ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ФРАКЦИИ КРОВИ НА СКОПЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ ДЛЯ ЗАБОРА ИХ ПРИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОЙ ФАРМАКОТЕРАПИИ

Антибактериальная терапия (АБТ) у больных с гнойной хирургической инфекцией, в том числе и гнойного гайморита, является ведущим методом в комплексном лечении этого заболевания. [1,2,3,4].

Использование классических путей введения антибиотиков (внутривенный, внутримышечный) не всегда обеспечивает адекватную концентрацию препаратов в очаге гнойного поражения. Одним из путей решения этой проблемы является применение методов экстракорпоральной антибактериальной терапии, которые в течение ряда лет разрабатывается многими научными коллективами. В первую очередь это относится к инкубационной технологии применения антибиотиков [5,6,7,8].

Использование метода инкубации клеточной массы позволяет кардинально изменить распределение препаратов в организме пути их метаболизма и выведения, в несколько раз уменьшить курсовые дозы антибиотиков, при этом создавая их высокие бактерицидные концентрации только в очагах инфекционного воспаления с минимальным токсическим воздействием на организм [9,10,11,12].

Реализация идеи направленного транспорта лекарств идёт по линии использования эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов в качестве контейнеров для доставки лекарственных средств [6,7]. Более распространена идея использования в качестве транспортеров для лекарств эритроциты крови.

Менее разработанной транспортной системой для антибиотиков является клеточная лейкоцитарная система, создаваемая на основе отечественных разработок. Перспективность такой транспортной системы, вероятность получения значительного терапевтического эффекта обсуждается в литературе в последнее время особенно интенсивно для противомикробных и противоопухолевых препаратов [13].

По мнению А.О. Юсифова [13] по фармакокинетическим параметрам лейкоцитарная транспортная система для антибиотиков может считаться более эффективной по сравнению с эритроцитарной клеточной транспортной системой.

Инкубация лейкоцитарной массы с антибиотиками с последующим возвратом активированных таким образом лейкоцитов в кровоток пациента, действительно представляет большой практический интерес. Метод с успехом используется при лечении больных как с тяжелыми гнойно-септическими процессами, так и у амбулаторных пациентов с различными вариантами иммунодефицитных состояний [14,15,16].

Отмечая высокую эффективность лейкоцитов в экстракорпоральной антибиотикотерапии, А.Л.Костюченко [17] рекомендует для получения определённого терапевтического эффекта инкубировать с антибиотиком не менее 3 млрд. клеток взрослого человека.

В тоже время, забор лейкоцитарной массы для направленного транспорта антибиотиков, многие авторы проводят по разной методике.

В основном для использования лейкоцитов для НТА, применяется цитовзвесь, полученная в результате отделения плазмы крови от осадочной жидкости, представляющая собой в основном скопления эритроцитов и тромбоцитов.

Так, С.В. Лохвицкий с соавт., [18], подготовку препарата, депонированного в лейкоцитах, предлагают проводить в шприце объёмом 5 мл с 250 ЕД (0,05 мл) гепарина и 0,1 мл полиглюкина, (для ускорения осаждения форменных элементов крови), куда производится забор 2 мл венозной крови. После отстаивания содержимого в штативе в течение 1 часа канюлей кверху плазму удаляют поршнем. Встряхиванием шприца цитовзвесь смешивают с антибиотиком, после инкубации в термостате при температуре 36-37°С на протяжении получаса, доведя объем крови до 2 мл 0,9% раствором NaCl, вводят внутривенно.

И.А. Карпушина и соавторы [19] сообщают о применении НТ антибиотиков в комплексном лечении острого панкреатита. Проведение НТ в данном случае обеспечивалось получением аутолейкоцитов при помощи аппаратного цитафереза.

Целью наших исследований было установить места наибольшего скопления лейкоцитов во фракциях крови, для забора их при экстракорпоральной фармакотерапии.

Как известно, в состав крови входят два компонента: форменные элементы (клетки) крови и плазма — жидкость, в которой взвешены форменные элементы.

Плазма (первая или верхняя фракция) представляет собой прозрачную, желтоватую, немного вязкую надосадочную жидкость, получаемая после центрифугирования цельной крови. По составу плазма является водным раствором, содержащий вещества с низкой и высокой молекулярной массой, которые занимают до 10% ее объема. Белки плазмы составляют 7% ее объема, неорганические соли — 0,9%; остальная часть состоит из нескольких органических соединений, например аминокислот, витаминов, гормонов, липопротеинов, которые имеют различное происхождение.

После центрифугирования цельной крови форменные элементы крови (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты) разделяются на два легко различимых слоя.

Нижний слой составляет 42—47% всего объема крови в гематокритной пробирке. Он имеет красный цвет и состоит из эритроцитов.

Слой белого или сероватого цвета, который располагается сразу же над ним (составляет 1% объема крови), в основном состоит из лейкоцитов (лейкоцитарная пленка, или светлый слой).

Возможность разделения форменных элементов определяется тем, что лейкоциты имеют меньшую плотность, чем эритроциты. Поверх лейкоцитов находится тончайший слой тромбоцитов, не различимый невооруженным глазом.

Обследование выполнено у 7 больных страдающих острым двухсторонним гнойным гайморитом (табл.1).

Забор крови из вены производили в процедурном кабинете, утром, натощак, с соблюдением всех правил асептики.

Для забора крови мы использовали вакуумные пробирки (вакумтейнеры). При этом, вена пунктируется иглой с переходником, к которому после попадания в вену присоединяется пробирка через переходник.

После набора необходимого количества крови (10 мл), отсоединяется пробирка, затем игла извлекается из вены, к месту прокола прижимается ватный шарик со спиртом.

Распределение лейкоцитов в трех фракциях крови, после центрифугирования. Таблица №1

Пробирку с кровью, центрифугировали в течение 3 минут, при обороте 3000 в минуту. После центрифугирования, пробирку ставили в гнездо штатива, в вертикальном положений, еще на 5 минут.

При этом четко наблюдается разделение крови на фракции, плазма и осадочная жидкость, между ними видна тонкая лейкоцитная пленка, в виде белесоватого кольца. Условно полученные три фракции крови мы обозначили по номерам I – плазма, II- лейкоцитная пленка, III- осадочная жидкость (форменные элементы).

Результаты наших исследований (табл.№1) показали, что лейкоциты в основном располагаются во второй фракции – лейкоцитной пленке (75,1), вторым по численности скопления лейкоцитов наблюдается в первой фракции – плазме крови (63,5), на третьем месте –осадочная жидкость (61,5).

Соотношение лейкоцитов в плазме и в осадочной жидкости почти одинаково, с небольшим преимуществом в плазме. Этот факт объясняется, тем, что плотность лейкоцитов меньше, чем плотность эритроцитов.

Таким образом, результаты наших исследований показали, что местом наибольшего скопления лейкоцитов в крови, после ее центрифугирования, наблюдается во второй фракции – лейкоцитной пленке, которая может быть ориентиром для забора лейкоцитарной массы при создании лейкоцитарной транспортной системы для направленного транспорта антибиотиков в очаг хирургической инфекции с помощью лейкоцитов.

Список литературы

1.    Ушкалова Е.А. Выбор карбопенемовых и гликопептидных антибиотиков для фармакологических списков лекарственных средств // Антибиот. и химиотер.- 2001.- Том.46.№ 3.- С.37-41.

2.    Антибиотикотерапия абдоминальной хирургической инфекции / Б.Р. Гельфанд, В.А. Гологорский, С.З. Бурневич и др.; Под ред. В.С. Савельева. –М., 2000.- 144 с.

3.    Di Rosa R, Di Rosa E, Panichi G. Anaerobic bacteria in postsurgical infections: isolation rate and antimicrobial susceptibility. J Chemother 1996; 8: 91-95.

4.   Wittmann D. H., Wittmann-Tylor A. Scope and limitations of antimicrobial therapy of sepsis in surgery. Arch. Surg. 1998; 383: 15-25.

5.     Шевцова О.М., Денисова О.И. Применение плазмафереза в сочетании с экстракорпоральной инкубацией эритроцитарной массы с антибактериальными препаратами // Тр. 9-ой конференции Московского общества гемафереза. - М. 2001.

6.     Кирдей Е.Г., Белохвостикова Т.С., Дмитриева Л.А., Чеглякова В.В. и др. Экстракорпоральная иммунокоррекция в лечении хронического остеомиелита // Сибирский мед. журн. - 2001. № 3. - С. 39-43.

7.   Михалев А.А., Горбачев В.И. Применение экстракорпоральной фармакокоррекции в лечении гнойно- септических осложнений у ВИЧ инфицированных больных/Государственный институт усовершенствование врачей, Городская клиническая инфекционная больница, Иркутск, Россия //http: medi.ru

8.     The Sanford Guide to Antimicrobial Therapy.31 st Edition/The editors: David N.Gilbert, Robert C Moellering, Merle A.Sande./ USA, Antimicrobial Therapy, Inc., 2001, 142 p.

9. Зуйков К. Г. /Рационализация диагностики и лечения осложненной инфекции мочевыводящих путей с применением экстракорпоральной модуляции эритроцитов антибактериальными препаратами// Дисс... канд. мед. наук. Воронеж, 2005.

10.   Экстракорпоральная антибактериальная фармакотерапия в комплексном лечении больных с острым пиелонефритом / Л. Л. Гендель, А. Ш. АбуИдда, А. К. Шведов и др. //Эфферентнаятерапия.- 2006. - Том 12,N 2. - С.22-27

11.    Гордеев М.С., Тарабарин В.И. "Опыт лечения больных панкреонекрозом с применением метода экстракорпоральной антибиотикотерапии". 1Х всероссийский съезд хирургов, Волгоград, 2- - 22 сент 2000 г, сборник трудов, с 29 - 30.

12. Guidelines on Urinary and Male Genital Tract Infections European Association of Urology., Naber K.G., Bergman B., Bishop M.C., Bjerklund Johansen T.E., Botto H., Lobel B., Jimenez Cruz F., Selvaggi F.P., 2000– 2003, 71 p.

13. Юсифов З.О. Фармакокинетические аспекты направленного транспорта антибиотиков в очаг хирургической инфекции с помощью клеточных носителей. (Экспериментальное исследование). Дисс.PhD. Караганда, 2017. 77с.

14. Н.Д.Ушакова Н.Д., В.В Мороз В.В., М.И.Коган М.И. Экстракорпоральная иммунофармакотерапия циклофероном эндотоксикоза при гнойно-воспалительных урологических заболеваниях// Вестник интенсивной терапии, 2004 г, №1.

15. Тихоновская О.А., Фохт О.М., Логвинов С.В., Петрова М.С., Каиров Г.Т. Способ профилактики воспалительных заболеваний органов малого таза после больничного аборта // патент Российской Федерации RU (11) 2308950 (13) C1.

16. Климов А.Н., Белоцерковский М.В., Гуревич К.Я. и др. Курсовое применение плазмообменов экстракорпорально модифицированной аутоплазмой на основе технологии криоплазмосорбции // Эфферент. тер. - 1995. - № 3.

17.Костюченко А.Л. Эфферентная терапия. СПб.: Фолиант, 2000. 432 с.

18.    Лохвицкий С.В., Гуляев А.Е. Лейкоцитарный транспорт атибиотиков. Сообщение 2. Клинические аспекты направленной доставки антибиотиков. // Медицина и экология. 1996. №1. С.45-47 19.Карпушина И.А., Стеблева Т.Ф., Бонитенко Е.Ю. /Применение методики направленного транспорта лекарственных веществ в клинической практике (Обзор литературы)// Российский биомедицинский журнал. -2004.- Т. 5, С. 404-408