ИЗЫСКАНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ ЖИВОЙ И ГАММА-ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИН ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЖИВОТНЫХ ОТ БРУЦЕЛЛЕЗА

Важная роль в борьбе с бруцеллезом как крупного, так и мелкого рогатого скота принадлежит средствам специфической профилактики с рациональными схемами их использования.

Б.А. Шабалин  и  др. (2008) предлагают для создания противобруцеллезной вакцины взвесь в равных пропорциях инактивированных нагреванием вирулентных штаммов B. melitensis №№ 21 и 145, B. abortus 544 в физиологическом растворе, консервированную добавлением 0,5% фенола. В качестве адъюванта использовать гидроокись алюминия.

П.К. Аракелян и др. (2012) рекомендуют ускорить разработку и внедрение в практику иммуногенной инактивированной инагглютиногенной противобруцеллезной вакцины, поскольку индуцируемый ею ответ не препятствует проведению серологической диагностики инфекции.

Была поставлена задача – изучить на морских свинках иммунологическую эффективность живых и гамма- инактивированных вакцин из штаммов B. abortus 82, B. melitensis Рев-1 и живого сухого и нативного антигена из инагглютиногенного штамма B. abortus R-1096, а также этого антигена по фону вакцин из штаммов 82 и Рев-1 и гомологичному фону.

Материалы и методы исследований. В опыте использовали 90 морских свинок. Животных, по 15 голов в группе, иммунизировали живой вакциной из штаммов B. abortus 82 (SR-форма) в дозе 1 млрд. м.к.(1-я группа), 82-γ вакциной в дозе 5 млрд. м.к.(2-я группа), живой вакциной из штамма B. melitensis Рев-1 (S-форма) в дозе 500 тыс. м.к.(3-я группа), Рев-1-γ вакциной в дозе 100 млн. м.к (4-я группа). Антиген из штамма R-1096 (R-форма) сухой живой и нативный живой в дозе 1,5 млрд. м.к. (5-я и 6-я группа) подкожно в области паха.

Через 15 суток, 1, 2 и 3 месяца у животных брали кровь для проведения серологического исследования в РБП, РА, РСК- S и РСК- R.

Спустя 3 месяца по 8 голов из каждой группы реиммунизировали живым антигеном из штамма R-1096 в дозе 1,5 млрд. м.к. Остальных морских свинок каждой группы не реиммунизировали.

У ревакцинированных животных серологические исследования проводили через 15 суток, 1 и 2 месяца, а у первично привитых продолжали исследования через 4 и 5 месяцев после иммунизации. Через 5 месяцев после вакцинации и через 2 месяца после ревакцинации морских свинок, в том числе 8 интактных, контаминировали культурой вакцинного штамма B. abortus 82 в дозе 1 млн. м.к. со стороны, противоположной месту введения вакцин при иммунизации и реиммунизации.

Спустя месяц после контаминации животных забивали с проведением серологического  и бактериологического исследований, по результатам которых определяли иммунологическую эффективность вакцинации и ревакцинации.

Результаты исследований. Серологическое исследование морских свинок через 3 месяца после иммунизации, перед ревакцинацией, показало, что все иммунизированные животные во всех группах показывали отрицательные результаты РБП, РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном. При этом РСК с R-антигеном была положительной у морских свинок, иммунизированных вакциной из штамма 82, в титре 20,0±10,0.

Животные, иммунизированные вакцинами из штаммов 82-γ, Рев-1 живой и γ-инактивированной, в РСК с R- антигеном реагировали отрицательно.

Морские свинки, иммунизированные антигеном из штамма R-1096 живым сухим и нативным, показывали в РСК с R-антигеном из гомологичного штамма R-1096 положительный результат в титрах соответственно 23,3±8,8 и 13,3±3,3.

Ревакцинация морских свинок вакциной из инагглютиногенного штамма B. abortus R-1096 не спровоцировала синтез S-антител ни в одной из групп животных, иммунизированных вакцинами из SR-формы бруцелл (штамм 82), S-форм бруцелл (шт. Рев-1) и R-форм бруцелл (шт. R-1096). Все морские свинки показывали отрицательный результат РБП, РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.

Но ревакцинация данной вакциной вызвала активный синтез R-антител, улавливаемых в РСК с R- антигеном. В 1-й и 2-й группах титр антител равнялся соответственно 161,7 ±129,8 и 120,0 ±40,0. В 3-й и 4-й группах 13,3 ±3,3 и 53,3 ±13,3. В 5-й и 6-й группах, по гомологичному фону, 213,0±53,3 и 160,0±0,0.

Спустя 5 месяцев с момента иммунизации морских свинок и 2 месяца после реиммунизации титры антител продолжали снижаться. Закономерность их выявления осталась прежней, т.е. отрицательные показатели серологических реакций с S-антигенами и положительная РСК с R-антигеном.

Результаты изучения иммуногенных свойств вакцин представлены в таблице. Из таблицы видно, что в контрольной группе, где интактным животным ввели живую вакцину из штамма 82 в дозе 1 млн. м.к., произошло генерализованное обсеменение органов и лимфатических узлов. ИИ составил 53,0±16,4%.

Во 2-й группе морских свинок, иммунизированных живой вакциной из штамма 82 и контаминированных гомологичной вакциной, количество иммунных животных составило 100%. Ни от одной морской свинки не выделили культуру бруцелл. У животных был низким и ИВС, равный 1,39±0,23.

Ревакцинация морских свинок живым антигеном из штамма R-1096 снизила иммуногенные свойства вакцины из штамма 82 до 75 % (3-я группа).

Таблица 1  

Результаты изучения иммуногенных свойств противобруцеллезных вакцин (М ±м)

Гамма-инактивированная вакцина из штамма 82 (4-я группа) показала отсутствие защиты против 1 млн. дозы контаминанта. У 4-х морских свинок было генерализованное обсеменение органов и лимфатических узлов и у одного животного региональное.

Ревакцинация морских свинок 5-й группы, иммунизированных 82-γ-вакциной, живым антигеном из штамма R-1096 создавала иммунную защиту у 75 % животных, т.е. на уровне животных 3-й группы, иммунизированных живой вакциной из штамма 82.

Живая вакцина из штамма Рев-1 (6-я группа) создавала иммунитет у 66,6 % морских свинок. Произошло региональное инфицирование у одного животного.

Ревакцинация морских свинок, иммунизированных живой вакциной из штамма Рев-1, живым антигеном из штамма R-1096 (7-я группа) снизила защитные свойства вакцины до 50 %. Подобная картина отмечалась и у животных 3-й группы, привитых живой вакциной из штамма 82. Морские свинки 8-й группы, иммунизированные Рев-1-γ вакциной, были все контаминированы культурой штамма 82. ИИ был как в контрольной группе, равный 53,0±6,3.

Ревакцинация животных живым антигеном из штамма R-1096 повысила защитные свойства Рев-1-γ вакцины до 25 % (9-я группа). Иммунизация морских свинок живым сухим антигеном из штамма R-1096 создавала защиту от контаминации у 25 % животных (10-я группа).

Реиммунизация животных живым нативным повышала количество иммунных морских свинок до 60 %. Подобная закономерность была отмечена и у морских свинок 12-й и 13-й групп, где их иммунизировали нативным живым антигеном из штамма R-1096.

Заключение. Результаты работы, проведенной по изучению иммуногенных свойств различных противобруцеллезных вакцин с использованием вакцинного штамма B. abortus 82 в дозе 1 млн. м.к. в качестве инфицирующего агента, свидетельствуют о пригодности данного способа при отсутствии условий для заражения животных культурой вирулентного штамма бруцелл.

При этом установили, что реиммунизация морских свинок живым антигеном из инагглютиногенного штамма B. abortus R-1096 по фону вакцин из штаммов B. melitensis Рев-1 (S-форма), B. abortus 82 (SR-форма) и B. abortus R-1096 (R-форма) не спровоцировала синтеза S-антител ни в одной из групп животных при исследовании их через 15 суток после реиммунизации. Не обнаружили S-антител у реиммунизированных животных по фону вакцин из штаммов 82 и R-1096 и через 1 и 2 месяца после реиммунизации.

Отдельные морские свинки, реиммунизированные живым антигеном из штамма R-1096 по фону вакцины из штамма Рев-1, показывали положительную РСК-S в низком титре антител (1:5) через 1 и 2 месяца с момента реиммунизации.

Кроме того, обнаружили такую закономерность, что при ревакцинации морских свинок живым антигеном из штамма R-1096 по фону высокоиммуногенных вакцин через 3 месяца после иммунизации их иммуногенные свойства снижаются. Что важно учитывать в производственных условиях. Необходимо соблюдать сроки ревакцинации. А реиммунизация в эти сроки живым антигеном из штамма R-1096 по гомологичному фону (слабоиммуногенная вакцина) повышает иммуногенность биопрепарата. Разницы в иммуногенных свойствах живого антигена из штамма R-1096 сухого и нативного не отмечено.

Список литературы

1.     Аракелян, П.К. Проблемы специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота с использованием живых слабоагглютиногенных вакцин /П.К. Аракелян, Е.Б. Барабанова, Г.В. Разницина, С.К. Димов и др.// Ветеринария.-2012.-№ 11.-С.6-9.

2.     Шабалин, Б.А. Разработка препарата для иммунизации против бруцеллеза / Б.А. Шабалин, Л.Б. Гаврилова, А.К. Федотов// Матер. науч. конф., посвящ. 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России».-Киров.-2008.-С.221-222.