СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ БИОКОМПЛЕКСОВ "НОРМОФЛОРИНЫ" И ВЕЩЕСТВА С ПРЕБИОТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ ЛАКТИТА МС НА ВОССТАНОВЛЕНИЕ КИШЕЧНОЙ МИКРОБИОТЫ У КОНВЕНЦИОНАЛЬНЫХ БЕЛЫХ МЫШЕЙ С АНТИБИОТИКО- АССОЦИИРОВАННЫМ ДИСБИОЗОМ

В настоящее время принято обозначать количественные и качественные изменения в микробиоценозе толстой кишки с развитием метаболических, трофических, иммунологических расстройств термином "дисбиоз" [7,с.4-8. 11,с.4-11]. Клинические наблюдения и экспериментальные исследования свидетельствуют, что дисбиоз является следствием патологического процесса и лечение следует начинать с купирования основного заболевания с привлечением средств коррекции дисбиотических состояний [7,с.4-8]. Среди средств коррекции следует выделить биокомплексы "Нормофлорины": "Нормофлорин - Л", "Нормофлорин - Б", "Нормофлорин - Д" [2,с.96]. Это жидкие комплексные синбиотические препараты, содержащие бифидобактерии B.bifidum и B.longum (биокомплекс "Нормофлорин - Б"), лактобациллы L.acidofilus (биокомплекс "Нормофлорин - Л"), бифидобактерии B.bifidum, B.longumи лактобациллы L.casei (биокомплекс "Нормофлорин - Д"). В состав биокомплексов "Нормофлорины", помимо пробиотических микроорганизмов, входят микробные метаболиты и пребиотиклактит (галактоолигосахарид), который ферментируется в толстой кишке сахаролитической микробиотой и стимулирует ее размножение.
По данным клиницистов [2,с.96], биокомплексы "Нормофлорины" обладают широким спектром антимикробной активности, поддерживают колонизационную резистентность слизистой кишечника и другими важными характеристиками благодаря которым они могут оказывать положительное влияние с первых минут попадания на слизистую оболочку рта, носоглотки и верхних отделов пищеварительного тракта. Биокомплексы "Нормофлорины" рекомендуют в целях профилактики и лечения широкого перечня заболеваний у людей [2,с.96; 5,с.56-61].
Биокомплексы "Нормофлорины" традиционно используются гастроэнтерологами [2,с.96]. Их положительный эффект связывают с восстановлением микроэкологического статуса кишечника за счет бифидобактерий, лактобацилл, витаминов, аминокислот, ферментов, пребиотикалактита и микроэлементов (калия, натрия, кальция, железа, магния, меди, цинка и др.)[3,с.22-26].
Следует,однако отметить, что сугубо микробиологических исследований биокомплексов "Нормофлорины" выполнено крайне мало. В этой связи следует указать на опубликованные результаты изучения синтетического углеводородного спирта Лактит МС [12,с.61-64], свидетельствующие о том, что Лактит МС характеризуется низкой пребиотической эффективностью.
Цель работы состоит в сравнительном изучении биокомплексов "Нормофлорины" и Лактита МС на восстановлении микробиоценоза кишечника животных с индуцированным дисбиозом.
В экспериментах использовали биокомплексы "Нормофлорины" (производитель ООО "Бифилюкс", г.Москва).
В качестве контрольного препарата использовали Лактит МС – синтетический углеводородный спирт, произведенный из молочного сахара, полученного из молочной сыворотки (изготовитель фирма "DANISCOUSA Inc", США). Включен в список пищевых добавок не оказывающих вредного воздействия на здоровье человека при использовании в изготовлении пищевых продуктов (Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 14.10.2001 г. № 36; Сан ПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевых ценностей продуктов") в качестве текстуратора и подсластителя.
Выращивание бифидобактерий и лактобацилл проводили на оригинальных питательных средах в микроаэрофильных условиях. Общее количество микробных клеток в пересчете на 1 г фекалий лабораторных животных определяли путем подсчета в камере Горяева. Количество жизнеспособных бактерий (КОЕ) определяли на основании подсчета выросших колоний после посева суспензий фекалий на плотную питательную среду.
Антибиотико-ассоциированный дисбиоз у белых мышей обоего пола, массой 18-20 г, воспроизводили путем перорального введения гентамицина (фирма изготовитель KRKA,Словения) по описанному методу [8].
Статистическую обработку результатов экспериментов проводили согласно рекомендациям руководства И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева [7].
Дисбиотическое состояние микробиоты кишечника у белых мышей после перорального введения гентамицина на 8 сутки эксперимента соответствует 2 степени по классификации И.К.Максимова [6,с.79-84].
Общее количество микроорганизмов в 1 г фекалий снизилось до (4,2 ± 0,5)•103 КОЕ, бифидобактерий – до (2,2± 0,6)102 КОЕ, лактобацилл – до (2,5± 0,5)•102 КОЕ.
На 4 суткипосле прекращения введения белым мышам гентамицина, для коррекции дисбиотических изменений в микробиоценозе кишечника, животным перорально стали вводить биокомплексы "Нормофлорины" и Лактит МС в суточных дозах с учетом переводного коэффициента, соответствующих таковым для людей. Эффективность коррекции дисбиоза определяли по скорости восстановления микробиоты. Данный показатель определяется как частное от деления разницы значений концентраций микроорганизмов в 1 г фекалий в конце и начале эксперимента на количество дней между двумя временными точками определения концентрации микроорганизмов в фекалиях (КОЕ•г-1•сут-1) [10]. Результаты представлены в Табл.1.

Таблица 1

 Влияние биокомплексов "Нормофлорины" на восстановление кишечной микробиоты у белых мышей с антибиотико-ассоциированным дисбиозом

Представленные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что биокомплексы "Нормофлорины", каждый по-своему, оказывают стимулирующий эффект на микробиоту кишечника белых мышей с индуцированным дисбиозом. Если сравнивать скорость восстановления микробиоты кишечника у животных относительно пятой контрольной группы, животные которой находились на обычном пищевом рационе (т.е. происходило самовосстановление микробиоты), то наиболее выраженный эффект оказывает биокомплекс "Нормофлорин - Л", причем на лактобациллы собственной микробиоты.
Пребиотик Лактит МС тоже оказывает стимулирующее влияние на микробиоту животных с индуцированным дисбиозом: скорость восстановления микробиоты в десятки и сотни раз превышает таковую в группе контроля, где происходило самовосстановление кишечной микробиоты.
Очевидно, что входящие в состав биокомплексов "Нормофлорины" пробиотические микроорганизмы – бифидобактерии, лактобациллы, их продукты жизнедеятельности, в частности бактериоцины, мурамилдипептид, летучие жирные кислоты, а также галактоолигосахарид (Лактит МС) оказывают синергидный эффект на кишечную микробиоту, способствуя ее восстановлению.
Полученные результаты, характеризующие скорость восстановления микробиоты кишечника в сравнении с самовосстановлением, дают основание полагать, что коррекция дисбиозабиокомплексами "Нормофлорины" и пребиотиком Лактит МС в одинаковой степени эффективна. Тогда какова же роль самого галактоолигосахарида? На этот вопрос, по-видимому, можно ответить с позиции сравнительной оценки выживаемости микроорганизмов пробиотиков в составе коммерческих препаратов в условиях invitro [4,с.96-101]. Разработанная методика [9]позволяет оценить выживаемость пробиотических микроорганизмов в условиях invitro, моделирующих процесс пищеварения у человека. Показано, что популяция микроорганизмов биокомплекса "Нормофлорин - Б" (B.bifidum,B.longum) в модельных условиях invitroснижает свою численность на 4 порядка, биокомплекса "Нормофлорин - Д" (B.bifidum,B.longum, L.casei) –на 4 порядка, биокомплекса "Нормофлорин - Л" (L.acidophilus) – на 3 порядка. Таким образом, пробиотические микроорганизмы, входящие в состав биокомплексов "Нормофлорины", чувствительны как к кислой, так и щелочной модельным средам с соответствующими ферментными препаратами, и в толстую кишку в жизнеспособном состоянии поступает всего 0,0125% - 0,1% бифидобактерий и лактобацилл от их исходного количества, принятого peros.
Низкая численность популяций пробиотических микроорганизмов биокомплексов "Нормофлорины" не позволяет им внедриться и прижиться в биопленке кишечника, а тем более размножиться и выделить при этом метаболиты, которые смогли бы стимулировать рост собственноймикробиоты в условиях дисбиоза.Именно Лактиту МС и микробным метаболитам культуральной жидкости отводится роль стимулятора собственной кишечной микробиоты. Это имеет немаловажное значение если учесть, что транзиторность и незначительное количество пробиотических препаратов биокомплексов "Нормофлорины" нивелируют имеющийся пробиотический потенциал бифидобактерий и лактобацилл, и в целом на эффективность заместительной терапии.
В заключение необходимо отметить следующее. Полученные экспериментальные данные со всей очевидностью свидетельствуют о необходимости продолжения исследований в направлении оценки влияния отдельных компонентов биокомплексов "Нормофлорины", в частности нативных живых бифидобактерий и лактобацилл, надосадочной жидкости нативных культур пробиотических микроорганизмов, входящих в состав биокомплексов "Нормофлорины", как с добавлением Лактита МС, так и без него. Это позволяет определиться с действующим началомэффективного воздействия на собственную микробиоту кишечника при дисбиозах различного генеза.

Список литературы

1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.Л:Медгиз, 1962. – 280 с.
2. Бондаренко В.М., Шапошникова Л.И. Клинический эффект жидких симбиотических биокомплексов, содержащих физиологически активные клетки бифидобактерий и лактобацилл. Тверь: ООО Издательство "Триада", 2009.- 96с.
3. Виноградова М.А., Виноградов Н.А., Федотова С.А. "Нормофлорин - Д"в восстановлении нарушенного микробиоценоза кишечника/Клинический эффект жидких симбиотических биокомплексов, содержащих физиологически активные клетки бифидобактерий и лактобацилл. Тверь: ООО Издательство "Триада", 2009. – с.22-26.
4. Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Ердякова А.С., Погорельский И.П., Лундовских И.А. Сравнительная оценка выживаемости микроорганизмов пробиотиков в составе коммерческих препаратов в условиях invitro// Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2011. - № 9.- с.96-101.
5. Куликова Л.Е., Погорельский И.П. Биокомплексы "Нормофлорины"как средство коррекции микрофлоры кишечника в клинической практике// Сборник научных трудов по итогам международной научно - практической конференции "Актуальные вопросы и перспективы развития медицины".- Омск, 2014.- с.56- 61.
6. Максимов И.К. Нарушение микробиоценоза на фоне химиотерапии у больных опухолевыми заболеваниями системы крови: новые методы диагностики и коррекции//Фарматека.- 2004.- № 13.- с.79-84.
7. Минушкин О.Н., Елизаветина Г.А., Ардатская М.Д. Нарушение баланса микрофлоры и ее коррекция//Эффективная фармакотерапия.- Гастроэнтерология.- 2013.- № 4.- с.4-8.
8. Патент № 2477894. Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Ердякова А.С., Погорельский И.П., Лундовских И.А. Способ моделирования дисбактериоза кишечника у лабораторных животных. Заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО ВятГУ № 2011149501; заявл.05.12.2011; опубл.20.03.2013Бюл.№ 8.
9. Патент № 2468087. Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Ердякова А.С., Погорельский И.П., Лундовских И.А. Способ выявления жизнеспособных пробиотических микроорганизмов в условиях invitro, имитирующих процесс пищеварения у человека. Заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО ВятГУ № 2011133426; заявл.09.08.2011; опубл.27.11.2012 Бюл. № 33.
10. Патент № 2468087. Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Ердякова А.С., Погорельский И.П., Лундовских И.А. Способ оценки воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника при его дисбиотических нарушениях. Заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО ВятГУ № 2012101059; заявл.11.01.2012; опубл.27.05.2013 Бюл. № 15.
11. Циммерман Я.С. Эубиоз и дисбиоз желудочно-кишечного тракта: мифы и реалии//Клиническая медицина.- 2013.- Т. 91, № 1.- с.4-11.
12. Чичерин И.Ю., Погорельский И.П., Лундовских И.А., Дармов И.В., Маракулин И.В. Сравнительная оценка способности пищевых волокон с пребиотическим действием и пребиотикаСтимбифид к восстановлению кишечной микрофлоры у конвенциональных белых мышей с антибиотико-ассоциированным дисбактериозом//Медицинский Советник Поволжья.- 2012.- № 4(4).- с.61-64.