Актуальность: Одним из наиболее клинически значимых производных гемоглобина является метгемоглобин (MetHb или Hi)-продукт окисления Fe2+ в составе гема до Fe3+, при этом железо теряет способность связывать и транспортировать кислород. Существует большое количество методов определения метгемоглобина в крови, среди которых наибольшее распространение получил фотометрический метод Evelyn- Malloy (считается референтным). В настоящее время, в связи с распространением анализаторов газов крови с входящими в их состав блоками ко-оксиметрии, а также портативными ко-оксиметрами, встает вопрос о сопоставимости между собой результатов, полученных при измерении различными приборами. По причине отсутствия коммерческих аттестованных контрольных материалов с высокими уровнями метгемоглобина (основная причина- нестабильность MetHb в крови и гемолизатах), возникает необходимость в создании
«кустарных» контрольных материалов, позволяющих провести сравнительные измерения на современных газовых анализаторах/ко-оксиметрах и классическим методом Evelyn-Malloy. Одним из основных метгемоглобинобразователей, использующихся для моделирования метгемоглобинемии, является нитрит натрия (NaNO2), причем его добавление к цельной крови применяется, как правило, в сочетании с последующим отмыванием эритроцитов для предупреждения воздействия «не прореагировавшего» нитрита натрия. Также метгемоглобин может быть получен при воздействии феррицианида калия (K3[Fe(CN)6]) на свободный эндоэритроцитарный гемоглобин.
Цель: оценить стабильность нитритного (без отмывания) и феррицианидного метгемоглобина в экспериментальных образцах крови.
Материалы и методы: 40 мл свежеполученной от здорового добровольца венозной крови были перенесены в равном количестве в 13 вакуумных гепариновых пробирок (по 3 мл крови). В дальнейшем в семь пробирок вносился 4% раствор NaNo2 в количестве от 5 до 35 мкл, а в оставшиеся шесть пробирок, после предварительного лизирования эритроцитов дезоксихолатом натрия, добавлялся 10% раствор 10% K3[Fe(CN)6] в количестве от 5 до 50 мкл. Впоследствии был проведен ряд измерений уровня метгемоглобина в полученных образцах крови: через 40, 70, 10, 135,200 и 480 минут.
Результаты и обсуждение: результаты измерений отражены в Табл.1 и 2. Выявленная стабильность феррицианидного MetHb, вероятно, обусловлена нарушением работы систем восстановления MetHb вследствие разрушения эритроцитов. Рост уровня нитритного MetHb (по сравнению с первоначальным), вызван, скорее всего, постепенным проникновением нитрита натрия внутрь эритроцитов, тогда как его последующее снижение может быть как следствием восстановления окисленного гемоглобина, так и переходом метгемоглобина в нитрозогемоглобин.

                                                                                                                             Таблица 1
Стабильность феррицианидного метгемоглобина

10% K3[Fe(CN)6] /	40 мин	70 мин	105 мин	135 мин	200 мин	480 мин
Экспозиция	MetHb	MetHb	MetHb	MetHb	MetHb	MetHb
5 мкл	5,3	5,2	5,5	5,5	5,4	5,4
10 мкл	9,9	9,7	10,1	10,3	10,2	10,3
20 мкл	19,4	19,3	19,6	19,8	19,6	19,9
25 мкл	24,5	24,4	24,9	24,8	24,3	24,5
30 мкл	28,1	29,5	29,6	29,7	29,7	29,5
50 мкл	49,7	49,5	50	49,6	49,6	49,4

                                                                                                                   Таблица №2

 Изменение уровня метгемоглобина во времени при нитритном моделировании (без отмывания эритроцитов)

4% NaNO2 / Экспозиция	40 мин	70 мин	105 мин	135 мин	200 мин	480 мин
	MetHb	MetHb	MetHb	MetHb	MetHb	MetHb
5 мкл	17,3	17,8	16,8	15,1	11,6	2,9
10 мкл	26,6	28,6	28,2	26,8	22,9	7,9
15 мкл	37,4	40,8	41,2	40,4	37,1	18,8
20 мкл	40,6	44,6	45,4	45,2	42,3	23,2

25 мкл	52,8	58,2	60,3	61,7	61,7	42,8
30 мкл	57,5	61,6	63,9	65,8	70,1	56,4
35 мкл	59,7	63,2	66,3	68,4	75,7	70,4

Выводы: феррицианидное моделирование метгемоглобинемии позволяет получить стабильные по уровню MetHb образцы крови, но требует обязательного предварительного лизирования эритроцитов, в то же время нитритное моделирование без отмывания эритроцитов не дает стабильного уровня MetHb, но, возможно, может быть использовано для оценки состояния восстановительных систем.