15 июня 2018г.
Ключевые слова: эктопаразиты, бовиколез, псороптоз, крупный рогатый скотс
Криптоспоридии обладают широкой хозяинной специфичностью, одни животные способны заражаться от других, а также циркулировать между животными и человеком, что позволило отнести их к типичному зоонозу в соответствии с определением ВОЗ.
Установлено, что криптоспоридии вызывают тяжелое заболевание при дисбалансе иммунитета у хозяина, т.е. являются причиной оппортунистических инфекций, отягощающих общее течение болезни. Наиболее полно этот вопрос изучен при криптоспоридиозе с разными формами иммунной недостаточности.
Несмотря на некоторые успехи в изучении криптоспоридиоза, он продолжает оставаться значительной актуальной проблемой ветеринарии и медицины. Особенно слабой стороной в изучении этой проблемы является: лечение и профилактика криптоспоридиоза.
Актуальность проблемы криптоспооридиоза млекопитающих определила цель и задачи наших исследований. Цель наших исследований явилось изучение методов диагностики криптоспооридиоза, изучение течения криптоспоридиоза на модели белых мышей.
В соответствии с реализацией поставленной цели были поставлены следующие задачи:
1.Провести сравнительное изучение методов диагностики крип-тоспоридиоза с использованием лабораторных моделей.
2 .Отработать и усовершенствовать методы получения биомассы возбудителя криптоспоридиоза млекопитающих С.parvum.
3 .Изучить и патологоанатомические признаки у больных криптоспоридиозом мышей.
В хозяйстве «Эко-Нива» Воронежской области изучена эпизоотическая ситуация и проведано обследование 525 телят в возрасти от 0 до 45 суток. Для постановки диагноза на криптоспоридиоз проводили комплексные исследования, включая микроскопию. Диагноз подтверждали обнаружением ооцист криптоспоридий из фекальных масс в нативных препаратах, используя флотационные методы или различные методы окраски. Проводили сравнительную оценку методов диагностики.
Больные телята подвергались ежедневному клиническому осмотру, проводили анализ крови. Павших животных вскрывали, готовили мазки-соскобы со слизистых оболочек пораженных участков кишечника и других органов; изучали патологоанатомическую картину.
В экспериментах также были использованы лабораторные животные: 10 белых беспородных мышей.
Заражение лабораторных животных проводили суспензией ооцист Cryptosporidium parvum, полученной методом флотации из фекальных масс больных криптоспоридиозом телят. В качестве флотационных жидкостей использовались различные насыщенные растворы.
На обезжиренное предметное стекло наносили каплю фекалий и размешивали, распределяя тонким слоем. В случае густых фекальных масс добавляли каплю воды или физиологического раствора. Мазок сушили на воздухе, при комнатной температуре. Высушенный мазок фиксировали при +18-20°С метиловым (этиловым)спиртом до его полного испарения (5-10 мин).
Нативные препараты готовили по методу Павласека И. ( 1990).
Окраску мазков проводили по методу Циля-Нильсена или Романовского-Гимза и другими красителями.
В работе использовали мышей, которых заражали per os суспензией ооцист Cryptosporidium parvtm, выделенных методом флотации из фекалий больных криптоспоридиозом телят. Ооцисты инокулировали лабораторным животным из шприца. Заражающая доза для мышей составила 10-20 тыс. свежевыделенных ооцист. Ежедневно проводили наблюдения за экспериментальными животными, а спустя двое суток исследовали фекалии .
Применение насыщенного раствора сахарозы (плотность 1,25 мг/см3) имеет преимущество перед другими флотационными растворами, т.к. он является наиболее щадящим по отношению к ооцистам. Ооцисты практически в течение суток и более не подвержены разрушению.
В процессе получения изолята необходимо контролировать плотность флотационных растворов, т.к. изменение плотности при снятии ооцист криптоспоридий может привести к их потере.
Применение указанных флотационных растворов позволяет получить изолят ооцист - биомассу возбудителя. Методом центрифугирования собранный материал в десятикратном объёме водопроводной воды отмывали от флотационного раствора (3 тыс.об./мин., в течение 10 минут). Полученную биомассу возбудителя сохраняли в физиологическом растворе с добавлением антибиотиков при +4-5 С.
Для получения концентрированного осадка суспензию ооцист центрифугировали. Полученную биомассу ооцист криптоспоридий необходимо было освободить от бактериальной контаминации.
Моделью для воспроизведения и изучения криптоспоридиозной инвазии служили беспородные белые мыши. Доза заражения для мышей составляла 20тыс.ооцист на животное.
Со второго дня после заражения всех животных обследовали на наличие ооцист криптоспоридий в фекалиях .
Для эксперимента использовали мышат в возрасте 12-15 суток. Начиная с третьего дня после заражения.фекалии мышат ежедневно исследовали для обнаружения ооцист нативными и флотационными методами .
Мыши выделяли ооцисты С.parvum на 4 сутки после заражения. Морфологически ооцисты, полученные от лабораторных животных, не отличались от ооцист, полученных от телят. Пик выделения ооцист приходился на 8-10 сутки после заражения. В это время в одном поле зрения микроскопа обнаруживали более 25 ооцист. Затем количество их снижалось и на 12-15 день обнаруживали в фекалиях единичные ооцисты. Период выделения ооцист криптоспоридий составлял 14-16 суток.
Интенсивность инвазии оценивали в нативных препаратах по среднему количеству ооцист в 10 полях зрения микроскопа. За слабую интенсивность принимали обнаружение единичная (1-4), за среднюю- 5-25 и за высокую - более 25 ооцист.
На 8-9-10 сутки наблюдался падеж мышей. Всего погибло 5 голов, т.е. летальность составила 50%. При вскрытии кроме катарального энтерита была установлена катаральная пневмония. В мазках-отпечатках были обнаружены ооцисты криптоспоридий. Таким образом, было подтверждено, что патологический процесс вызван именно этим возбудителем.
Заключение.
1.Отработаны и усовершенствованы методы получения биомассы возбудителя криптоспоридиоза млекопитающих - Cryptosporidium parvus.
2. Белые беспородные мыши могут служить моделью для апробации лекарственных препаратов против криптоспоридиоза, т.к. цикл развития паразита в условиях их организма происходит полностью и заканчивается выделением ооцист.
3. Штамм Cryptosporidium parvus, выделенный от телят Эко-Нива вызывает у мышей также легочную форму болезни с высокой летальностью.
Список литературы
1. Бейер Т.В. Криптоспоридиоз животных (биология возбудителя) / Бейер Т.В. //V Ветеринария. 1986. - № 10. - с. 42-45.
2. Краснова О.П. Динамика эпизоотического процесса при криптоспоридиозе телят / Краснова О.П., Ларионов С.В., Розовенко М.В.// Ветеринария. 2000. № 4. С. 32.
3. Ларионов С.В. Лабораторная диагностика криптоспоридиоза / Ларионов С.В., Колосова Д.М., Розовенко М.В.//Ветеринария. -1999. -№ 7. - С. 30.
