ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ ДИСУЛЬФИРАМА В КОМПЛЕКСЕ ВКЛЮЧЕНИЯ С ГИДРОКСИПРОПИЛ-β-ЦИКЛОДЕКСТРИНОМ МЕТОДОМ УФ- СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ

Катаракта является одним из распространенных заболеваний глаз ведущих к слепоте. По статистике, в Российской Федерации ею страдают около 10 миллионов человек [1]. Дисульфирам (ДСФ) может быть эффективным лекарственным препаратом для лечения катаракты [2]. Он значительно снижает окислительный стресс и ингибирует супероксиддисмутазу [3]. К сожалению, возможность использования ДСФ в офтальмологии ограничена из-за его низкой растворимости в воде. С целью повышения растворимости ДСФ Nagai и соавт. [2] предлагают использовать циклодекстрины (ЦД), которые увеличивают растворимость в воде за счет образования комплексов включения. Таким образом, исследование состава и свойств комплексов включения, чему посвящена настоящая работа, представляет собой актуальную задачу для терапии катаракты.
Существует несколько типов ЦД, в зависимости от количества глюкопиранозных звеньев, а также от типа заместителя. Часто в фармацевтической практике используют β-ЦД, особенно его гидроксипропильные производные [4], как наиболее растворимые в воде. В настоящей работе исследовали комплекс включения, полученный с использованием гидроксипропил-β-циклодекстрина (ГПβЦД) марки Cavitron w7hp5 pharma (компания ASHLAND) со степенью замещения 0.6 и ДСФ производства компании Synthexim, который представляет собой кристаллы белого цвета, практически не растворимые в воде (4,09 мг в 1000 мл при 25 °С).
Комплекс включения получали смешением сухой навески ГПβЦД, ДСФ и спирта этилового. ГПβЦД и ДСФ были взяты в мольном соотношении 2: 1, а спирт этиловый в количестве, достаточном для получения 30 мас. % раствора ГПβЦД. Смесь равномерно перемешивалась со скоростью 450 об/мин при нагревании до температуры 65 С в течение 30 мин, после чего охлаждалась до комнатной температуры. Полученный продукт фильтровали через предварительно взвешенный мембранный фильтр с размером пор 0.22 мкм, органический растворитель удаляли на роторном испарителе. Синтезированный комплекс включения, в соответствии с методикой ГФ ХII (ОФС 42-0049-07) оценивался, как «легко растворимый в воде».
Исследование количественного содержания ДСФ, включившегося в комплекс с ГПβЦД проводили методом УФ-спектрофотометрии с использованием градуировочного графика. Спектрофотометрические измерения проводили на спектрофотометре СФ-200 в диапазоне измеряемых длин волн от 200 нм до 350 нм и разрешением 1 нм.
Для построения градуировочного графика, была приготовлена серия из пяти стандартных растворов различных концентраций ДСФ в спирте этиловом (0,004 мг/мл – 0,012 мг/мл). Для каждого раствора было получено не менее трех параллельных измерений. Для определения количественного содержания ДСФ в комплексе включения были зарегистрированы спектры поглощения растворов комплексов в спирте этиловом, для  этого отбирали аликвоту пробы препарата 40 мкл из растворов полученных комплексов в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили до метки спиртом этиловым. Количественное содержание ДСФ в комплексе включения рассчитывали по формуле 1: 

(1), где 
Х – количественное содержание ДСФ в испытуемом растворе комплекса включения, мг/мл
С - концентрация ДСФ в комплексе включения, найденная по градуировочному графику, мг/мл V0 – аликвота пробы препарата, используемая для приготовления испытуемого раствора, мл
V1 – объем мерной колбы, используемой для приготовления испытуемого раствора, мл
Количественное содержание ДСФ, не включенного в комплекс, определяли по количеству ДСФ, оставшемуся на фильтре (формула 2):


(2), где

m1 – масса мембранного фильтра после фильтрования спиртового раствора комплекса включения, г m2 –масса мембранного фильтра, г
Градуировочный график стандартных растворов различных концентраций 0,004 мг/мл – 0,012 мг/мл ДСФ в спирте этиловом представлен на Рисунке 1.




Рис.1. Зависимость оптической плотности от концентрации стандартных растворов ДСФ в спирте этиловом

Типичный спектр поглощения спиртового раствора комплекса включения ДСФ с ГПβЦД представлен на Рисунке 2.



Рис.2. Типичный спектр поглощения спиртового раствора комплекса включения ДСФ с ГПβЦД

Значения концентрации ДСФ в комплексе включения, которые были определены с помощью градуировочного графика, количество загруженного ДСФ, для получения комплекса включения и содержание ДСФ на фильтре для трех образцов комплекса включения ДСФ с ГПβЦД представлены в Табл.1.
                                                                                                                             Таблица 1

Значения концентрации ДСФ в трех образцах комплекса включения ДСФ с ГПβЦД

Проведено УФ-спектрофотометрическое исследование синтезированного комплекса включения ДСФ с ГПβЦД. Полученный комплекс включения, в соответствии с методикой ГФ ХII (ОФС 42-0049-07) оценивается, как «легко растворимый в воде». С помощью градуировочного графика определено количественное содержание ДСФ в комплексе включения. Остаток на фильтре после фильтрования спиртового раствора комплекса включения не превышает 1 % от массы исходного лекарственного вещества во всех случаях. Этот факт свидетельствует, что лекарственное вещество переходит в растворимую форму, и включается в комплекс практически полностью.

Список литературы

1. Жиров А.Л., Савченко Н.В., Пиховская И.Г. Потребность населения Хабаровского края в хирургическом лечении возрастной катаракты// Современные технологии в офтальмологии. – 2014. – №2. – С.19-20.
2. Noriaki Nagai, Yoshimasa Ito. Pharmacokinetic and pharmacodynamic evaluation of the anti-cataract effect of eye drops containing disulfiram and low-substituted methylcellulose using ICR/f rats as a hereditary cataract model// Biol. Pharm. Bull. – 2012 – V.35, №2. – P.239-245.
3. Randen-Staron I., Grosicka-Maciag E., Kurpios-Piec D. The effect of sodium diethyldithiocarbamate in fibroblasts V79 cell in relation to cytotoxicity, antioxidative enzymes, glutathione, and apoptosis//Arch Toxicol. – 2012. – V.86. – P. 1841-1850.
4. Rajeswari Challa, Alka Ahuja. Cyclodextrins in drug delivery: an updated review// AAPS PharmSciTech. – 2005. – V.6, №2. – Article43. – P.329-356 (http://www.aapspharmscitech.org)