Варикозная болезнь нижних конечностей встречается у 20–25 % трудоспособного населения развитых стран мира и является одним из самых распространенных заболеваний сосудистой системы (Кириенко А.И., 1996). Наиболее радикальным и эффективным методом лечения варикозной болезни по праву считается хирургическое вмешательство (Лосев Р.З., 2002). Однако послеоперационные рецидивы возникают достаточно часто - по данным разных авторов в 5-80% случаев, и являются актуальной проблемой хирургической флебологии [2-5].
Настоящее исследование посвящено обоснованию состава композитного фитогеля венотонизирующего действия.
В качестве биологического объекта использовали культуру клеток Parametium caudatum, которые легко культивировать и при исследовании их роста и размножения возможно быстро получить большой объем цифровой информации.
Для культивирования парамеций использовали среду Лозина-Лозинского при рН водной среды 6,2–7,8 и температурном оптимуме 20–26 °С. Пищей для парамеций служили живые дрожжи – Rhadotorula gracilis с добавлением пшеничной муки [1].
На первом этапе исследований нами были сконструированы экспериментальные базовые растворы экстрактов донника, календулы, каштана конского и солодки. Анализ данных литературы показывает, что в фитогелях венотонизирующего действия используют изучаемые растительные экстракты в следующих концентрациях: экстракт каштана конского – от 1% до 9%; экстракт солодки – от 0,5% до 5%; экстракт календулы
– от 0,5% до 3%; экстракт донника – от 1% до 3%. Поэтому для выбора оптимальной концентрации каждого компонента готовили базовые растворы экспериментальных образцов экстрактов в концентрациях, рекомендованных к применению.
Сконструированные базовые растворы экстрактов были подвергнуты изучению протективного (антиоксидантного и мембраностабилизирующего) действия, а именно, нами было изучено их влияние на продолжительность периода активности инфузорий в среде с добавлением клеточных ядов: раствора спирта этилового (14%) и раствора водорода пероксида (1%). Результаты исследований представлены в таблицах 1-4.

                                                                                                                       Таблица 1

 Влияние экспериментальных базовых растворов экстракта донника на продолжительность сохранения двигательной активности парамеций после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования	Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % -м растворе спирта этилового, мин.	Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.
1 % базовый раствор	4,99 ± 0,25	3,83 ± 0,11
1,5 % базовый раствор	5,57 ± 0,17	5,03 ± 0,21
2 % базовый раствор	6,49 ± 0,11	2,65 ± 0,16
2,5 % базовый раствор	4,81 ± 0,43	2,01 ± 0,15
3 % базовый раствор	4,47 ± 0,12	1,22 ± 0,05
Контроль	2,17 ± 0,23	0,86 ± 0,12

Воздействие экспериментальных базовых растворов экстракта донника в концентрации от 1% до 3% (Табл.1) приводило к удлинению периода активности инфузорий под воздействием 14% раствора спирта этилового в 2-3 раза по сравнению с контролем, а под воздействием 1% раствора пероксида водорода влияние базовых растворов экстрактов донника было не стабильным, о чем свидетельствует увеличение времени двигательной активности в 2-5 раз по сравнением с контрольным опытом. Наилучшие результаты показал 1,5% базовый раствор экстракта донника, который статистически значимо (р<0,05) удлинял время движения парамеций под воздействием раствора спирта этилового 14% в 2,5 раза, а под воздействием раствора водорода пероксида 1% – в 5 раз. Достаточно близким положительным эффектом обладает 2% базовый раствор экстракта донника, под действием которого мембраностабилизирующий эффект возрастал в 3 раза, однако, при этом наблюдали снижение антиоксидантного эффекта в сравнении с 1,5% базовым раствором в 2 раза.
Для изучения биологического действия экстракта календулы готовили базовые растворы экстракта в следующих концентрациях: 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5% и 3%. Результаты эксперимента представлены в Табл.2.

                                                                                                         Таблица 2

 Влияние экспериментальных базовых растворов экстракта календулы на продолжительность сохранения двигательной активности парамеций после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования	Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % -м растворе спирта этилового, мин.	Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.
0,5 % базовый раствор	4,57 ± 0,24	3,11 ± 0,15
1 % базовый раствор	8,07 ± 0,17	2,57 ± 0,25
1,5 % базовый раствор	4,96 ± 0,12	2,30 ± 0,19
2 % базовый раствор	4,35 ± 0,27	2,24 ± 0,16
2,5 % базовый раствор	6,05 ± 0,13	2,19 ± 0,18
3 % базовый раствор	4,08 ± 0,16	1,32 ± 0,15
Контроль	2,17 ± 0,23	0,86 ± 0,12

Анализ экспериментальных данных (Табл.2) свидетельствует о положительном влиянии экстракта календулы как в случае воздействия раствора спирта этилового 14%, так и раствора водорода пероксида 1%. При этом влияние 1% и 2,5% базовых растворов экстракта календулы оказывало максимальные антиоксидантный и мембраностабилизирующий эффекты. Действие 1% базового раствора экстракта при одновременном добавлении раствора спирта этилового 14% приводило в удлинению времени остановки движения инфузорий в 4 раза по сравнению с контролем (время остановки парамеций под действием раствора спирта этилового 14% в контроле 2 мин и под воздействием 1% базового раствора экстракта в сочетании с раствором спирта этилового 14% - 8 мин), а 2,5% базовый раствор экстракта календулы статистически значимо (р<0,05) увеличивал продолжительность двигательной активности инфузорий до 6 мин (в 3 раза).
Действие экспериментальных базовых растворов экстракта каштана (табл. 3) в концентрациях от 1% до 9% показывало снижение мембраностабилизирующего и антиоксидантного действия при увеличении концентрации экстракта каштана в базовом растворе по сравнению с контрольным опытом. Максимальное удлинение времени двигательной активности парамеций под воздействием токсиканта, преимущественно повреждающего липидную часть мембраны (раствора спирта этилового 14%), показал 4% базовый раствор экстракта (статистически значимое (р<0,05) удлинение продолжительности двигательной активности от 2 мин до 5 мин).
                                                                                                                          Таблица 3

 Влияние экспериментальных базовых растворов экстракта каштана на продолжительность сохранения двигательной активности парамеций после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования	Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % -м растворе спирта этилового, мин.	Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.
1 % базовый раствор	4,53 ± 0,19	2,03 ± 0,16
2 % базовый раствор	4,50 ± 0,15	2,07 ± 0,18
3 % базовый раствор	4,32 ± 0,16	1,94 ± 0,22
4 % базовый раствор	5,40 ± 0,20	1,80 ± 0,16
5 % базовый раствор	4,75 ± 0,17	1,30 ± 0,11
6 % базовый раствор	3,06 ± 0,17	1,41 ± 0,13
7 % базовый раствор	3,20 ± 0,15	1,38 ± 0,15
8 % базовый раствор	3,04 ± 0,15	1,17 ± 0,10
9 % базовый раствор	2,18 ± 0,14	1,12 ± 0,12
Контроль	2,17 ± 0,23	0,86 ± 0,12

Влияние токсиканта, повреждающего белковые структуры мембраны (раствора водорода пероксида 1%), практически не менялось при изменении концентрации экстракта каштана в базовом растворе (Табл.3).
Для изучения протективного действия экстракта солодки были приготовлены базовые растворы в следующих концентрациях: 0,5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5% (Табл.4).
                                                                                                                        Таблица 4

Влияние экспериментальных базовых растворов экстракта солодки на продолжительность сохранения двигательной активности парамеций после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования	Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % -м растворе спирта этилового, мин.	Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.
0,5 % базовый раствор	4,31 ± 0,13	1,31 ± 0,16
1 % базовый раствор	4,01 ± 0,14	1,28 ± 0,13
2 % базовый раствор	6,14 ± 0,25	1,26 ± 0,06
3 % базовый раствор	4,50 ± 0,14	1,15 ± 0,15
4 % базовый раствор	2,62 ± 0,16	1,18 ± 0,06
5 % базовый раствор	2,33 ± 0,05	1,14 ± 0,08
Контроль	2,17 ± 0,23	0,86 ± 0,12

Результаты острого опыта при одновременном воздействии клеточных ядов и исследуемых базовых растворов экстракта солодки показали, что максимальный протективный эффект имеет 2% базовый раствор экстракта, о чем свидетельствует удлинение времени остановки Parametium caudatum от 2 мин до 6 мин (в 3 раза) под воздействием раствора спирта этилового 14%. Одновременно с этим базовые растворы экстракта солодки практически не оказывали антиоксидантного действия.
На основании вышеизложенного для дальнейших исследований были выбраны следующие концентрации изучаемых экстрактов: экстракт донника – 1,5% и 2%, экстракт календулы – 1% и 2,5%, экстракт каштана конского – 4% и экстракт солодки – 2%. С выбранными концентрациями экстрактов были приготовлены 8 экспериментальных комплексных базовых растворов, составы которых представлены в Табл.5.

                                                                                                                     Таблица 5
Составы экспериментальных комплексных базовых растворов фитокомпонентов

Компонент	Содержание фитокомпонента в базовом растворе, %
	1	2	3	4	5	6	7	8
экстракт донника	2	1,5	2	1,5	2	1,5	2	1,5
экстракт солодки	2	2	2	2	2	2	2	2
экстракт календулы	2,5	2,5	2,5	2,5	1	1	1	1
экстракт каштана	-	-	4	4	-	-	4	4

С полученными экспериментальными комплексными базовыми растворами проводили исследования на культуре клеток Parametium caudatum в остром опыте, результаты которого представлены в таблице 6.

                                                                                                                            Таблица 6
Влияние экспериментальных комплексных базовых растворов на продолжительность сохранения двигательной активности парамеций после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования	Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % -м растворе спирта этилового, мин.	Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.
ЭКБР №1	4,43 ± 0,11	1,71 ± 0,09
ЭКБР №2	3,49 ± 0,27	1,93 ± 0,13
ЭКБР №3	2,39 ± 0,11	1,32 ± 0,09

Объект исследования	Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % -м растворе спирта этилового, мин.	Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.
ЭКБР №4	2,90 ± 0,15	1,46 ± 0,08
ЭКБР №5	5,05 ± 0,10	2,52 ± 0,18
ЭКБР №6	4,48 ± 0,15	1,36 ± 0,10
ЭКБР №7	3,00 ± 0,12	1,51 ± 0,11
ЭКБР №8	2,69 ± 0,14	1,19 ± 0,11
Контроль	2,17 ± 0,23	0,86 ± 0,12

Примечание: ЭКБР – экспериментальный комплексный базовый раствор

Результаты данного опыта (табл. 6) свидетельствуют, что протективный эффект в сравнении с контролем очевиден у экспериментального комплексного базового раствора №5: под его воздействием наблюдали статистически значимое удлинение времени двигательной активности Parametium caudatum по сравнению с контролем в 2,5 раза – от 2 мин до 5 мин при действии 14% раствора спирта этилового и от 1 мин до 2,5 мин при действии 1% раствора пероксида водорода.
Таким образом, экспериментальный комплексный базовый раствор экстрактов №5 выбран как оптимальный для разрабатываемого фитогеля венотонизирующего действия. Предлагаемая для геля фитокомпозиция имеет следующий состав (Табл.7).
                                                                                                                      Таблица 7

Состав фитокомпозиции для геля венотонизирующего действия

Компонент	Содержание, %
Экстракт донника	2
Экстракт солодки	2
Экстракт календулы	1

Список литературы

1. Володина Т.А. Обоснование оптимального состава композиций из растительных экстрактов с использованием биологического теста на парамециях / Т. А. Володина // Омский научный вестник. Серия Ресурсы земли. Человек. – 2012. – № 2 (114). – С. 30-31.
2. Smith, J. J. Randomised trial of pre-operative colour duplex marking in primary varicose vein surgery: outcome is not improved / J. J. Smith [et al.] // Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 2002; 23: 336–43.
3. Fischer, R. Late recurrent saphenofemoral junction reflux after ligation and stripping of the greater saphenous vein / R. Fischer [et al.] // J. Vasc. Surg. 2001; 34:236–40.
4. Wali, M. A. Recurrent varicose veins / M. A. Wali [et al.] // East Afr. Med. J. 1998; 75:188–91.
5. Dwerryhouse, S. Stripping the long saphenous vein reduces the rate of reoperation for recurrent varicose veins: five-year results of a randomized trial / S. Dwerryhouse [et al.] // J. Vasc. Surg. 1999; 29:589–92.