24 января 2016г.
Актуальность.
Регуляторные пептиды, согласно классификации академика И.П. Ашмарина, относятся к группе нейромодуляторов. Различают два вероятных пути их образования. Первый путь – протеолиз коллагеновых и эластических волокон, поступающих с пищей. Второй – связан с синтезом коллагена в фибробластах [2]. До 40% синтезированных продуктов выделяется в межклеточную среду в форме олигопептидов, состоящих из 5 и менее аминокислот [7]. Например, эндогенный пролилглицилпролин образуется в организме в процессе метаболизма коллагена, эластина и некоторых регуляторных пептидов. Из олигопептидов наиболее коротким фрагментом, проявляющим биологическую активность, является пролилглицилпролин и его аналоги. Согласно данным литературы, глипролины обладают широким спектром биологической активности, среди которых следует отметить гастропротективные эффекты на различных моделях.
Сведения о вовлеченности глипролинов в процессы тканевого гомеостаза носят единичный и противоречивый характер. Известны некоторые механизмы гастропротективных эффектов глипролинов: поддержание адекватного кровотока в СОЖ при воздействии повреждающих агентов, угнетение секреции желудочного сока, стабилизация тучных клеток, снижение первичных, вторичных и конечных продуктов перекисного окисления липидов в клетках СОЖ, противовоспалительное действие в зоне язвенного дефекта. В ранее проведѐнных в ЦНИЛ исследованиях, введение аргинина в структуру опиоидных пептидов существенно повышало гастропротективные свойства [1,3,4,5,6].
Целью настоящего исследования было изучить влияние PGP и его аргининсодержащего аналога на процессы синтеза ДНК в слизистой оболочке желудка белых мышей в физиологических условиях и при гастропатии, обусловленной введением нестероидного противовоспалительного препарата индометацин.
Методика исследования.
Опыты проводились на белых мышах-самцах массой 23-28 г. Всего в эксперименте было использовано 45 животных. Животные содержались в виварии согласно требованиям приказа Минздравсоцразвития РФ от 23.08.2010 № 708н "Об утверждении Правил лабораторной практики". Были исследованы пептиды пролил- глицил-пролин (Pro-Gly-Pro) и аргинил-глицил-пролин (Arg-Gly-Pro) - PGP и RGP. Пептиды были синтезированы в лаборатории регуляторных пептидов Института молекулярной генетики РАН. Оба пептида вводились животным внутрибрюшинно в дозе 1 мг/кг один раз в сутки в течение пяти суток. Мыши контрольной группы получали эквиобъемное количество изотонического раствора натрия хлорида. На пятые сутки эксперимента животным интрагастрально водили индометацин в дозе 250 мг/кг и на седьмые сутки мышей выводили из эксперимента.
Анализ пролиферативной активности эпителия слизистой оболочки желудка осуществляли методом авторадиографии с 3Н-тимидином, который вводили в дозе 1 мкКu/г массы тела. Радиоавтографы изготавливали по принятой в лаборатории методике. Индекс меченых ядер (ИМЯ) определяли в зоне собственных желѐз желудка на продольных послойных срезах при подсчете 2-2,5 тысяч клеток и выражали в процентах.
Результаты и обсуждение.
Показатели клеточного деления в слизистой оболочке желудка (ИМЯ) в группах PGP и RGP не отличались от контроля. Введение индометацина сопровождалось появлением в СОЖ язвенно-эрозивных процессов (средняя площадь язв составила 0,90±0,18 мм2), значение ИМЯ оказалось достоверно ниже (p<0,05) в сравнении с контролем (7,16%). Предварительно введенный пептид PGP вызывал уменьшение площади язв до 0,60±0,26 мм2. Введение аргининсодержащего пептида (RGP) не только не усилило репаративные процессы, но и утяжелило язвенно-эрозивный процесс, что сопровождалось увеличением средней площади язв и достоверным уменьшением ИМЯ до 6,79±0,74.
Заключение.
1. В работе были подтверждены гастропротективные свойства глипролинов.
2. Был выявлен один из механизмов гастропротекции данных пептидов – стимуляция синтеза ДНК.
3. Отвергнута гипотеза, предполагавшая, что введение аргинина в пептид усиливает гастропротективные свойства.
Список литературы
1. Алексеенко, С.А. Влияние даларгина на репаративную способность слизистой оболочки желудочно- кишечного тракта при различных гастроэнтерологических заболеваниях / С.А. Алексеенко, С.С. Тимошин, Н.А. Болоняева и др. // Дальневосточный медицинский журнал. – 2010. – № 3. – с. 15-18.
2. Ашмарин, И.П. Глипролины как самостоятельные регуляторы и стабилизаторы других пептидов / И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Л.А. Ляпина и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. — 2002.— № 1.— С. 24–27.
3. Животова, Е.Ю. Влияние даларгина на процессы синтеза днк в слизистой оболочке желудка белых крыс / Е.Ю. Животова, М.Ю. Флейшман, О.А. Лебедько и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. – Т. 144. – № 9. – с. 288-291.
4. Животова, Е.Ю. Участие регуляторных пептидов в регуляции тканевого гомеостаза слизистой оболочки желудка / Е.Ю. Животова, О.А. Лебедько, М.Ю. Флейшман и др. // Дальневосточный медицинский журнал.– 2013. – № 1. – с. 101-105.
5. Животова, Е.Ю. Гастропротективный эффект даларгина при гастропатии, вызванной приемом нестероидных противовоспалительных препаратов / Е.Ю. Животова, М.Ю. Флейшман, Е.Н. Сазонова и др.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2009. – Т. 147. – № 4. – с. 420-425.
6. Животова, Е.Ю. Влияние даларгина при лечении и профилактике нпвп-гастропатий на выраженность оксидативного стресса и процессов апоптоза в слизистой оболочке желудка (экспериментально- клиническое исследование / Е.Ю. Животова, Н.А. Болоняева, М.Ю. Флейшман и др. // Дальневосточный медицинский журнал. – 2011. – № 4. – с. 29-32.
7. Bienkowski, R.S. Degradation of newly synthesized collagen / R. S. Bienkowski, M. J. Cowan, J. A. McDonald, R. G. Crystal // Journal of Biological Chemistry. – 1978. – Vol.253. – p. 4356-4363
