06 марта 2016г.
Введение.
Герань болотная (Geranium palustre L.) – многолетнее травянистое растение семейства Гераниевые – Geraniaceae, широко распространенное по всей территории европейской части России [7]. Трава герани болотной издавна применяется в народной медицине разных стран в качестве вяжущего, гемостатического, диуретического, противовоспалительного и ранозаживляющего средства при расстройствах желудка, энтероколите, дизентерии, легочных и маточных кровотечениях, а также для промывания гнойных ран и полоскания при ангинах [4]. Однако, как показал анализ литературных источников, химический состав растения практически не изучен. Имеются лишь данные о содержании в надземной части герани болотной дубильных веществ [6] и флавоноидов [7].
Среди биологически активных соединений природного происхождения, оказывающих влияние на протекание обменных процессов в живых организмах, несомненно, важную роль играют тритерпеновые соединения. Они обладают антигистаминным, кардиотоническим, гипохолестеринемическим, тонизирующим действием, уменьшают хрупкость кровеносных сосудов, повышают активность ряда ферментов, нормализуют липидный обмен при атеросклерозе. В практической медицине тритерпеновые соединения нашли применение как средства с отхаркивающим, мочегонным, тонизирующим и седативным действием [2].
Целью работы явилось изучение качественного состава и количественного содержания тритерпеновых соединений в траве герани болотной (Geranium palustre L.).
Объектом исследования служила измельченная воздушно-сухая трава герани болотной, заготовленная в Орловской области в 2014 году, в период массового цветения растения.
Методы исследования. Для определения наличия тритерпеновых сапонинов в траве герани болотной готовили спирто-водное извлечение в соотношении 1:10. Растворитель отгоняли до водного остатка, охлаждали, фильтровали и фильтрат использовали для жидкостной экстракции органическими растворителями: диэтиловым эфиром, этилацетатом, бутанолом [2]. Наличие тритерпеновых соединений определяли в бутанольных фракциях спирто-водных извлечений и водных извлечениях с помощью качественных реакций:
§ реакция осаждения средним ацетатом свинца (к 2 мл водного извлечения прибавляли несколько капель среднего ацетата свинца) [1];
§ реакция Лафона (к 2 мл водного извлечения прибавляли 1 мл кислоты серной концентрированной, 1 мл спирта этилового 96% и 1 каплю раствора железа сульфата 10%, затем смесь нагревали) [1];
§ к 2 мл водного извлечения прибавляли 1 мл раствора натрия нитрата 10% и 1 каплю кислоты серной концентрированной [1];
§ реакция пенообразования (в 1 пробирку помещали 5 мл 0,1 Н раствора кислоты хлористоводородной, во 2 – 5 мл 0,1 Н раствора натрия гидроксида, затем в обе пробирки прибавляли по 3 капли водного извлечения из травы герани сибирской и сильно встряхивали) [1, 2, 3].
Кроме того, для подтверждения наличия тритерпеновых соединений, бутанольную фракцию хроматографировали в тонком слое сорбента в системе растворителей: хлороформ-этилацетат (9:1). После прохождения фронта растворителя более 10 см пластинку высушивали. Для проявления тритерпеновых соединений хроматограмму обрабатывали 20% раствором кислоты серной и термостатировали при 80°С в течение 3 минут. Зоны адсорбции тритерпеновых соединений приобретали малиновое окрашивание, устойчивое во времени [3].
Определение количественного содержания тритерпеновых соединений в траве герани болотной проводили фотоэлектроколориметрическим методом, основанным на реакции с концентрированной кислотой серной, с последующим измерением оптической плотности [5, 8].
Для этого 5,0 г сырья (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 100 мл и прибавляли 50 мл воды очищенной. Экстрагировали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 2 часов. Полученное извлечение фильтровали в мерную колбу на 50 мл и доводили водой очищенной до метки. Далее 5 мл извлечения помещали в колбу, прибавляли 3 мл смеси концентрированной кислоты хлористоводородной и воды очищенной в соотношении 1:1, нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 30 минут. Полученный раствор охлаждали под струей холодной воды и сливали в делительную воронку; колбу, в которой проводили гидролиз, ополаскивали 5 мл воды очищенной и добавляли смыв в делительную воронку, сюда же вносили 20 мл смеси хлороформ-спирт этиловый 96 % (5:1) и взбалтывали в течение 10 минут. Хлороформное извлечение фильтровали через фильтр с 5,0 г безводного сульфата натрия в колонку с 2,0 г оксида алюминия. Операцию повторяли 3 раза, используя каждый раз по 20 мл смеси хлороформ-спирт этиловый.
Хлороформные элюаты упаривали на кипящей водяной бане досуха. Сухой остаток переносили в мерную колбу на 25 мл спиртом этиловым 70 % и доводили тем же растворителем до метки. К 5 мл полученного раствора прибавляли 5 мл концентрированной кислоты серной, перемешивали. Через 30 мин измеряли оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 490 нм, используя в качестве раствора сравнения воду очищенную.
Результаты исследований.
Положительные качественные реакции пенообразования и гемолиза свидетельствуют о наличии в траве герани болотной тритерпеновых соединений. Реакцией Фонтан-Канделя доказано наличие тритерпеновых сапонинов. При хроматографировании экстракта травы герани болотной обнаружено четыре пятна малинового цвета, отнесенных к тритерпеновым соединениям.
Определение количественного содержания тритерпеновых соединений фотоэлектроколориметрическим методом показало, что в траве герани болотной содержится 0,16 ± 0,01 % тритерпеновых сапонинов.
Выводы: Результаты проведенных исследований позволили установить наличие в траве герани болотной тритерпеновых соединений, что свидетельствует о перспективности дальнейшего изучения указанного вида с целью возможности его использования в качестве нового лекарственного растительного сырья.
Список литературы
1. Гринкевич, Л.И. Химический анализ лекарственных растений / Л.И. Гринкевич, Л.М. Сафронич. – М. : Мир, 1983. – 175 с.
2. Деканосидзе, Г.Е. Биологическая роль, распространение и химическое строение тритерпеновых гликозидов / Г.Е. Деканосидзе, В.Я. Чирва, Т.В. Сергиенко. – Тбилиси, 1984. – 348 с.
3. Кондратова, Ю.А. Тритерпеновые соединения вероники австрийской / Ю.А. Кондратова, О.С. Самофалова, Е.А. Артюшенко // Молодежная наука и современность : материалы 74-й межвуз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых, посвящ, году молодежи в России (Курск, 21-22 апр. 2009 г.) : в 3 ч. – Курск, 2009. – Ч. 2. – С. 182-183.
4. Копейка, В.И. Семейный справочник лекарственных растений / В.И. Копейка. – Донецк : БАО, 2009. – 113 с.
5. Позднякова, Т.А. Тритерпеновые соединения герани сибирской (Geranium sibiricum L.) / Т.А. Позднякова // Медицина, фармация и общественное здоровье : материалы Евразийского конгр. с междунар. участием. – Екатеринбург, 2013. – С. 113-117.
6. Разаренова К.Н., Жохова Е.В. Сравнительная оценка содержания дубильных веществ в некоторых видах рода Geranium L. Флоры Северо-Запада / К. Н. Разаренова, Е. В. Жохова // II Гаммермановские чтения : сб. науч. тр. науч.-метод. конф.(Санкт-Петербург, 3-6 февр. 2014 г.). – СПб., 2014. – С. 95-98.
7. Растительные ресурсы России: дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. Т.3. Семейства Fabaceae – Apiaceae / отв. ред. А.Л. Буданцев. – СПб.; М. : Т-во науч. изд. КМК, 2010. – С.113-120.
8. Старчак, Ю.А. Изучение тритерпеновых соединений травы тимьяна мелового / Ю.А. Старчак, О.С. Богатырева // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки : сб. работ молодых ученых Междунар. науч.-практ. конф. – Владикавказ, 2010. – С. 137-138.
