МОДЕЛИРОВАНИЕ МЕТГЕМОГЛОБИНЕМИИ IN VITRO

Актуальность: Одним из наиболее клинически значимых производных гемоглобина является метгемоглобин (MetHb или Hi)-продукт окисления Fe2+ в составе гема до Fe3+, при этом железо теряет способность связывать и транспортировать кислород. Существует большое количество методов определения метгемоглобина в крови, среди которых наибольшее распространение получил фотометрический метод Evelyn- Malloy (считается референтным). В настоящее время, в связи с распространением анализаторов газов крови с входящими в их состав блоками ко-оксиметрии, а также портативными ко-оксиметрами, встает вопрос о сопоставимости между собой результатов, полученных при измерении различными приборами. По причине отсутствия коммерческих аттестованных контрольных материалов с высокими уровнями метгемоглобина (основная причина- нестабильность MetHb в крови и гемолизатах), возникает необходимость в создании
«кустарных» контрольных материалов, позволяющих провести сравнительные измерения на современных газовых анализаторах/ко-оксиметрах и классическим методом Evelyn-Malloy. Одним из основных метгемоглобинобразователей, использующихся для моделирования метгемоглобинемии, является нитрит натрия (NaNO2), причем его добавление к цельной крови применяется, как правило, в сочетании с последующим отмыванием эритроцитов для предупреждения воздействия «не прореагировавшего» нитрита натрия. Также метгемоглобин может быть получен при воздействии феррицианида калия (K3[Fe(CN)6]) на свободный эндоэритроцитарный гемоглобин.
Цель: оценить стабильность нитритного (без отмывания) и феррицианидного метгемоглобина в экспериментальных образцах крови.
Материалы и методы: 40 мл свежеполученной от здорового добровольца венозной крови были перенесены в равном количестве в 13 вакуумных гепариновых пробирок (по 3 мл крови). В дальнейшем в семь пробирок вносился 4% раствор NaNo2 в количестве от 5 до 35 мкл, а в оставшиеся шесть пробирок, после предварительного лизирования эритроцитов дезоксихолатом натрия, добавлялся 10% раствор 10% K3[Fe(CN)6] в количестве от 5 до 50 мкл. Впоследствии был проведен ряд измерений уровня метгемоглобина в полученных образцах крови: через 40, 70, 10, 135,200 и 480 минут.
Результаты и обсуждение: результаты измерений отражены в Табл.1 и 2. Выявленная стабильность феррицианидного MetHb, вероятно, обусловлена нарушением работы систем восстановления MetHb вследствие разрушения эритроцитов. Рост уровня нитритного MetHb (по сравнению с первоначальным), вызван, скорее всего, постепенным проникновением нитрита натрия внутрь эритроцитов, тогда как его последующее снижение может быть как следствием восстановления окисленного гемоглобина, так и переходом метгемоглобина в нитрозогемоглобин.

                                                                                                                             Таблица 1
Стабильность феррицианидного метгемоглобина

                                                                                                                   Таблица №2

 Изменение уровня метгемоглобина во времени при нитритном моделировании (без отмывания эритроцитов)

Выводы: феррицианидное моделирование метгемоглобинемии позволяет получить стабильные по уровню MetHb образцы крови, но требует обязательного предварительного лизирования эритроцитов, в то же время нитритное моделирование без отмывания эритроцитов не дает стабильного уровня MetHb, но, возможно, может быть использовано для оценки состояния восстановительных систем.