ОПРЕДЕЛЕНИЕ 2,6-ди (1-МЕТИЛЭТИЛ) ГИДРОКСИБЕНЗОЛА В ПЛАЗМЕ КРОВИ МЕТОДОМ УФ-СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ

2,6-ди(1-метилэтил) гидроксибензол (пропофол) (в дальнейшем 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ) – это биологически активное соединение, применяющееся в медицине и ветеринарии в качестве средства для наркоза [6, 8].

По физическим свойствам это прозрачная, слегка коричневатая жидкость со своеобразным запахом. Температура плавления 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ 18оС [3, 8].

Данное вещество обладает токсическими свойствами для теплокровных. LD50 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ при пероральном введении крысам составляет 500 мг/кг, при внутривенном – 42 мг/кг [8].

Описаны случаи отравления людей данным веществом [7].

Активное применение 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ в лечебной практике и наличие смертельных исходов при отравлениях данным соединением определяют его значение как потенциального объекта судебно- химического исследования.

Многие вопросы судебно-химического анализа 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ остаются недостаточно разработанными. Так, например, мало изучены особенности определения этого вещества в биожидкостях.

Целью исследования явилось изучение возможностей определения 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ в плахме крови спектрофотометрическим методом.

Материалы и методы исследования

Объект исследования – 2,6-ди(1-метилэтил) гидроксибензол (2,6-ди(1-МЭ)ГОБ) фирмы Sigma Aldrich с содержанием основного вещества 97 %.

Как метод анализа рассмотрена УФ-спектрофотометрия. В качестве растворяющей среды для спектрофотометрических определений выбран 95% этанол [2, 4].

Измерение оптической плотности этанольных растворов аналита проводили на приборе СФ-2000 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм. Особенности поглощения аналита в среде этанола исследовали в диапазоне длин волн 190-360 нм. За аналитическую длину волны принимали максимум наиболее длинноволновой полосы поглощения.

Определяли линейный диапазон подчинения основному закону светопоглощения. Рассчитывали уравнение градуировочного графика.

Проводили серию параллельных определений аналита в субстанции и вычисляли метрологические характеристики.

На основании предварительных исследований разрабатывали методику определения (2,6-ди(1- МЭ)ГОБ) в плазме крови с использованием метода УФ-спектрофотометрии. Предапрительно готовили модельные смеси аналита с плазмой крови с содержанием аналита 0,01-0,2% [1, 5].

Результаты исследования и их обсуждение

Установлено, что в среде этанола спектр (2,6-ди(1-МЭ)ГОБ) имеет две выраженные полосы поглощения с максимумами в области 218 и 273 нм.

При измерениях оптической плотности этанольныъ растворов аналита в области длинноволнового максимума наблюдается линейная зависимость   оптической   плотности   от концентрации   аналита в фотометрируемом этанольном растворе в диапазоне 3-100 мкг/мл.

Линейная зависимость описывается уравнением прямой линии, которая в данном случае имеет вид: А=0,010596∙С-0,000355, где А-оптическая плотность, С- содержание аналита, мкг 1 мл фотометрируемого раствора.

Для проведения серии параллельных определений (2,6-ди(1-МЭ)ГОБ) в субстанции предложена методика, в соответствии с которой около 0,025 г (точная навеска) анализируемого соединения растворяли в 10-15 мл этанола в мерной колбе вместимостью 25 мл и доводили до метки этанолом. 1,0 мл полученного раствора вносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили до метки этанолом. Полученный раствор фотометрировали в области аналитической длины волны на фоне этанола. Результаты шести параллельных определений (n=6; Р=0,95) представлены в табл. 1.

Таблица 1 Результаты количественного определения 2,6-ди(1-метилэтил)гидроксибензола ((2,6-ди(1-МЭ)ГОБ) в субстанции методом спектрофотометрии (n=6, P=0,95)

Как свидетельствуют данные табл. 1, относительная ошибка среднего результата (n=6, P=0,95) составляет 0,98%.

Показана возможность применения УФ-спектрофотометрии на основе поглощения в среде этанола для определения рассматриваемого соединения в плазме крови.

Разработанная методика сводилась к тому, что образец матрицы массой 25 г, содержащий определённое количество 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ, настаивали дважды по 30 мин с порциями ацетона (50 г каждая). Первое и второе извлечения отделяли от частиц биоматериала фильтрованием через бумажный фильтр, фильтр промывают 20 г изолирующего агента.

Извлечения и порцию промывной жидкости объединяют и удаляют растворитель в токе воздуха комнатной температуры. Остаток растворяют в 5 мл ацетона 0,1 мл полученного раствора наносили на линию старта хроматографической пластины типа «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ и хроматографировали, используя подвижную фазу гексан-ацетон (9:1). Хроматограммы проявляли в УФ- свете (254 нм). Аналит элюировали из сорбента 10 мл этанола в течение 10 мин. Элюат спектрофотометрировали при аналитической длине волны (273 нм).

Результаты определения 2,6-ди(1-МЭ)ГОБ в модельных смесях с плазмой крови (по 5 параллельных определений каждой концентрации аналита в биоматериале) представлены в табл. 2.

Таблица 2 Результаты количественного определения 2,6-ди(1-метилэтил) гидроксибензола (2,6-ди(1-МЭ)ГОБ) в плазме крови разработанной методикой (n=5, P=0,95)

Как свидетельствуют полученные данные, при содержании анализируемого вещества в количестве 2,5-50,0 мг в 25 г биоматрицы с помощью разработанной методики удаётся определить в плазме крови 83,02-84,15% с полушириной доверительного интервала 2,14-3,52%, Определяемый минимум аналита в 100 г плазмы составляет 0,11 мг.

Выводы

1.   Изучены особенности поглощения 2,6-ди(1-метилэтил) гидроксибензолом УФ-излучения в среде этанола.

2.   Показана возможность применения УФ-спектрофотометрии по поглощению в среде этанола для оценки количественного содержания аналита.

3.      Разработана методика определения 2,6-ди(1-метилэтил) гидроксибензола в плазме крови. Полуширина доверительного интервала (n=5; P=0,95) составляет

Список литературы

1.   Пат. РФ 2395081. Шорманов В.К., Сухомлинова Е.А., Елизарова М.К., Сипливая Л.Е., Сипливый Г.В. Способ определения 2-метокси-4-аллилгидроксибензола в биологическом материале. Доступно по:     https://findpatent.ru/patent/239/2395081.html.Ссылкаактивнана26.04.2020.

2.   Пугачёва О.И., Асташкина А.П., Шорманов В.К., Останин М.А. Особенности распределения 2,4- и 2,6-диметильных производных гидроксибензола в организме теплокровных животных // Судебно- медицинская экспертиза. – 2014. – Т. 57, № 4. – С. 44-48.

3.       Химический энциклопедический словарь. Под ред. И.Л. Кнунянца. – М.:Советская энциклопедия, 1983. – 792 с.

4.    Шорманов В.К., Асташкина А.П., Останин М.А., Гришечко О.И., Цацуа Е.П. Особенности распределения 4-метоксигидроксибензола в организме теплокровных животных при летальных отравлениях // Судебно-медицинская экспертиза. – 2016. – Т. 59, № 4 . – С. 48-53.

5.     Шорманов В.К., Коваленко Е.А., Дурицын Е.П. Определение фурадана в биологических жидкостях // Судебно-медицинская экспертиза. – 2005. – Т. 48, № 5. – С. 36-39.

6.     Kotani Y., Shimazawa M., Yoshimura S., Iwama T., Hara H. The Experimental and Clinical Pharmacology of Propofol, an Anesthetic Agent with Neuroprotective Properties // CNS Neuroscience &Therapeutics. – 2008. – Vol. 14. – Р. 95–106.

7. Levy R.J. Clinical Effects and Lethal and Forensic Aspects of Propofol // J. Forensic. Sci. –.2011. – Vol. 56, N 1. – P. 142-147.

8. Propofol. PubChem. Available at: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Propofol. Accessed Aril 26, 2020.