Новости
09.05.2023
с Днём Победы!
07.03.2023
Поздравляем с Международным женским днем!
23.02.2023
Поздравляем с Днем защитника Отечества!
Оплата онлайн
При оплате онлайн будет
удержана комиссия 3,5-5,5%








Способ оплаты:

С банковской карты (3,5%)
Сбербанк онлайн (3,5%)
Со счета в Яндекс.Деньгах (5,5%)
Наличными через терминал (3,5%)

ОЦЕНКА ВЫЖИВАЕМОСТИ МИКРОРГАНИЗМОВ В ТРАНСПОРТНЫХ СРЕДАХ

Авторы:
Город:
Пермь
ВУЗ:
Дата:
03 января 2016г.

Актуальность исследования. Проблема достоверности микробиологической диагностики гнойно- воспалительных заболеваний, связанная с возможностью потери нестойких возбудителей на долабораторном этапе, остается актуальной для современной медицины. Для сохранения жизнеспособности микробов на этапе транспортировки материала (от постели больного до лаборатории) в лечебной практике широко используются транспортные среды (чаще всего, среда Amies). Считается, что их состав подобран таким образом, что эти среды предупреждают гибель микробных клеток, сохраняют их жизнеспособность, но при этом препятствуют размножению. Последнее очень важно при необходимости количественного учета присутствующих в клиническом материале микробов, когда их концентрация имеет диагностическое значение. Однако, поскольку среди гноеродных микроорганизмов присутствуют как весьма устойчивые во внешней среде (например, стафилококки, энтеробактерии), так и очень чувствительные к внешним воздействиям (стрептококки), создание универсальной транспортной среды представляется весьма трудной задачей. Поэтому врачам-клиницистам, как и специалистам-бактериологам важно представлять реальные показатели выживаемости основных клинически значимых микробов в транспортных средах.
Исходя из этого, целью нашей работы стало определение уровней выживаемости микробных культур в транспортной среде Amies.
Материалы и методы. В эксперименте использовали культуры 7 видов:
- Staphylococcus aureus;
- Streptococcus pyogenes;
- Enterococcus faecalis;
- Escherichia сoli;
- Pseudomonas aeruginosa;
- Acinetobacter lwoffi;
- Candida albicans.
Все культуры имели клиническое происхождение и были выделены из биоматериала от пациентов детского соматического стационара. Из суточных культур указанных микроорганизмов готовили взвеси в физиологическом растворе с помощью стандарта мутности № 0.5 по МакФарланду. В полученные взвеси погружали тампоны из наборов транспортной среды Amies на 10 сек., после чего тампоны вносили в транспортную среду. Пробирки со средой Amies хранили при комнатной температуре до 2-х суток.
Концентрацию жизнеспособных микроорганизмов, сохранившихся в тампонах, оценивали в следующие сроки:
- непосредственно после постановки;
- через 1 час;
- через 24 часа;
-через 48 часов.
Для этого извлекали тампон из среды, энергично прополаскивали его в стандартном количестве физиологического раствора (1 мл), после чего готовили последовательные десятикратные разведения получившейся взвеси в стерильном физиологическом растворе до 10 -5 включительно.
Из каждого разведения производили количественные высевы на питательный либо кровяной агар. Посевы инкубировали 24 часа, после чего подсчитывали количество выросших колоний. Исходя из этих показателей, вычисляли количество выживших клеток в пробирке с транспортной средой. Эксперименты с каждой из культур выполняли в 3-х повторностях.
Результаты и обсуждение. Прежде всего, при анализе результатов исследования мы оценивали пары показателей: сразу после постановки - через 1 час. Во всех экспериментах внутри этих пар различия не превышали 40%, что свидетельствовало, на наш взгляд, об адекватности избранного методологического подхода и позволяло считать результаты эксперимента в целом достоверными.
При анализе последующей динамики концентрации микроорганизмов на тампонах при их хранении в среде Amies было выяснено, что концентрация большинства изученных культур существенно возрастает уже через 24 часа, а тем более - через 48 часов по сравнению с исходной.
Прирост концентрации в 1,5-2 раза после 24 часов пребывания в среде Amies мы наблюдали у культур St.aureus, E.сoli, Ent. faecalis, Ps.aeruginosa, A. lwoffi и C. albicans. Эту динамику трудно связать с сохранением запаса энергетических и пластических субстратов в микробных клетках или растворе, поскольку в эксперименте использовали суточные агаровые культуры (то есть, находящиеся в поздней стационарной фазе), а для приготовления микробных взвесей применяли физиологический раствор.
Через 48 часов повышение концентрации в 3-4 раза отмечено у культур St.aureus, Ent. faecalis, Ps.aeruginosa, A. lwoffi. Культуры E.сoli и C. albicans размножались еще более энергично, поэтому их показатели отличались от исходных более чем в 10 раз.
Что же касается культуры Str.pyogenes, то ее исходная концентрация сохранялась лишь в течение 1-го часа, после чего содержание жизнеспособных бактерий резко падало и составляло через сутки менее 1% от исходного.
Безусловно, проведенное исследование является модельным, и его результаты следует осторожно переносить в реальные условия клинической микробиологии. Однако, если даже взвеси культур в физиологическом растворе способны давать существенный прирост своей концентрации при пребывании в транспортной среде, то при внесении в транспортную среду трофических компонентов (белки, полисахариды, клеточный детрит и т.п.), неизбежно присутствующих в биоматериале, результаты могут оказаться еще более неожиданными.
Выводы
1. Длительное хранение микробных культур в транспортной среде Amies способно приводить к существенным изменениях их концентрации. Так, виды, характеризующиеся высокой устойчивостью во внешней среде и нетребовательностью к питательным средам, способны размножаться в транспортной среде Amies.
2. Жизнеспособность культуры Str.pyogenes сохраняется в транспортной среде Amies в течение нескольких часов, а к 24 часам хранения концентрация микроба резко падает.
3. Для эффективной и достоверной микробиологической диагностики даже при использовании транспортных сред необходима оперативная доставка биоматериала в лабораторию. Только в этом случае можно получить достоверные, неискаженные результаты.