1.

                                                                                                                             Таблица 1
Выявление полиморфизмов генов АГТ и АПФ в исследованной группе

Наличие генотипа Т174М (гетерозигота) выявлено у 24 (22%) пациентов, из них в 2 случаях при ГКМП (у членов одной семьи – брата и сестры). В 84 (76%) случаях имел место генотип Т174Т не предрасполагающий к развитию сердечно-сосудистых заболеваний. В 2 случаях, только при ИБС и АГ выявлен генотип М174М, наиболее неблагоприятный по развитию АГ и ИБС. В целом при ГКМП генотип Т174М обнаружен в 2 случаях, при АГ и/или ИБС – в 24 случаях (р >0,05). При исследовании инсерции/делеции Alu-повтора (rs4646994) в гене АПФ наиболее неблагоприятным по развитию ИБС и ГБ является первый вариант (ACE D/D), однако и при генотипе «ACE I/D» можно говорить о присутствии у больных так называемого D-аллеля, предрасполагающего к развитию сердечно-сосудистых заболеваний. В целом D-аллель выявлен в 77 (70%) случаях. У больных ГКМП и их родственников D-аллель обнаружен в 18 случаях, у прочих пациентов обследованной группы – в 59 случаях (р >0,05). При наличии D-аллеля ГЛЖ имела место у 64 больных, при его отсутствии – у 25 (р >0,05). Таким образом, изучаемые мутации у больных ГКМП и их родственников встречались с такой же частотой, как и у больных АГ и ИБС. При этом наиболее частым полиморфизмом оказался D-аллель гена АПФ, отмеченный у 70% исследованных.
Проведен корреляционный анализ для выявления возможной взаимосвязи между наличием соответствующих генных полиморфизмов и рядом клинических и структурно-функциональных параметров. В связи с разнородностью групп анализ выполнен раздельно для больных ГКМП (и их родственников) и группы пациентов с АГ и ИБС.
                                                                                                                             Таблица 2

 Корреляционная взаимосвязь между полиморфизмами генов АГТ и АПФ и структурно-функциональными параметрами при ГКМП

Как видно из таблицы, при ГКМП возможна прямая взаимосвязь наличия изученных полиморфизмов с массой миокарда ЛЖ, показателями его размеров в систолу и диастолу, а также с наличием диастолической дисфункции ЛЖ.
При проведении аналогичного корреляционного анализа у пациентов с ИБС и АГ для полиморфизмов гена АГТ достоверная корреляция обнаружена только с наличием диастолической дисфункции ЛЖ (r= 0,345992, p < 0,05).
Таким образом, не исключено влияние полиморфизмов генов АГТ и АПФ при ГКМП на ряд структурно- функциональных показателей левого желудочка и на выраженность его гипертрофии. Взаимосвязь D-аллеля с более выраженной ГЛЖ при ГКМП отмечали и ранее [2]. Фенотип D/D связан с повышенным риском внезапной смерти при ГКМП [2]. В то же время, для полиморфизма Т174М обычно указывают взаимосвязь с осложненным течением ГКМП, хотя большее значение этот полиморфизм имеет при АГ и ИБС, поскольку его выявление соответствует более высоким цифрам АД [3].
Выводы
1. Неблагоприятные варианты полиморфизмов гена АГТ отмечены при ИБС и АГ и у пациентов с ГКМП в равном числе случаев – у 2 из 23 пациентов с ГКМП и их родственников, у 26 из 88 пациентов с АГ и ИБС.
2. Неблагоприятные варианты полиморфизмов гена АПФ (D-аллель) встречались существенно чаще – у 18 из 23 пациентов с ГКМП и их родственников, у 59 из 88 пациентов с АГ и ИБС. Достоверных различий по частоте выявления указанных полиморфизмов АГТ и АПФ в зависимости от нозологии выявлено не было.
3. Не исключено неблагоприятное влияние полиморфизмов генов АГТ и АПФ при ГКМП в исследованной группе на выраженность гипертрофии левого желудочка, размеры его полости и диастолическую функцию.

Список литературы

1. Gersh B.J., Maron B.J., Bonow R.O. et al. 2011 ACCF/AHA Guideline for the Diagnosis and Treatment of Hypertrophic Cardiomyopathy. Circulation. 2011. Vol. 124. P. 2761-2796.
2. Беленков Ю. Н., Привалова Е. В., Каплунова В. Ю. Гипертрофическая кардиомиопатия. М.: ГЭОТАР- Медиа. 2011.392 с.
3. Кобалава Ж.Д., Котовская Ю.В., Моисеев В.С. Артериальная гипертония. Ключи к диагностике и лечению. М., 2009. 864 с.
4. Рекомендации по количественной оценке структуры и функции камер сердца. (Под ред. Ю.А. Васюка). Российский кардиологический журнал. 2012. 3 (95): 28 с.