Новости
09.05.2023
с Днём Победы!
07.03.2023
Поздравляем с Международным женским днем!
23.02.2023
Поздравляем с Днем защитника Отечества!
Оплата онлайн
При оплате онлайн будет
удержана комиссия 3,5-5,5%








Способ оплаты:

С банковской карты (3,5%)
Сбербанк онлайн (3,5%)
Со счета в Яндекс.Деньгах (5,5%)
Наличными через терминал (3,5%)

ОЦЕНКА ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ СЕЛАНКА С ЭТАНОЛОМ: ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ И ЭЛЕКТРОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Авторы:
Город:
Москва
ВУЗ:
Дата:
08 марта 2016г.

Стресс является одной из ведущих причин срыва ремиссии при лечении алкоголизма, поэтому продолжает оставаться актуальным поиск новых фармакологических мишеней, ориентированных одновременно на механизмы формирования стрессовых реакций и алкогольной зависимости [6].

ГАМКА-рецепторы являются общей фармакологической мишенью для действия этанола и бензодиазепинов. Значительным ограничением использования бензодиазепиновых транквилизаторов в фармакотерапии алкогольных расстройств является их способность потенцировать эффекты этанола за счет активации α2 субъединицы ГАМКА-рецептора [7]. Отсутствие этанол-потенцирующих свойств должно выгодно отличать новые средства для коррекции нарушений, возникающих при алкогольной зависимости, от классических бензодиазепинов, барбитуратов и гипноcедативных средств.

Гептапептидный аналог тафтсина селанк (регистрационное удостоверение № ЛС-003338 (2009) разрешен к медицинскому применению в качестве анксиолитического средства для лечения генерализованных тревожных расстройств, неврастении и расстройств адаптации. По данным фармако - ЭЭГ анализа действия селанка оно характеризуется изменениями, типичными для анксиолитиков с активирующим компонентом действия и свойствами когнитивных стимуляторов [4]. Селанк является ингибитором энкефалиназы и вызывает увеличение количества опиоидного пептида лей-энкефалина в сыворотке крови [2, 3]. Селанк стабилизирует процессы возбуждения и торможения в головном мозге и повышает устойчивость нейронов коры полушарий к функциональным нагрузкам высокой интенсивности. Согласно последним исследованиям, полученным с использованием техники патч-кламп (patch-clamp), селанк значительно увеличивает частоту спайк-зависимых спонтанных миниатюрных постсинаптических токов (m1PSC) на гиппокампальных СА1 клетках, что свидетельствует об активации селанком угнетающих интернейронов, заканчивающихся на СА1 пирамидальных клетках [5]. Учитывая представленные данные и отсутствие какой-либо информации о взаимодействии селанка с этанолом, целью настоящей работы является изучение влияния селанка на острые эффекты этанола в опытах in vivo.

Материалы и методы

Опыты выполнены на беспородных мышах-самцах массой 20-22 г.(n=120) и крысах-самцах линии Wistar массой 180-220 г. (n=16) (ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико- биологического агенства», филиал «Столбовая»). Животных содержали в стандартных условиях вивария ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» при контролируемом освещении (12ч-свет/12ч-темнота) и постоянной температуре (21-230С) со свободным доступом к воде и брикетированному корму в течение 10 суток до начала тестирования в соответствии с приказом МЗ РФ № 708н от 23.08.2010 «Об учреждении Правил лабораторной практики».

Поведенческие исследования. Тест «вращающийся стержень». Установка представляет собой приподнятый на высоту 60 см стержень с фиксированной скоростью вращения (17 об/мин). При изучении влияния фармакологических веществ на алкогольную интоксикацию мышей предварительно тестировали не менее трех раз (время каждой экспозиции - 3 минуты)  для достижения стабильных  показателей. Этанол вводили (20% раствор в дозе 2.0 г/кг, в/б) за 45 мин до тестирования и за 15 мин до введения исследуемого препарата. Основной регистрируемый показатель – время удержания на стержне. Способность животных сохранять равновесие и увеличивать время нахождения на вращающемся стержне под действием изучаемого вещества, вводимого на фоне этанола, расценивается, как способность уменьшать токсическое действие этанола. Сокращение времени удержания на вращающемся стержне под действием изучаемых веществ свидетельствует об усилении миорелаксации, индуцированной этанолом.

Тест «этаноловый наркоз». Животным вводили 25% раствор этанола в тест-дозе (5.5 г/кг, в/б), вызывающий развитие алкогольного наркоза, который сохраняется в течение 1-2 часов, что позволяет выявить как ослабление, так и усиление действия этанола. Животных размещали на ровной горизонтальной поверхности и регистрировали время наступления и окончания алкогольного наркоза по принятию «бокового положения» и, соответственно, самостоятельному устойчивому выходу из него. Изучаемое вещество вводили на фоне этанолового наркоза. Контрольной группе животных - изомерное количество растворителя (воду для инъекций).

Селанк в дозах 0.1. 0.3 и 0.9 мг/кг растворяли в воде для инъекций, диазепам (Sigma) в дозе 1.5 мг/кг растворяли в воде для инъекций с 1-2 к. твин-80. Препараты вводили внутрибрюшинно (в/б) из расчета 0.1 мл/10 г массы животного.

Электрофизиологические исследования. Опыты выполнены на крысах. Череп трепанировали под эфирным наркозом, переводили животных на искусственное дыхание, используя диплацин (10 мг/кг, в/б). Активность нейронов измеряла внутриклеточно с помощью одноствольного стеклянного микроэлектрода, заполненного 2М КCl. Для микоэлектрофореза использовали 7-ствольные стеклянные микроэлектроды. Один ствол, заполненный 3М NaCl служил для внеклеточного отведения спайковой электрической активности нейронов, а остальные стволы использовали для микроэлектрофоретического подведения химических агентов и заполняли водными растворами следующих веществ: этанол (2М, рН=4,5), селанк (0,03М, рН=4,0). Сила максимального изгоняющего тока равнялась 150 нА. Один из стволов многоканального микроэлектрода служил для стандартной компенсации токовых артефактов. Кроме того, селанк вводили в дозах 0,4 мг/кг, 1,2 мг/кг и 10 мг/кг, в/б, из расчета 0.1 мл/100 г массы животного.

Полученные результаты обрабатывали с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с последующим применением теста Даннетта.

Результаты исследования

Поведенческие исследования

В отличие от диазепама, вызывающего усиление миорелаксации, индуцированной этанолом в тесте

«вращающийся стержень», селанк ни в одной из изученных доз не изменял время удержания на стержне мышей на фоне действия этанола, что свидетельствует об отсутствии взаимодействия селанка с этанолом в дозе 2.0 г/кг в данном тесте (Рисунок 1А).




Примечание.

Данные представлены как M±SEM; # -p<0,05 статистически достоверные различия по сравнению с контрольной группой; *-p<0.05, ***-p<0,001 статистически значимые отличия по сравнению с группой «этанол», ANOVA, тест Даннетта; число животных в каждой группе по 10-12.

При инъекции наркотической дозы этанола 5.5 г/кг диазепам потенцировал гипноседативное действие этанола, увеличивая время пребывания в боковом положении. Напротив, селанк ни в одной из изученных доз не оказывал действия  на продолжительность этанолового наркоза, что позволяет сделать вывод об отсутствии влияния селанка на систему этанол-метаболизирующих ферментов (рис. 1Б).

Электрофизиологические   исследования.

Селанк в дозах 0,4 мг/кг, 1,2 мг/кг и 10 мг/кг, в/б, per se не изменял потенциал покоя мембраны (-59 – (-70) мВ) в течение 15-40 мин наблюдения. Амплитуда потенциала действия нейронов (61-73 мВ) и их частота не изменялись в течение всего времени наблюдения. После введения селанка в изученных дозах форма потенциала действия (крутизна переднего и заднего фронтов) также не изменялась. Исследование выполнено на 4 нейронах у 4-х крыс. При оценке влияния препарата на частоту внеклеточно отводимой импульсной активности 136 нейронов селанк при подведении к нейрональной мембране с помощью изгоняющих токов силой от 5 до 150 нА не изменял статистически значимо частоту спонтанных потенциалов действия ни у одного из исследованных нейронов. Таким образом, селанк не изменяет пассивные и активные свойства постсинаптической мембраны нейронов фронтальной коры головного мозга.

Как ранее было показано, нейроны коры головного мозга изменяют свою активность под влиянием этанола двояко: в «малых дозах» при изгоняющем микроэлектрофоретическом токе менее 30 нА этанол увеличивает частоту спонтанной импульсной активности нейронов (увеличение возбудимости, активация клеток), в «больших дозах» при изгоняющем токе более 30 нА этанол уменьшает частоту спонтанной активности нейронов (уменьшение возбудимости, торможение)[1].

Изучено действие селанка при микроэлектрофоретическом подведении этанола в «малых дозах» на 15 нейронах и при подведении этанола в «больших дозах» на 23 нейронах. Поскольку ни у одного из исследованных нейронов не наблюдалось достоверного изменения величины ответов на этанол на фоне селанка, можно предположить, что селанк не изменяет ответы нейронов коры головного мозга на этанол.

Полученные в настоящей работе результаты указывают на отсутствие взаимодействия селанка и этанола, что позволяет использовать пептидный анксиолитик на фоне потребления этанола для комплексной оценки его влияния на формирование алкогольной мотивации на различных этапах экспериментального алкоголизма.



Список литературы

1.     Кожечкин C.Н., Медникова Ю.С., Колик Л.Г. // Бюлл. Экспер. биол. Мед. 2013, Т.155, №5, c.590-594.

2.     Кост Н.Б. и др. // Экспер. клин. фармакол., 2001, №4, 18-22.

3.     Мешавкин В.К. и др. // Бюлл. экспер. биол. мед., 2006, №11, 543-78.

4.     Незнамов Г.Г. и соавт. // Соц. и клин. Психиатрия, 2003, №4, с.28-35.

5.     Скребицкий В.Г. и соавт. // Росс. Физиолог. Журнал им.Сеченова, 2011, Т.97, №11, с.1169-78.

6.     Breese, et al. // Alcohol Clin Exp Res. 2005, V.29, №2, p.185-95.

7.     Täuber M, Calame-Droz E, Prut L, Rudolph U, Crestani F. // Eur J Neurosci. 2003, V.18, №9, p.2599-604.