14 апреля 2018г.
Чума – инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Yersinia pestis, по-прежнему угрожает многим группам населения в целом ряде государств во всем мире. Мировое увеличение случаев человеческой чумы и потенциальное использование бактерий в качестве биологического оружия усиливают необходимость совершенствования диагностических препаратов. Капсульный антиген (F1), экспрессируемый Y. pestis, является основным белковым компонентом капсулы чумного микроба и способствует предотвращению ее фагоцитоза клетками иммунной системы. Для идентификации чумного микроба важно обнаружение известного специфического маркера Y. pestis – F1 [1, 3].
Биологические особенности роста и продуктивности штаммов чумного микроба на мясных средах в целом удовлетворяет требования бактериологов, но в последние годы при производстве биопрепаратов возрос интерес к растительному белку, источником которого является доступное и недорогое сырье. Так при объединении соевых и мясных гидролизатов среда становится более сбалансированной, а аминокислотный состав в качественном и в количественном отношениях взаимно дополняют друг друга [2].
Культивирование штамма Yersinia pestis EV проводили на твердой питательной среде, содержащей в своем составе гидродизат сои, рН 7,2 в течение 72 ч при температуре 37 °С. Клетки смывали физиологическим раствором и двукратно обезвоживали охлажденным ацетоном. Капсульный антиген получали путем экстракции из ацетонвысушенных клеток 2,5 % раствором NaCl и последующим переосаждением насыщенным раствором сульфата аммония по E. Baker. Полученные препараты были лиофилизированы.
Контроль специфической активности полученного препарата капсульного антигена F1 Y. pestis EV осуществляли в реакции радиальной иммунодиффузии (РИД) по O. Ouchterlony в чашках Петри в 1 % агаровом геле (Difco) со специфическими чумными сыворотками экспериментальных серий. Активность в РИД – 1:64.
Количественную оценку содержания белков и нуклеиновых кислот в образцах F1 экспериментальных серий проводили методом специфической флуоресценции (флуориметр Qubit 2.0, LifeTechnologies, США). Измерение уровня флуоресценции и пересчет концентрации ДНК и РНК в образцах проводили в соответствии с калибровочной прямой и значением фактора разведения.
Общая концентрация белка в исследуемых образцах составила 3,65±0,04 мг/мл (Cv = 1,14%). При этом установлено относительно низкое содержание примесных нуклеиновых кислот в препарате: ДНК – 12,4±0,31 мкг/мл (Cv = 2,42%), РНК – 8,13±0,3 мкг/мл (Cv = 3,76%), т.е. не более 0,5% от общего количества белка.
В качестве контрольных образцов были использованы серии, полученные при выращивании Y. pestis EV на твердой среде, обогащенной гемолизированной кровью. Общая концентрация белка в контрольных образцах F1 составила 3,44±0,05 мг/мл (Cv = 1,31%); концентрация ДНК – 9,03±0,12 мкг/мл (Cv = 1,28%); РНК – 10,27±0,47 мкг/мл (Cv = 4,6%). Полученные результаты полностью сопоставимы с данными экспериментальных серий.
Проведенными исследованиями подтвердили возможность культивирования чумного микроба на твердой питательной среде, содержащей в своем составе гидродизат сои, без дополнительного обогащения гемализированной кровью без утраты их биологических свойств (продукции капсульного антигена). Экспериментальные серии капсульного антигена F1, могут успешно использоваться для иммунизации животных- продуцентов при получении гипериммунной сыворотки.
Список литературы
1. Кадникова Л.А., Копылов П.Х., Дентовская С.В., Анисимов А.П. Капсульный антиген чумного микроба // Инфекция и иммунитет. – 2015. – Т.5, № 3. – С. 201–218.
2. Ковтун Ю.С., Курилова А.А., Таран Т.В., Катунина Л.С., Чурикова Н.В. Сравнительная оценка потенциальных белковых основ микробиологических сред // Проблемы особо опасных инфекций. – 2014. – № 3. – С. 92–95.
3. Bioterrorism : edited by S. A. Morse. – first published march, 2012. – printed in Croatia (ISBN 978- 953-51-0205-2).
