УРОВЕНЬ TNFα В КРОВИ БОЛЬНЫХ РАЗНЫМИ КЛИНИЧЕСКИМИ ФОРМАМИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ

Фактор некроза опухолей альфа (TNFα) - был открыт в 1975 году и выделен из сыворотки крови лабораторных животных, у которых он индуцировал некроз опухоли, (фибросаркомы) откуда и получил свое название [5]. Однако более поздними исследованиями было доказано, что он принимает важное участие в борьбе с внутриклеточной инфекцией, включая туберкулез [2, 3]. TNFα играет в человеческом организме роль медиатора, участвующего в кооперации лимфоцитов и макрофагов при реализации иммунного ответа. Он регулирует продукцию, рост и дифференцировку клеток, занятых в иммунитете и гемопоэзе. TNFα включает индукцию и освобождение интерлейкина 1, оказывает регуляторный эффект на активность фибробластов, активизирует полиморфноядерные клетки, стимулируя фагоцитоз и адгезию клеток к эндотелию сосудов. TNFα вызывает апоптоз клетки-мишени, связываясь со своими рецепторами на мембранах клеток [4, 1]. Он принимает участие в формировании гранулем [2, 6], индуцирует образование активных форм кислорода, которые вызывают деструкцию мембран и гибель клетки-мишени по механизму некроза [2, 1].
При туберкулезе нормальная положительная роль TNFα может искажаться в результате взаимодействия с компонентами МБТ, которые изменяют ткани человеческого организма, делая их более чувствительными к токсическому влиянию цитокинов. Экспериментальными работами [7] было доказано, что некроз при туберкулезе является результатом запуска секреторных функций лимфокин-активированных макрофагов. В этот процесс формирования некроза в гранулеме может вносить определенный вклад IFNγ и TNF.
В связи с вышеизложенным нам представляется актуальным изучить взаимосвязь продукции TNFα с клиническими проявлениями туберкулеза.
Цель исследования – изучить особенности продукции TNFα в крови больных с разными клиническими формами туберкулеза легких.
Материалы и методы.
Под наблюдением находились 35 больных (мужчин - 15, женщин - 20) впервые выявленным активным туберкулезом легких, в возрасте от 17 до 62 лет. В зависимости от клинических проявлений, выраженности интоксикационного и бронхолегочного синдромов и особенностей рентгенологической картины пациенты были распределены на 3 группы. Группу 1 составили 12 человек с наиболее тяжелыми и осложненными формами туберкулеза, у которых течение туберкулезного процесса протекало по типу казеозной пневмонии. В группу 2 были включены 12 больных с остротекущими формами туберкулеза с выраженным интоксикационным синдромом и рентгенологической картиной диссеминированного туберкулеза. Группу 3 ставили 11 больных с диагнозом инфильтративный туберкулез легких с умеренно выраженным интоксикационным и бронхолегочным синдромом. В качестве группы контроля обследовано 11 здоровых лиц.
Определение TNFпроводили в сыворотке крови и супернатантах культур мононуклеарных клеток, выделенных из периферической венозной крови на градиенте плотности фиколл-урографин (р=1,114 г/см , при 200 g). Мононуклеарные клетки культивировали в среде RPMI (Flow Laboratories), содержащей 10 % инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки, 2 mМ глютамина и по 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина при t =37º С в атмосфере повышенной влажности и СО² в течение 24 часов. Изучали спонтанную (не индуцированную) продукцию TNF. Оценку количественного содержания TNF проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием двух моноклональных антител в авидин-биотиновой системе («Cytokin», C. Петербург) с использованием многоканального иммуноферментного анализатора марки «Линкей», С. Петербург. Концентрацию TNFопределяли путем построения калибровочной кривой по результатам титрования рекомбинантного TNFв качестве стандарта и выражали в пг/мл.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием компьютерных программ Microsoft Excel для Windowsxp и Statistica 6. Использовали методики описательной статистики, в том числе вычисление среднего арифметического (М), ошибки среднего арифметического (m), медианы, моды, интервал наименьших и наибольших значений. Сравнение двух групп, подчиняющихся нормальному распределению, проводили с помощью t-критерия Стьюдента, а не подчиняющихся нормальному распределению - теста Вилкоксона. Для оценки достоверности рассчитывали величину p, указывающую вероятность безошибочного прогноза. В качестве критического уровня достоверности был принят критерий 0,05.
Результаты и обсуждение.
В результате проведенных исследований у всех больных активным туберкулезом легких в сыворотке крови установлен повышенный уровень TNFдостоверно превышающий уровень его продукции у здоровых. Так в группе 1 среднее значение (M) TNFсоставило 185,7±58 пг/мл, медиана - 100, мода - 60, интервал 60-450, в группе 2 М - 140,6±36, медиана - 112, мода - 112, интервал 60-250, в группе 3 М - 181,2±39,2, медиана - 205, мода - 60, интервал 60-350 по сравнению со здоровыми (группа 4) М – 64,0±7,9 пг/мл, медиана - 60, мода - 60, интервал колебаний 30-112, (p1-4=0,040, p2-4=0,034, p3-4=0,03). Существенных различий по уровню TNFмежду больными с разными клиническими формами туберкулеза в сыворотке крови не получено. Данные представлены в Табл.1.
                                                                                                                              Таблица 1

 Уровень TNFв сыворотке крови больных с разными клиническими формами туберкулеза и здоровых

При изучении уровня TNFв супернатантах 24-часовых культур мононуклеарных клеток установлена аналогичная тенденция, характеризующаяся гиперпродукцией TNFу больных активным туберкулезом легких по сравнению со здоровыми Данные представлены в таблице 2. Самый высокий уровень TNFбыл обнаружен у пациентов группы 1 с казеозной пневмонией М - 2235±681,5 пг/мл (медиана – 1800, интервал колебаний 310- 4500), что было достоверно больше, чем у больных с диссеминированным туберкулезом легких М - 1217,8±471,7 пг/мл (медиана 500, интервал 180-4660), p1-2=0,0468. Это подтверждает ранее приведенные данные экспериментальных исследований, что TNFпринимает участие в формировании некроза у пациентов с туберкулезом. Обращает на себя внимание большой размах индивидуальных значений TNFво всех группах больных активным туберкулезом легких.

                                                                                                                            Таблица 2

 Уровень TNFв супернатантах 24 часовых культур мононуклеарных клеток у больных с разными клиническими формами туберкулеза и здоровых

Выводы:

1. У всех больных активным туберкулезом легких отмечается гиперпродукция TNF, значительно превышающая его уровень у здоровых.
2. Высокий уровень TNFрегистрируется у больных активным туберкулезом легких, как в сыворотке крови, так и в супернатантах культур периферических мононуклеарных клеток.
3. Однако при исследовании супернатантов культур периферических мононуклеарных клеток уровень TNFвыше и наиболее выражен у больных с казеозной пневмонией.

Список литературы

1. Дунаев П.Д., Бойчук С.В., Мустафин И.Г. Свойства и роль фактора некроза опухолей альфа в патогенезе ВИЧ-инфекции. //Казанский медицинский журнал. 2012. Т.93. №2. С. 290-293.
2. Ройт А., Бростофф ДЖ., Мейл Д. Иммунология / Пер. с англ. М.: «Медицина», 2000. 582 с.
3. Салина Т.Ю., Морозова Т.И. Иммунологические аспекты туберкулезной инфекции // Цитокины и воспаление – 2014. – т.13, №2. – С.5-10.
4. Bazzoni F., Beutler B. The tumor necrosis factor ligand and receptor families // N. engl. J. Med. 1996. Vol. 334. P. 1717-1725. 

5. Carswell E.A., Old L.J., Kassell R.L., Green S, Fiore N., Williamson B. An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1975. Vol.72. P. 3666-3670.
6. Crevel R., Ottenhoff H.M., Meer W.M. Innate Immunity to Mycobacterium tuberculosis // Clinical Microbiology Reviews 2002. Vol. 15, №2. P. 294-309.
7. Rook G.A.W., Attivan R. Al. Cytocines and the Koch phenomenon // Tubercle. 1991. Vol.72. P.13-20.