РАЗРАБОТКА СПОСОБА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАЗЫ ВЕГЕТАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ГОРЦА ПТИЧЬЕГО ТРАВЫ

Белки в любых биологических объектах являются основными материальными агентами, определяющими функционирование организма. Исследованию белкового состава отдельных видов растений в настоящее время уделяется большое внимание. Это объясняется тем, что информация о содержании общего количества белка и, особенно, фракционного состава дает возможность решения таксономических проблем [5]. Белки, являясь первичными продуктами экспрессии генов, отражают генетическую структуру организма, и с успехом используется в решении разнообразных задач прикладной ботаники и систематики [2]. Белки растительной клеткиобладают   необходимыми   для    сравнительного   исследования   высокой гетерогенностью и вариабельностью [4].

Горец птичий является фармакопейным растением и применяется в традиционной и народной медицине [3]. Данное обстоятельство обусловлено широким спектром фармакологической активности. Препараты на основе сырья представленного растения обладают диуретическим и противовоспалительным действием [2].

Выраженность фармакологического действия лекарственного растительного сырья напрямую связана с содержанием биологически активных веществ в заготовленном сырье [2]. Количество биологически активных соединений в сырье может значительно варьировать в зависимости от стадии вегетации лекарственного растения. Оптимальной фазой для заготовки сырья горца птичьего является стадия цветения, так как в этот период сырье содержит наибольше количество действующих фармакологически активных соединений (флавоноидов) [3]. Если лекарственное растительное сырье будет собрано на более ранней стадии вегетации (бутонизация и ранее) или более поздней (плодоношение и позже), то сырье не будет содержать необходимого количества биологически активных соединений, определяющих фармакологическую активность самого сырья и препаратов на его основе [1].

В настоящее время, в соответствии с действующей нормативной документацией на лекарственное растительное сырье горца птичьего (Государственная Фармакопея XI издание, статья 56) должно собираться в фазу цветения [3].

Определение фазы цветения нормативно-технической документацией не предусмотрено. Имеющийся раздел «Внешние признаки» в фармакопейной статье на горец птичий предусматривает определение и доказательство самого вида растения, нежели нужной фазы вегетации [3].

Таким образом, целью настоящей работы является разработка объективного способа определения фазы вегетации лекарственного растения горца птичьего.

В исследовании использовались образцы свежезаготовленного лекарственного растительного сырья горца птичьего, собранные на территории Самарской области в разные фазы вегетации.

Определение фракционного состава белков проводили с помощью фармакопейного метода электрофореза в 7,5% полиакриламидном геле с последующим выявлением белковых фракций с помощью с помощью реактива амидо черный 10Б.

Для определения молекулярной массы белковых фракций использовали электрофоретическое разделение в присутствии додецилсульфата натрия. Данный способ позволяет снизить до минимума влияние зарядов белков на их подвижность.  Под  действием  натрия  додецилсульфата  третичная и вторичная структуры белков разрушаются, и скорость миграции белковых фракций в электрическом поле зависит только от собственных молекулярных масс белков [4].

Для построения градуировочного графика зависимости «молекулярная масса         -         относительная         электрофоретическая        подвижность (ОЭП)» при определении                  молекулярных     масс      белковых      фракций использовали белки-стандарты тропонин С (18 000 Да), тропонин I (24 000 Да),   тропонин  Т   (38   000  Да), яичный  альбумин (42  000  Да)   и бычий сывороточный альбумин (68 000 Да).

 В результате, на разных фазах вегетации растения было обнаружено различное количество фракций неспецифических белков (НБ), с соответствующими величинами ОЭП.

Для горца птичьего только на стадии цветения наблюдается одна фракция НБ со значениями ОЭП 0,73±0,02 и молекулярной массой 15000 – 20000 Да. На более ранней стадии развития растения и на более поздней с помощью электрофореза в 7,5% полиакриамидном геле определяется по две фракции  НБ   с   соответствующими  значениями  ОЭП  и   молекулярными массами (Таблица).

Таблица – Фракционный состав белков в сырье горца птичьего в различные периоды вегетации

Таким  образом,  проделанная  работа  позволяет  сделать  следующие выводы: В траве горца птичьего определен фракционный состав и молекулярная масса неспецифических белков на разных стадиях вегетации (до цветения, на этапе цветения, после цветения);

 Фракционный состав белков горца птичьего имеет видовую специфичность и отличается в разные периоды физиологического развития;

 Для установления стадии вегетации собранного лекарственного растительного сырья горца птичьего травы можно использовать метод электрофореза в 7,5% полиакриамидном геле.

Список литературы

1.    Волончук, С. К. Энергосберегающие технологии переработки растительного сырья / С. К. Волончук, А. Н. Сапожников, Л. П. Шорникова // Ползуновский вестник. – 2011. - №2/1. – С. 166 – 171.

2.    Куркина А.В. Флавоноиды фармакопейных растений: Монография. – Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава». - 2012. - 262с.

3.    Лекарственные         растения         Государственной         Фармакопеи. Фармакогнозия / В.А. Ермакова; под ред. И,А. Самылиной, В.А. Северцева. – М.: АНМИ, 2003. – 534 с.

4.     Стручкова, И.В. Теоретические и практические основы проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле: Электронное учебно- методическое пособие / И. В. Стручкова, Т. А. Кальясова. - Нижний Новгород. – 2012.

5.    Юдина, Р. С. Генетика и феногенетика малатдегидрогеназы растений /Р. С. Юдина // Вестник ВОГиС. – 2010. – Т. 14, № 2. – С. 243 – 254.