Новости
09.05.2023
с Днём Победы!
07.03.2023
Поздравляем с Международным женским днем!
23.02.2023
Поздравляем с Днем защитника Отечества!
Оплата онлайн
При оплате онлайн будет
удержана комиссия 3,5-5,5%








Способ оплаты:

С банковской карты (3,5%)
Сбербанк онлайн (3,5%)
Со счета в Яндекс.Деньгах (5,5%)
Наличными через терминал (3,5%)

ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДА Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu НА ЭКСПРЕССИЮ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫХ КЛАСТЕРОВ ЛИМФОЦИТОВ

Авторы:
Город:
Чита
ВУЗ:
Дата:
05 апреля 2016г.

Известно, что лимфоциты несут на своей мембране маркеры, способные выполнять функцию рецепторов, получившие наименование CD. На различных стадиях дифференцировки лимфоцитов экспрессируется определенный набор кластеров, что определяет функциональную активность клеток [2, 8, 17]. Способность веществ усиливать или ослаблять экспрессию кластеров дифференцировки иммуноцитов и, тем самым, модулировать их функцию, отражает иммунотропную активность препаратов [1, 18, 25]. При ожоговой болезни, как и при ряде других иммунодефицитных состояний, наблюдается не только угнетение лимфопоэза, но  и изменение мембраны лимфоидных клеток, в том числе и CD молекул, что обусловлено репрессией кластеров дифференцировки [1, 12]. Очевидно, что при этом лимфоциты имеют высокий потенциал к экспрессии маркеров CD, которая может проявиться под действием иммуностимуляторов.

Цель исследования: изучить влияние синтетического пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на экспрессию кластеров дифференцировки лимфоцитов.

Материал и методы исследования.

Пептиды из сумки Фабрициуса цыплят после выделения фракционировали с помощью гель-фильтрации и обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографией. На каждом этапе полученные фракции тестировали на наличие иммуностимулирующей активности. Дальнейшая работа велась только с активными фракциями. В результате последовательного разделения этих фракций нами был выделен пептид, обладающий по результатам скрининговых исследований иммуноактивностью, и установлена на газофазном секвенаторе (Model 477A, Applied Biosystems) его первичная структура - Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu. Исследование активности пептида проводили с использованием его синтетического аналога. Пептид синтезировали на твердой фазе с использованием Boc схемы, структуру синтезированного пептида подтверждали масс спектрометрическим анализом [12].

Мы изучали влияние пептида на кластеры дифференцировки лимфоцитов в 2-х часовой культуре клеток, полученных от 16-и больных с ожоговой болезнью (ожоги IIIб-IV степени 15-30% поверхности тела). Лимфоциты выделяли на градиенте плотности фиколл-верографин (r=1,077 г/см3).  Полученную клеточную взвесь трижды отмывали и использовали в концентрации 2,5 млн. клеток/мл. Клетки культивировали в среде RPMI-1640 в плоскодонных планшетах в объеме 0,2 мл при 37°C, в атмосфере 5% СО2 и влажности 80-90%. В культуральную среду добавляли 10% фетальной сыворотки теленка, 50 мкМ 2-меркаптоэтанола, 2 мМ глутамина, 10 мМ Hepes- буфера. В культуру лимфоцитов вносили изучаемые пептиды в концентрации 5 пмоль/мл (опыт). В качестве контроля использовали физиологический раствор в соответствующем объеме. Экспрессию дифференцировочных антигенов определяли методом непрямой мембранной иммунофлюоресценции [1, 12]. Полученные данные обработаны с помощью пакета статистических программ Statistica 6. Статистическую значимость различий оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение.

Известно, что в соединения выделенные из сумки фабрициуса регулируют развитие В-лимфоцитов клеток [13, 15, 24]. Однако в нашем исследовании пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu стимулирует экспрессию маркеров Т-лимфоцитов, увеличивая число клеток, несущих маркер CD2 на 26,1%, CD3 на 30,9%, CD4 на 120,2% (Таблица).

Этот факт предполагает то, что в бурсе Фабрициуса происходит дифференцировка некоторых субпопуляций Т-лимфоцитов. Это подтверждают и факты обнаружения до 4-6% Т-лимфоцитов в бурсе Фабрициуса птиц [12, 17, 18].

Таблица 1 Влияние пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на экспрессию кластеров дифференцировки лимфоцитов больных ожоговой болезнью, М±м % (n=16).

 

CD

2

CD

3

CD

4

CD

8

CD

16

CD

25

CD

19

CD

21

CD

22

CD

23

CD

38

CD

72

контро

59,7±

45,7±

12,4±

18,6±

10,2±

3,2±0,

5,8±0,

4,6±0,

5,2±0,

3,1±0,

8,8±0,

5,1±0,

ль

1,2

1,3

0,8

0,6

1,0

3

5

4

6

3

6

4

опыт

75,2±

59,9±

27,4±

20,1±

11,0±

3,4±0,

7,2±0,

5,3±0,

5,6±0,

2,8±0,

9,6±0,

6,0±0,

1,5*

1,4*

1,0*

0,9

1,0

3

6

6

6

2

3

4

*– достоверность различий показателей опытной и контрольной групп p< 0,001

 

Также нами было показано, что данное соединение обладает противоотечным действием [18], стимулирует регенерацию [24] и развитие макрофагов [14]. Поэтому мы предполагаем, что пептид Glu-Glu-Leu-Asn-Glu может найти свое применение в ЧС [21] при ожогах [6, 7], отморожениях [22, 23], заживлении как ран кожи [3], так и поврежденных клеток внутренних органов, в частности желудочно-кишечного тракта [4, 9] и легких [10, 11], для восстановления поврежденного головного мозга [19, 20], для нормализации работы системы иммунитета и гемостаза при химиотерапии [5, 16].

 

Список литературы

1.      Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины. - СПб.: «Наука». - 1998. - 310 с.

2.      Кузник Б.И., Лиханов И.Д., Цепелев В.Л., Сизоненко В.А. Теоретические и клинические аспекты биорегулирующей терапии в хирургии и травматологии. - Новосибирск: Наука, 2008. – 311 с.

3.      Крюкова В.В., Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Курупанов С.И., Степанов А.В. Магнитоплазменная терапия как компонент интенсивной терапии у пациентов с обширными гнойными ранами // Актуальные вопросы интенсивной терапии. - 2015. - № 32. - С. 17-20.

4.      Лобанов С.Л., Степанов А.В., Лобанов Л.С. Современные подходы к лечению острого панкреатита. – Чита: Деловое Забайкалье, 2008. - 160 с.

5.      Мельникова С.Л., Степанов А.В. Лейкоцитарный фибринолиз у онкологических больных // Фундаментальные исследования. – 2013. - №3-1. – С. 117-120.

6.      Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Степанов А.В. Изменение микроциркуляции при дермальных ожогах // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 1-9. - С. 1893-1896.

7.      Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Степанов А.В. Клиническая эффективность магнитоплазменной терапии ожогов кожи // Забайкальский медицинский вестник. - 2015. - № 2. - С. 99-102.

8.      Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Степанов А.В. Применение физических методов лечения ожогов кожи // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 5; URL: www.science-education.ru/128-22156.

9.      Скажутина Т.В., Цепелев В.Л., Степанов А.В., Крюкова В.В., Курупанов С.И., Сепп А.В. Эндоскопическое лечение рубцовых стенозов пищевода с целью раннего восстановления энтерального питания // Актуальные вопросы интенсивной терапии. - 2015. - № 32. - С. 28-32.

10.   Степанов А.В. Острая дыхательная недостаточность. – Чита: ИИЦ ЧГМА, 2008. - 48 с.

11.   Степанов А.В. Острые нарушения функций дыхания. Чита: ИИЦ ЧГМА, 2008. - 66 с.

12.   Степанов А.В., Цепелев В.Л., Цепелев С.Л., Аюшиев О.Д. Пептидные регуляторы гуморального иммунитета. - Чита: Поиск, 2002. - 160 с.

13.   Степанов А.В., Цепелев В.Л., Мельникова С.Л. Иммуностимулятор из центрального органа гуморального иммунитета — сумки Фабрициуса // Сибирский медицинский журнал. - 2013. - № 2. - С. 32-34.

14.   Степанов А.В., Цепелев В.Л. Влияние синтетических пептидов сумки Фабрициуса на функциональную активность макрофагов // Забайкальский медицинский вестник. - 2014. - № 2. - С. 44-47.

15.   Степанов А.В., Цепелев С.Л., Цепелев В.Л., Цыбиков Н.Н., Бямбаа А.Б. Результаты исследования эффективности синтетического иммуностимулятора нового поколения // Фундаментальные исследования.- 2012. - №12 (1). -С. 142-145.

16.   Степанов А.В., Краденов А.В. Лейкоцитарный фибринолиз в тромболитической терапии // Забайкальский медицинский вестник. - 2015. - № 1. - С. 125-128.

17.   Степанов А.В. Механизмы коррегирующего действия полипептидов из лимфоидной ткани при иммунодефицитных состояниях и воспалении: Автореф. дис. докт. мед. наук. – Иркутск, 1995.– 40 с.

18.   Степанов А.В. Пептидные регуляторы из сумки Фабрициуса // Забайкальский медицинский вестник. - 2004. - № 4. - С. 97-101.

19.   Степанов. А.В., Шаповалов К.Г. Некоторые проблемы преподавания анестезиологии и реаниматологии в медицинском Вузе // Анестезиология и реаниматология. – 2009. - №6. – С.29-30.

20.   Степанов А.В. Интенсивная терапия при черепно-мозговой травме // Забайкальский медицинский вестник.- 2002. - № 2. - С. 22-27.

21.   Степанов А.В., Любин А.В., Малежик М.С. Организация медицинской помощи при катастрофах. – Чита : ИИЦ ЧГМА, 2012. - 140 с.

22.   Шаповалов К.Г., Михайличенко М.И., Степанов.  А.В. Нарушение  функции эндотелия при холодовой травме // Актуальные вопросы интенсивной терапии. – 2007. - №22. – С.53-57.

23.   Шаповалов К.Г., Бурдинский Е.Н., Степанов. А.В. Оптимизация компонентов регуляции сосудистого тонуса и состояния микроциркуляторного гемостаза на фоне продленной регионарной блокады при местной холодовой травме // Анестезиология и реаниматология. – 2008. - №3. – С.20-21.

24.   Цепелев В.Л., Степанов А.В. Влияние регуляторных пептидов на продукцию провоспалительных цитокинов // Забайкальский медицинский вестник. - 2015. - № 2. - С. 147-150.

25.   Хавинсон В.Х., Рыжак Г.А., Линькова Н.С. Применение пептидных биорегуляторов для увелечения ресурса жизнедеятельности человека. – СПб.: ИПК «КОСТА». – 2015. – 72 с.