27 февраля 2016г.
Одной из основных причин ранней выбраковки коров являются заболевания родовых путей микробной этиологии. У большинства коров роды протекают не физиологично, как результат несоблюдения правил асептики, а также эндогенно в полость матки проникают условно-патогенные микроорганизмы, вызывающие развитие воспаления (метриты, эндометриты) [2, 3, 5,6].
Целью и задачами наших исследований явилось изучение и анализ микрофлоры вагинального мазка у коров в норме и при гнойном эндометрите.
Материалы и методы исследования. Работа проводилась на базе ФГБОУ ВПО Самарская ГСХА. Для бактериологического исследования отбирали биоматериал (смывы из влагалища) от клинически здоровых коров после отела (n=12) и животных с клиническими проявлениями патологических процессов в родовых путях (n=12). Баксуспензию, приготовленную из биоматериала, высевали в качестве инокулята на мясо-пептонный агар (МПА) и в мясо-пептонный бульон (МПБ), селективно-элективные и обогащѐнные питательные среды. С целью выделения в чистой культуре стафилококков инокулят высевали на желточно-солевой агар, в 3,5% МПБ с 3 мл 0,1% раствора кристалвиолета, кровяной агар. Стрептококки выделяли на обогащѐнных средах МПА с 1% глюкозы и 5% крови кролика и в МПБ с 1% глюкозы и 10% инактивированной сыворотки крови лошади. Клостридии – в средах Китта-Тароцци и Вильсена-Блера, на глюкозо-кровяном агаре Цейсслера. Кампилобактерии – полужидком 0,2% мясо-печѐночном пептонном агаре (ПЖМППА), в среду Китта-Тароцци и сафранино-железо-новобиоциновую среду (СЖН). Для спирохет применяли бульон Ферворта-Вольфа и кровяной агар. Лактобациллы и бифидобактерии выделяли на глюкозо-кровяном агаре [4].
Чистые культуры микроорганизмов идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим свойствам (табл.). Количество выросших колоний микроорганизмов (КОЕ) на плотных питательных средах проводили на приборе счѐта бактерий (ПСБ), в жидких средах подсчѐт вели в камере Горяева. Тест на наличие органов движения проводили в препаратах «витальная окраска бактерий», «раздавленная» и «висячая» капля. Биохимические свойства микроорганизмов изучали постановкой пѐстрого ряда со средами Гисса, в пластинах ПБДБ (пластина для биохимической дифференциации бактерий) и в других специфических тестах. Серогрупповую принадлежность определяли в реакции агглютинации и преципитации. Результаты исследований обрабатывали статистически в компьютерной программе Excel.
Результаты исследования. При осмотре клинически здоровых коров не выявлено выделений из половой щели. Слизистая оболочка преддверия влагалища и влагалища бледно-розового цвета, сыпи, язв не находили. При ректальном исследовании выявлено, что матка находится в тазовой полости, ригидна, рога матки симметричны.
У животных с клиническими проявлениями гнойного эндометрита отмечали загрязнение хвоста, выделения из половой щели с неприятным запахом. Слизистая оболочка влагалища гиперемирована, у двух коров с точечными кровоизлияниями. Шейка матки приоткрыта. Из матки выделялся катарально-гнойный экссудат. Матка атонична. Выражена ее флюктуация, ассиметрия рогов.
При бактериологическом исследовании из влагалища клинически здоровых коров чаще изолировали сапрофитные микроорганизмы: микрококки – в 66,7% случаев, S. epidermidis – в 50,0%, S. saprophyticus 83,3%, негемолити-ческие E. coli – в 66,7% случаев и реже S. aureus – в 16,7%, грибы рода Candida – в 16,7% случаев. В основном все микроорганизмы выделены в ас-социациях: E. coli+S. epidermidis+S. saprophyticus; E. coli+S. aureus+грибы рода Candida; S. saprophyticus+S. epidermidis+микрококки+E. coli.
В пробах биоматериала от коров с гнойным эндометритом выделены и идентифицированы кокковые бактерии рода Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes (Табл.1). Среди палочковидных бактерий выявлены Clostridium sporogenes, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa и Campylobacter fetus subspecies veneralis. Среди спирохет идентифицированы трепонемы и спириллы. Lactobacillus delbrueckii и Bifidobacterium bifidum выделены от всех исследованных животных, поскольку они являются представителями резидентной микрофлоры животных [1].
Биологические свойства чистых культур микробов
Таблица 1
|
Чистая культура микробов
|
Свойства микробов
|
|
КОЕ/культуральные
|
морфологические
|
тинкториальн ые, (окраска по граму ±)
|
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
Staphylococcus aureus
|
КОЕ 3,75х103±0,27
На ЖСА колонии круглые с перламутровым венчиком, с наличием белого и золотистого пигмента, с выпуклым центром, поверхность гладкая, периферия ровная, до 4-7 мм в диаметре; на кровяном агаре – зона гемолиза, имеют капсулу
|
Овальные клетки, в виде скоплений, напоминающих по форме кисть винограда
|
Равномерная (+)
|
|
Streptococcus acidominimus
|
КОЕ 6,74х103±0,53
На ЖСА колонии мелкие 1-3 мм в диаметре, выпуклые, тѐмно-жѐлтые, поверхность гладкая, периферия ровная
|
Овальные клетки, скоплений неправильной формы
|
Равномерная (+)
|
|
Streptococcus uberis
|
КОЕ 5,13х103±0,62
Колонии круглые, центр выпуклый, периферия ровная, поверхность гладкая, непрозрачные
|
Овальные клетки, скоплений неправильной формы
|
Равномерная (+)
|
|
Streptococcus pyogenes
|
КОЕ 4,78х102±0,63
На глюкозо-кровяном агаре колонии каплевидные, округлые, 1-2 мм в диаметре, прозрачные, поверхность гладкая, зона гемолиза
|
Овальные клетки, расположенные цепочками из 5-7 и более кокков
|
Равномерная (+)
|
|
Pseudomonas aeruginosa
|
КОЕ 4,28х103±0,48
На глюкозо-кровяном МПА колонии круглые в диаметре 2-3 мм, полупрозрачные, периферия ровная, зеленоватая зона α-гемолиза
|
Прямые и слегка изогнутые палочки, средней длинны и толщины, без спор и капсул.
Тест на подвижност +
|
Равномерная (–)
|
|
Proteus vulgaris
|
КОЕ 4,58х103±0,28/ Колонии
первоначально мелкие 2-3 мм, периферия в форме ростков, центр приподнятый, поверхность гладкая, на косяке МПА – эффект роения
|
Короткие, толстые, прямые палочки, с округлыми полюсами, располагаются поодиночно, парно. Тест на подвижност +
|
Равномерная (–)
|
|
Campylobacter fetus subspecies veneralis
|
КОЕ 3,12х103±0,46 Слабое равномерное
помутнение столбика среды, без изменения цвета среды
|
Средней толщины, слегка извитые с 1-3 заветками, палочки располагаются одиночно и парно в виде
«летящей чайки»
|
Равномерная (–)
|
|
Спирохеты рода: Spirillum и
|
КОЕ 3,48х103±0,52 Колонии на кровяном
агаре мелкие, круглые, плоские серовато-
|
Палочки короткие, толстые, полюса
|
Грам (–),
|
|
Treponema
|
белые, полупрозрачные с гладкой поверхностью, периферия ровная, с зоной гемолиза
|
округлые, одиночные или в небольших группах
|
метод импрегнации
|
|
Lactobacillus delbrueckii
|
КОЕ 3,25х103±0,46 Крупные колонии, плоской, сероватые, периферия ровная, поверхность гладкая, зона α-гемолиза
|
Одиночные и парные палочки, длинные, в коротких цепочках 3-5 клеток, полюса округлые
|
Равномерная (+)
|
|
Bifidobacterium bifidum
|
КОЕ 2,24х103±0,68 Колонии плотные, чечевицеобразные с гладкой и шероховатой поверхностью, ровной периферией
|
Палочки короткие и длинные с утолщением на полюсе, располагаются одиночные, полисадом и V-образно
|
Равномерная (+)
|
Выводы. 1) В пробах биоматериала у всех исследованных животных были выделены бактерии Streptococcus acidominimus, Streptococcus uberis, Lactobacillus delbrueckii, Bifidobacterium bifidum. Являются резидентной (аутомикрофлорой) слизистой влагалища животных и человека, выполняют антагонистическую функцию по отношению к возбудителям оппортунистических инфекций.
2) В результате гнойного эндометрита у коров выделены Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes, Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa, спирохеты рода: Spirillum и Treponema, Campylobacter fetus subspecies veneralis, Proteus vulgaris придающие патологии гнилостный характер и отягощающие течение болезни, в том числе сепсисом.
Заключение. Таким образом, из влагалища клинически здоровых коров чаще выделяли сапрофитные микроорганизмы (микрококки, S. epidermidis, S. saprophyticus, негемолитические E. coli), а на слизистых оболочках влагалища животных с клиническими проявлениями патологических процессов в родовых путях чаще находили патогенную и условно-патогенную микрофлору. Наиболее часто микроорганизмы выделены в ассоциациях.
Список литературы
1. Воробьѐв А.А. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / А.А. Воробьѐв, А.С. Быков, М.Н. Бойченко [и др.]. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 35-84.
2. Макарова 0.В. Инфекции в акушерстве и гинекологии / О.В. Макарова В.А. Алешкина. Т.Н. Савченко. - М.: "Медпресс-информ" 2007. 462с.
3. Нежданов А.Г. Послеродовые гнойно-воспалительные заболевания матки у коров / А.Г. Нежданов, А Г Шахов. - Ветеринарная патология. 2005. N° 3 (14).- С. 61.
4. Покровский В.И., Брико Н.И., Ряпис Л.А. Стреитококки и стрептококкозы. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 125-523.
5. Шахов. А.Г. Этиология факторных инфекций животных и меры их профилактики. Ветеринарная патология 2005, N° 3 (14). - С. 22-24.
6. Azawi. 0.1. Postpartum uterine infection in cattle. Animal Reproduction Science. 2008, № 105. С. 187-208.
