РОЛЬ HLA-ТИПИРОВАНИЯ В ДИАГНОСТИКЕ И ПРОГНОЗЕ АУТОИММУННОГО ГЕПАТИТА

Известно, что многообразие клинико-лабораторных проявлений аутоиммунного гепатита (АИГ) нередко затрудняет его диагностику. В работах последних лет отмечено, что особенности дебюта и течения АИГ, ответ на терапию могут варьировать в зависимости от расовой принадлежности, географического региона проживания и наследственной предрасположенности [1, 6, 8]. В связи с этим активно изучается роль факторов внешней среды и генетических ассоциаций. Считается, что аллели HLA играют ключевую роль в генетической предрасположенности к АИГ и могут определять его фенотип [1, 5, 11]. Однако эти взаимосвязи не универсальны, имеются расовые и региональные особенности. Распространенность этих антигенов у больных с АИГ в Российской Федерации остается практически не изучена.
Рост заболеваемости АИГ во всем мире, а также серьезность его осложнений обусловливают необходимость совершенствования имеющихся диагностических критериев, а также поиск новых диагностических и прогностических маркеров. С этой точки зрения, исследование влияния аллелей HLA на развитие, фенотип и прогноз АИГ представляется важным и перспективным.
Цель исследования: выявить аллели HLA I и II класса, обусловливающие предрасположенность к развитию АИГ у лиц, проживающих в Северо-Западном регионе Российской Федерации (РФ), а также установить наличие взаимосвязей между данными аллелями и клинико-лабораторными особенностями АИГ.
Материалы и методы исследования
HLA-типирование I и II класса выполнялось 18 больным с АИГ 1 типа (АИГ-1). Группа контроля соответствовала популяционной выборке и составила 100 человек.
Определение HLA-антигенов I класса проводилось в стандартном двухступенчатом микролимфоцитотоксическом тесте по Terasaki. Типирование генов HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) осуществлялось путем обратной дот-блот гибридизации продукта полимеразной цепной реакции с панелью аллель-специфических олигонуклеотидных зондов. Это обеспечило типирование HLA-DRB1 гена с точностью до «групп аллелей», а генов HLA-DQA1 и DQB1 с точностью до аллелей.
Для оценки влияния установленных HLA-маркеров АИГ на характер его течения проведен корреляционный анализ c клинико-лабораторными и гистологическими данными.
Статистическая обработка результатов проводилась при помощи пакета программ «Statsoft Statistica 10». Для определения наличия зависимости между двумя переменными величинами оценивали коэффициент ассоциации и коэффициент Спирмена. Различия и корреляции считались достоверными при р<0,05. Для выявления взаимосвязи между антигеном или гаплотипом и заболеванием и оценки ее выраженности определяли частоту их встречаемости, а также показатель относительного риска (RR), рассчитанный по формуле Haldane - Woolf.

Результаты исследования и обсуждения. При анализе распространенности антигенов HLA I и II класса установлено, что некоторые их них обусловливают предрасположенность к развитию АИГ-1 (см. Табл.1).

                                                                                                                            Таблица 1

Антигены HLA I и II класса, обусловливающие предрасположенность к развитию АИГ-1

_
Примечание: RR (relative risk) - относительный риск, * - достоверность различий (р) <0,05, ** - р<0,025,
*** - р<0,01, **** - р<0,001.

При анализе полученных данных определено, что среди аллелей HLA I класса при АИГ-1 достоверно более часто наблюдалось носительство А24(9) и В27 по сравнению с популяционным контролем. Интересно, что наличие ассоциативной связи с аллелью А24(9) при АИГ-1 отмечено и для турецкой популяции [7], а с В27 - для жителей Индии [3].
Кроме того, нами установлено, что у больных, имеющих аллель В27, заболевание реже диагностируется на стадии цирроза (коэффициент ассоциации φ=-0,58, р<0,05). Таким образом, данный антиген не только обусловливает наследственную предрасположенность к АИГ-1, но и является предполагаемым маркером более благоприятного его течения.
При этом по данным североамериканских [4, 5] и европейских источников [1, 10] для больных с АИГ-1 среди аллелей HLA I класса наиболее характерно наличие ассоциативной связи с антигеном В8, особенно в виде гаплотипа А1-В8. В нашем исследовании они встречались хотя и чаще, чем в группе контроля, однако эта разница не была достоверно значимой (для В8 частота составила 0,2778 при АИГ-1 против 0,1300 в группе контроля, для А1-В8 - 0,2200 против 0,0800 соответственно, p>0,05).
При этом к настоящему времени наиболее изучено влияние DRB1*03 и DRB1*04 на развитие и течение АИГ. Так, для носителей DRB1*0301 характерна манифестация в молодом возрасте, более тяжелое течение заболевания, частое развитие рецидивов на фоне лечения по сравнению с носителями DRB1*0401. Носители DRB1*04 - в большинстве случаев взрослые пациенты с более высокой частотой внепеченочных проявлений и сопутствующих аутоиммунных заболеваний, с более мягким течением заболевания и хорошим ответом на терапию кортикостероидами [5, 9]. Также часто встречается при АИГ-1 гаплотип HLA-DRB1*0301-DRB3*0101- DQA1*0501-DQB1*0201 [10]. Наиболее характерны эти группы аллелей для жителей Северной Америки и большинства европейских стран [1, 6, 10], в Азии преимущественно наблюдается DRB1*04 [1, 12]. При этом D.N. Amarapurkar с коллегами (2003) вообще не подтвердили роль этих групп аллелей в развитии аутоиммунного гепатита у жителей Индии [3]. В исследовании К. Л. Райхельсон (2014) отмечено лишь более частое выявление DRB1*04 при АИГ в сравнении с АИГ/ПБЦ, однако не установлено влияния этой группы аллелей на прогноз АИЗП [2].
В нашем исследовании DRB1*04 определялась достоверно чаще по сравнению с популяционным контролем. В то же время DRB1*03 хотя и встречалась чаще при АИГ-1, чем в группе контроля, однако эти различия были недостоверны (0,4444 при АИГ-1 против 0,2000 в группе контроля, р>0,05). При этом нами не отмечено выше описанных ассоциаций с носительством данных аллелей, что вероятно обусловлено определением групповых специфичностей, а не отдельных аллелей, как в зарубежных работах. Однако установлено, что наличие DRB1*03 сопряжено с более высоким уровнем АСТ на момент манифестации АИГ-1 (коэффициент Спирмена ρ=0,63, р<0,05), а DRB1*04 ― с уровнем ЦИК (ρ=0,81, р<0,05).
Также при АИГ-1, согласно зарубежным источникам, характерно наличие взаимосвязи с аллелями DQA1*0501 и DQВ1*0201, особенно виде гаплотипа DRB1*03-DQA1*0501-DQB1*0201 [1, 9, 10, 11]. В нашем исследовании только аллель DQB1*0201 достоверно чаще выявлялась при АИГ-1, в то время как различия в частоте выявления DRB1*03 и DQA1*0501, были недостоверно значимы. Однако гаплотип DRB1*03- DQA1*0501-DQB1*0201 определялся достоверно чаще при АИГ-1 (0,3889 по сравнению с контролем 0,0900, RR=6,28, р<0,025), что подтверждает значение именно этой генетической детерминанты в развитии АИГ-1. При этом установленные положительные взаимосвязи между носительством DQB1*0201 и такими клиническими проявлениями, как желтуха и энцефалопатия (φ=0,53 и φ=0,70 соответственно, р<0,05), позволяют предполагать эту аллель в качестве маркера неблагоприятного течения АИГ-1.
Кроме того, отмечено, что носительство аллели DQA1*0301 также было достоверно повышено по сравнению с популяционным контролем, причем во всех случаях данная аллель выявлялась в виде гаплотипа DRB1*04–DQA1*0301. Хотелось бы отметить, что для других популяций не описано наличие ассоциации аллели DQA1*0301 с возникновением АИГ-1, однако для жителей Латинской Америки эта аллель играет протективную роль в его развитии [4]. Данный пример подтверждает имеющиеся популяционные отличия и указывает на необходимость изучения генетических ассоциаций в различных геногеографических регионах.
Частота встречаемости DQB1*0302 также была значительно повышена при АИГ-1 по сравнению с контролем. При этом для аллели DQB1*0302 установлены отрицательные взаимосвязи с наличием артралгий и отечно-асцитического синдрома, а также с уровнем СОЭ в дебюте АИГ-1 (φ=-0,54, φ=-0,48 и ρ=-0,64 соответственно, р<0,05). В то же время носительство DQB1*0301 при АИГ-1 было ассоциировано с артралгиями, как в его дебюте, так и за весь период наблюдения (φ=0,76 и φ=0,55 соответственно, р<0,05). Это отражает противоположное влияние данных аллелей на системный воспалительный процесс при АИГ-1, а также предполагает более благоприятное его течение при наличии DQB1*0302.
Аллель DQB1*0401, наличие которой, по мнению К.Yoshizawa с коллегами (2005) в виде гаплотипа DRB1*0405-DQB1*0401 характерно для больных с АИГ в Японии [12], в нашем исследовании не обнаруживалась ни при АИГ-1, ни у здоровых людей, что подтверждает имеющиеся генетические различия в зависимости от расовой принадлежности.
Таким образом, аллели HLA I и II класса обусловливают предрасположенность к развитию АИГ, а также влияют на характер его течения.
Выводы
Полученные данные позволяют сделать вывод, что у больных, проживающих на территории Северо- Западного региона РФ, имеются не только известные и широко изученные ассоциации HLA-аллелей с АИГ (такие как, А24(9), В27, DRB1*04, гаплотипом DRB1*03-DQA1*0501-DQB1*0201), но и типичные только для исследуемой популяции (DQA1*0301, DQB1*0301, DQB1*0302). Особенно интересно, что установленные генетические маркеры характерны как для европеоидов, так и для азиатов. Это отражает генетическое своеобразие исследуемой популяции.
Кроме того, аллели HLA влияют на фенотип АИГ-1. Так аллели В27 и DQB1*0302 ассоциированы с благоприятным его течением, а DQB1*0201, напротив, с высокой частотой развития желтухи и печеночной энцефалопатии, а аллель DQB1*0301 - с наличием внепеченочной симптоматики (артралгий).
Таким образом, проведение HLA-типирования помогает не только выявить группы повышенного риска развития АИГ, но и позволяет прогнозировать характер его течения. Однако для повышения диагностической и прогностической значимости данного исследования необходимо изучение распространенности HLA-антигенов и их ассоциаций в различных геногеографических регионах.

Список литературы

1. Лейшнер, У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром / У. Лейшнер. — М. : Анахарсис, 2005. — 176 с.
2. Райхельсон, К. Л. Дифференциальная диагностика и прогноз течения аутоиммунных заболеваний печени : автореф. дис. … докт. мед. Наук : 14.00.04 / Райхельсон Карина Леонидовна — СПб.: 2014. ― 41 с.
3. Amarapurkar, D.N. HLA genotyping in type-I autoimmune hepatitis in Western India / D.N.Amarapurkar // J. Assoc. Physicians India. — 2003. — Vol. 51. — P. 967–969.
4. Bittencourt, P. L. Genetic heterogeneity in susceptibility to autoimmune hepatitis types 1 and 2 / P. L. Bittencourt,
A. Goldberg, E. L. Cancado // Am. J. Gastroenterol. — 1999. — Vol. 94. — P. 1906–1913.
5. Czaja, A. J. Associations between alleles of the major histocompatibility complex and type 1 autoimmune hepatitis / A. J. Czaja, M. D. J. Strettell, L. J. Thomson [et al.] // Hepatol. — 1997. — Vol. 25, № 2. — P. 317–323.
6. Czaja, A. J. Genetic factors affecting the occurrence, clinical phenotype, and outcome of autoimmune hepatitis/ A. J. Czaja // Clin. Gastroenterol. Hepatol. — 2008. — Vol. 6, № 4. — P. 379–388.
7. Gulec, S. G. Relations between HLA and autoimmune hepatitis / S. G. Gulec, N. Urganci, T. B. Polat [et al.] / Turk. J. Gastroenterol. — 2011. — Vol. 22, № 1. — P. 42–46.
8. Invernizzi, P. Geoepidemiology of autoimmune liver diseases / P. Invernizzi // J. Autoimmun. — 2010. — Vol. 34. — P. 300–306.
9. Krawitt, E. L. Autoimmune hepatitis / E. L. Krawitt // N. Engl. J. Med. — 2006. — Vol. 354, № 1. — P. 54–66.
10. Muratori, P. Genetic distinctions between autoimmune hepatitis in Italy and North America / P. Muratori, A. J. Czaja, L. Muratori [et al.] // World J. Gastroenterol. — 2005. — Vol. 11, № 12. — P. 1862–1866.
11. Strettell, M. D. Allelic basis for HLA-encoded susceptibility to type 1 autoimmune hepatitis / M. D. Strettell, P. T. Donaldson, L. J. Thomson [et al.] // Gastroenterol. — 1997. — Vol. 112, № 6. — P. 2028–2035.
12. Yoshizawa, K. Genetic analysis of HLA region of Japanese patients with type 1 autoimmune hepatitis / K. Yoshizawa, M. Ota, Y. Katsuyama [et al.] // J. Hepatol. — 2005. — Vol. 42. — P. 578–584.