В данной статье приводятся экспериментальные данные по изучению влияния на организм лабораторных животных природных иммуномодулирующих препаратов: арабиногалактана, спиртовой настойки кордицепса, ветеринарного препарата траметин. Исследовали жизнеспособность лабораторных животных, привитых внутрибрюшинно суспензией клеток асцитной карциномы Эрлиха. В исследовании оценивалась выживаемость животных, результаты гематологических исследований. В дальнейшем планируется изучение влияния комплексной терапии с использованием иммуномодулирующих и химиотерапевтических препаратов.

Ключевые слова: асцитная карцинома Эрлиха, внутрибрюшинно, иммуномодуляторы, арабиногалктан, траметин, кордицепс.

В представленной работе проводилось изучение лекарственных препаратов, которые обладают иммуномодулирующими свойствами – траметина, арабиногалактана, спиртовой настойки кордицепса. Объектом исследования являлась перевиваемая опухоль асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ).

Цель работы состояла в изучении влияния данных препаратов на выживаемость лабораторных животных.

Методика эксперимента. В качестве экспериментальных животных использовали беспородных белых мышей-самцов массой 25 – 30 г в возрасте 2 – 3 мес., выращенных во ФГУЗ «Иркутский противочумный научно- исследовательский институт» Роспотребнадзора и содержавшихся в стандартных условиях вивария. Объектом исследования являлись клетки АКЭ, пролиферирующей в перитонеальной полости мышей-самцов.

Все исследования были выполнены в соответствии с этическими требованиями по работе с экспериментальными животными, изложенными в следующих нормативно-правовых документах: «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к приказу МЗ СССР №775 от 12.08.1977 г.); Хельсинская декларация всемирной медицинской ассоциации, 2000 г.; «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005) «Правила лабораторной практики» (приложение к приказу МЗ РФ №708н от 23.08.2010 г.).

АКЭ прививали в брюшную полость мыши в дозе 0,2 мл суспензии [2]. После прививки всех испытуемых мышей разделили на 5 групп по принципу аналогов, в каждой группе было по 6 мышей: I – Контрольная – интактные мыши; II – Контрольная – привита АКЭ (без лечения); III – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение «Траметином»); IV – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение «Арабиногалактаном»); V – Экспериментальная – привита АКЭ (лечение «Кордицепсом»).

Введение препаратов лабораторным животным после прививки опухоли начинали через 6 дней. Дозировки препаратов были выбраны в соответствии с наставлениями для препаратов. Соответственно, дозировка на одну мышь составила: АГ – 1 мл, настойки кордицепса и раствора траметина – по 0,6 мл. Препараты выпаивали перорально с помощью зонда в течение 14 дней, проводили клиническое наблюдение, оценивали продолжительность жизни мышей.

В процессе эксперимента проводилось ежедневное наблюдение за мышами, а именно: за их активностью, общим состоянием здоровья, аппетитом, выживаемостью. Для исследования проводили забор крови у животных наблюдаемых групп через 8 дней после начала лечения. Для получения крови у мышей кончик хвоста опускали в тѐплую воду, затем обсушивали марлей и срезали кончик хвоста. После взятия крови рану на хвосте прижигали спиртовым раствором йода [4]. Гематологический анализ крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе «Mindrey 5300» (Китай) с использованием реагентов той же фирмы.

Среднеарифметическую величину находили в соответствии с методическим руководством Р.Б. Стрелкова[1].

Результаты исследования. Учѐт гибели животных проводили в течение всего эксперимента. Эффективность препарата оценивали по его влиянию на продолжительность жизни животных. Изменения некоторых гематологических показателей крови представлены в Табл.1.

Таблица 1

Результаты гематологических исследований

Показатели	Группы
	Норма	I (интактные)	II (заражѐнные)	III (Траметин)	IV (АГ)	V (Кордицепс)
Лейкоциты (WBC), 109/л	7.5±0.3	16.36±6,08	7.84±6.75	15.56±11.48	57.4±8.4	8.5±8.2
Нейтрофилы (Neu), %	5 – 40	9.71±4.33	5.76±5.12	12.06±10.38	41.48±2.24	6.2±5.3
Лимфоциты (Lym), %	30 – 90	6.3±1.7	1.45±0.89	2.82±1.03	6.75±1.92	1.59±1.38
Моноциты (Mon), %	0 – 10	0.21±0.14	0.02±0.01	0.3±0.2	0.02±0.01	0.02±0.02
Эозинофилы (Eos), %	0 – 5	0.09±0.02	0.47±0.32	0.36±0.13	9.01±8.62	0.73±0.63
Базофилы (Bas), %	0 – 1	0.09±0.05	0.015±0.004	0.03±0.03	0.15±0.08	0.01±0.01
Эритроциты (RBC), 1012/л	7.7±12.5	8.39±0.24	1.78±1.71	7.84±0.45	6.05±0.64	1.54±1.47
Гемоглобин (HGB), г/л	10 – 20	139±4.14	32.3±30.8	133.6±6.7	108±12.07	26±24.89
Гематокрит (HCT), %	35 – 45	58.6±2.3	11.1±10.6	51.46±5.25	49.3±2.5	11.8±11.4
Тромбоциты (PLT), 109/л	–	1273.8±172.1	249±238.05	1218±165.55	977±546.5	302.5±289.3

В таблице приведены показатели нормы крови лабораторных мышей [5]. По результатам гематологического анализа можно заключить, что в I-ой  группе (интактная) показатели крови находятся в пределах нормы. В III-ой и IV-ой группе наблюдается воспалительный процесс, т.к. содержание лейкоцитов является повышенным – 15.56-57.4х109/л. Содержание гемоглобина понижено в IV-й и V-ой группах. Настойка кордицепса оказывает значительный лечебный эффект, который проявляется в ослаблении воспалительного процесса. С другой стороны, при введении настойки кордицепса в экспериментальной группе животных отмечается резкое снижение содержания эритроцитов и гемоглобина.

Нами был проведѐн расчѐт  средней продолжительности жизни лабораторных животных по методике Першина Г.Н. [3]. Согласно выбранной методике, животных фиксировали, определяли срок гибели каждого животного. После гибели всех животных рассчитывали среднюю продолжительность их жизни в контрольной и опытной группах по формуле (%):

где, а – средняя продолжительность жизни мышей в леченой группе, б – средняя продолжительность жизни мышей в контроле.

Средняя продолжительность в группах составила, %: Траметин (III) – 3,7; АГ (IV) – 9,1; Кордицепс (V) – 5,3. По результатам расчѐта установлено, что лучшая выживаемость отмечается в группе IV.

По результатам работы можно сделать следующие выводы: по гематологическим исследованиям очевидно, что наиболее слабый лечебный эффект оказывает настойка кордицепса (V); в группе АГ (IV) наблюдали наиболее высокое содержание лейкоцитов, по сравнению с другими группами, что свидетельствует о сильном воспалительном процессе в организме животных (57.4±8.4х109/л); в группе с траметином (III) было отмечено повышение содержания эритроцитов (7.84±0.45×1012/л) и гемоглобина (133.6±6.77 г/л), а также гематокрита и тромбоцитов в крови, по сравнению с другими группами.

Заключение.

Из испытанных нами иммуномодулирующих препаратов в дальнейших экспериментальных исследованиях для разработки эффективной схемы комплексного лечения АКЭ при комплексной терапии могут быть использованы препараты траметин и арабиногалактан, наряду с химиотерапевтическими препаратами.

 

Список литературы

1.     Жаков И.С. Методические указания к методу вычисления среднеквадратической ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин с помощью таблицы Р.Б. Стрелкова / И.С. Жаков, В.М. Жаков // Витебск. – 1986. – С. 4 – 6.

2.     Инжеваткин Е.В. Практикум по экспериментальной онкологии на примере асцитной карциномы Эрлиха: Метод. разработка / Сост. Е.В. Инжеваткин. Краснояр. гос. ун-т – Красноярск, 2004. – С. 10.

3.     Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии (практическое руководство) / под ред. Г.Н. Першина // издание второе, Изд-во Медицина, Москва. – 1971. – С. 367.

4.     Степанов Ю.М. Лабораторные методы диагностики. Исследование крови. Учебно-методическое пособие / Сост. Ю.М. Степанов. Хакасский филиал ФГОУ ВПО «КрасГАУ». – Абакан, 2004. – С. 55.

5.     Murphy J.C. Hematologic and serum protein reference values of Octodon degus / J.C. Murphy, S.M. Niemi, K.M. Hewes and etc. // Source American journal of veterinary research, 39:4, 1978, Apr. – pg. 713 – 5. [Электронный ресурс] – http://degu.by/viewtopic.php?f=10&t=354 (дата обращения 26.04.2015 г.).