04 октября 2017г.
Резюме. Представлены результаты выявления пародонтопатогенов и других представителей микробиоты рта у здоровых и больных пародонтитом перед подготовкой к дентальной имплантации методом ПЦР-диагностики. Установлена степень элиминации патогенной микрофлоры рта после проведенного курса лечения пародонтита.
Ключевые слова: пародонтит, имплантация, микробиота, лечение, ПЦР-диагностика.
Введение. Основным этиологическим фактором воспалительных заболеваний пародонта в настоящее время считаются микроорганизмы, прежде всего, пародонтопатогенные бактерии [1,4]. Микроорганизмы и продукты их жизнедеятельности вызывают воспалительно-дегенеративные изменения тканей пародонта. Риск прогрессирования заболевания и резистентности к лечению выше при комбинации нескольких видов патогенных микроорганизмов.
В связи с этим при обследовании пациентов с пародонтитом, в частности при подготовке к операции дентальной имплантации, необходима информация о наличии в пародонтальных карманах инфекционных агентов, что связано с задачей рационального выбора антибактериальных препаратов, адекватных методик лечения и контроля эффективности лечения. В ряде случаев недостаточная эффективность лечения может быть связана с вовлечением в этиопатогенез пародонтита не только бактерий, но и вирусов и грибов кандида, актиномицет, хламидий.
Цель исследования: совершенствование диагностики и контроля эффективности лечения пародонтита с использованием молекулярно-генетического исследования содержимого пародонтальных карманов перед дентальной имплантацией.
Материал и методы. Проведено комплексное обследование 300 человек (154 женщин, 146 мужчин), обратившихся в Клинический центр стоматологии ФМБА России и ряд других стоматологических клиник Москвы в связи с проявлениями хронического генерализованного пародонтита (ХГП; K05.3). Возраст обследованных варьировал от 32 до 56 лет (в среднем 41,3±1,2 лет). После проведенного пародонтологического лечения у 46 человек были установлены дентальные имплантаты (ICX, Германия) по двухэтапной методике. Лечение пародонтита проводилось с использованием стандартных терапевтических, хирургических и ортопедических методик [2]. Контрольная группа лиц с здоровым пародонтом включала 122 человека с средним возрастом 21,6±0,7 лет. При оценке состояния пародонта, наряду с клиническим обследованием, проводилось необходимое рентгенологическое обследование и индексная оценка состояния пародонта и гигиены.
Молекулярно-генетическая диагностика микрофлоры пародонтальных карманов проводилась до и после лечения пародонтита в ходе подготовки к имплантации с использованием реактивов НПФ «Гентех» (Россия) и прибора «Терцик MC2» НПФ «ДНК-технология» (Россия) [3,5,6]. Определение возбудителя используемым набором реактивов интерпретировалось как «обнаружено» или «не обнаружено», кроме того дополнялось по интенсивности полос на электрофореграмме в соответствии концентрацией инфекционного возбудителя в терминах: «+» – очень слабый ответ, «++» – слабый ответ, «+++» – средний ответ и «++++» – сильный ответ. Определялись следующие составляющие микробиоты рта: Pi – Prevotella intermedia, Тf – Tannerella forsythensis, Td – Treponema denticola, Aac – Actinobacillus actinomycetemcomitans, Pg – Porphyromonas gingivalis, Chlamydia trachomatis, Herpes simplex virus, Human cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, Candida albicans.
Результаты исследований. При обследовании с помощью мультипраймерного набора содержимого десневой борозды у 122 лиц со здоровым пародонтом выявлена ДНК Aac у 4,1% обследованных, Pi – у 0,8%, Tf – у 3,3%, Td – у 1,6%; Pg – 0,0% (Рис. 1). При этом относительное содержание указанных пародонтопатогенов не превышала уровень слабого ответа («++» – 41,6% из всех случаев регистрации возбудителей) или соответствовала уровню очень слабого ответа («+» – 58,4%).
Рисунок 1. Частота выявления ДНК пародонтопатогенов в области зубодесневой борозды у больных ХГП и людей со здоровым пародонтом.
По сравнению с контрольной группой у больных пародонтитом частота выявления
пародонтопатогенных бактерий возрастала в среднем в 30 раз (Рис. 2.): Pi выявлена у 50,0% больных, Tf – у 73,3%, Td – у 70,0%, Aac – у 33,3%, Pg – у 63,3%.
Относительная концентрация выявленных
пародонтопатогенов в среднем соответствовала следующим уровням: очень слабый ответ 38,7%, слабый
ответ 23,3%, средний ответ 18,6%, сильный ответ 19,5% (Рис.3). Соответствующие показатели для Pi 26,7%,
33,3%, 13,3%, 27,7%; для Tf 63,6%, 13,6%, 13,6%, 9,2%; для Td 42,9%, 28,6%, 9,5%, 19,0%; для Aac 50,0%, 20,0%,
20,0%, 10,0%; для Pg 10,5%, 21,1%, 36,8%; 31,6%.
Рисунок 2. Сравнительная структура выявляемости пародонтопатогенных бактерий у больных пародонтитом (по относительному содержанию).
В группе пациентов перед дентальной имплантацией в результате лечения хронического
генерализованного пародонтита средней степени тяжести произошла элиминация пародонтопатогенных
бактерий из пародонтальных карманов у большинства обследованных (Рис. 3). Так, частота выявления Pi снизилась в 4,4 раз (от 47,8% до 10,9%), Tf – в 8,2 раз (от 71,7% до 8,7%), Td – в 10,4 раз (от 67,4% до 6,5%), Pg – в 7,2 раз (от 63,0% до 8,7), Aac не выделялась после лечения. У 5 человек (10,9%) выявлены пародонтопатогены после пародонтального лечения, в связи
с этим операция имплантации у этих пациентов были отложены. Относительное содержание пародонтопатогенов перед началом лечения составляла по
уровню ответа: очень слабый ответ 37,0%; слабый ответ 21,7%; средний ответ 17,4%; сильный ответ 19,6%; частота проявления сильного и среднего ответа была значительна. После лечения у пациентов с
положительной ПЦР при выявлении пародонтопатогенов регистрировался исходный, преимущественно
сильный
или
средний ответ.
Рисунок 3. Динамика результатов ПЦР-диагностики пародонтопатогенных бактерий до и после
лечения пародонтита.
При диагностике возбудителей сопутствующих инфекций в пародонтальных карманах перед
лечением пародонтита частота выявления составляла: Хл – 0,0%; ВПГ – 4,4%; ЦМВ – 0,0%; ВЭБ – 21,7%; кандида альбиканс – 30,4%. При этом относительная концентрация ВПГ не превышала уровень очень
слабого ответа: ВЭБ – у 20,0% соответствовал сильному ответу, у большинства – очень слабому и слабому
ответу; кандида альбиканс – у 85,7% сильному ответу и у 14,3% – среднему ответу (Рис. 4). После лечения перечисленные возбудители
выделялись в единичных случаях: хламидия трахоматис у 0,0% обследованных, вирус простого герпеса– у 2,2%, цитомегаловирус и вирус Эпштейн-Барра– у 0,0%, кандида альбиканс – у 6,6%. Относительное содержание всех возбудителей (кроме кандида альбиканс) соответствовала очень
слабому ответу, а кандида альбиканс при
ее
наличии
соответствовала сильному ответу.
Рисунок 4. Динамика результатов ПЦР-диагностики возбудителей сопутствующих инфекций в пародонтальных карманах до и
после лечения пародонтита.
Выводы
По данным ПЦР-диагностики с использованием мультипраймерного набора для определения пародонтопатогенных бактерий в десневой борозде у лиц со
здоровым пародонтом частота выделения пародонтопатогенов колеблется от 0,0% до 4,1% (Actinobacillus actinomycetemcomitans) с относительной
концентрацией
не
выше уровня слабого ответа.
Пародонтопатогенная флора определяется с использованием мультипраймерного набора для ПЦР- диагностики у всех больных хроническим генерализованным пародонтитом. При этом частота выявления разных пародонтопатогенных бактерий из пародонтальных карманов колеблется от 33,3% до 73,3% с
относительным содержанием бактерий до уровня среднего и сильного ответа у 38,1% больных.
По данным ПЦР
пародонтопатогенные бактерии выделяются
после
лечения
пародонтита при подготовке к операции имплантации у 10,9% больных, при этом частота выявления разных патогенных
микроорганизмов снижается в 4-10 раз.
Молекулярно-генетическая диагностика возбудителей сопутствующих инфекций (хламидий, вируса
простого герпеса, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барра и кандида альбиканс) выявляет вирус Эпштейна-Барра и кандида альбиканс в пародонтальных карманах соответственно у 21,7% и
30,4%
больных пародонтитом.
Возбудители сопутствующих инфекций, выделяемые из пародонтальных карманов, регистрируются в единичных наблюдениях после лечения пародонтита. При этом относительное содержание вирусов соответствует очень слабому ответу, а при наличии кандида альбиканс сохраняется
уровень сильного
ответа.
Список литературы
1.
Логинов А.Г., Олесова В.Н., Сафронов И.Д., Трунов А.Н. Влияние шинирования зубов у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом на динамику иммунологических параметров ротовой жидкости // Российский стоматологический журнал.– 2015.– №6.– С.40-43
2.
Рева Г.В., Толмачев В.Е.,
Первов Ю.Ю.,
Русакова Е.Ю., Рева И.В., Усов В.В., Ломакин А.В., Красников Ю.А., Игнатьев С.В., Разумов П.В., Новиков А.С., Денисенко Ю.В., Олесова В.Н., Пешко
А.П.,
Амхадова М.А., Голохваст
К.С. Опыт проведения дентальной
имплантации
у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта
на фоне
контроля местного иммунного гомеостаза //
Фундаментальные исследования.– 2013.– № 5-1.– С.
129-134
3.
Чониашвили Д.З., Олесова В.Н., Щербо С.Н.,
Садовский
В.В., Де Д.А., Талицкий В.В., Шайхаев Г.О. Применение ПЦР для выявления ДНК некоторых актиномицетов при воспалительных заболеваниях полости
рта
// Российский стоматологический
журнал.– 2011.– №4.– С.49-50.
4.
Шашмурина В.Р., Воложин А.И., Царёв В.Н. Характеристика микробиоценоза полости
рта пациентов с полным отсутствием
зубов
в
ближайшие
сроки
после
дентальной имплантации //
Российский стоматологический журнал – 2008. – №3 – С. 28 – 33.
5.
Шибаева А.В., Айвазова Р.А., Ребриков Д.В., Трубникова Е.В., Кудыкина Ю.К., Белякова А.В.,
Зарипова Р.С., Шевелев А.Б. Применение метода ПЦР в реальном времени для изучения микробиома пародонта у пациентов с
сочетанной патологией гастродуоденальной зоны и
хроническим пародонтитом // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.– 2016.– №1.– С.26-30
6.
Щербо С.Н., Берсанов Р.У., Рудаков В.А.,
Кишко Э.В., Перевозников В.И. Молекулярно- генетическая диагностика пародонтита
// XIX Российский национальный
конгресс «Человек
и
лекарство», Москва.– 2012.– С.240
