03 января 2016г.
2-диметиламино-1,3-бис-(фенилсульфонилтио пропан) (в дальнейшем 2-ДМА-1,3-БФСТП) – биологи- чески активное вещество, обладающее антихолинэстеразным действием.
Структурная формула 2-ДМА-1,3-БФСТП имеет вид:
По физическим свойствам это белое возможно с кремоватым оттенком кристаллическое вещество без запаха [1, 2] или желтоватые прозрачные кристаллы с температурой плавления 84-85оС [2] или 82,2 оС или 83- 84°С [3].
Растворимость данного вещества (в мг/л) при 20oC в воде составляет 0,75, в гексане – 319, в толуоле – 83300, в метаноле – 10480, в этилацетате – 149000. По другим данным его растворимость в воде при 30°С - 0,7-0,8 мг/л, растворимость при 25 °C (%): в бензоле 35,4, в ксилоле 5,5, в толуоле 16 [2, 5]. В щелочном и водном растворе соединение быстро гидролизуется, но устойчиво в подкисленном водном растворе (рН <5,0) [3, 8].
2-ДМА-1,3-БФСТП токсичен для теплокровных. Его ЛД50 при внутрижелудочном введении крысам - 1105-
1120 мг/кг, мышам - 516-484 мг/кг), кроликам - >2000 мг/кг.
Описаны случаи отравления препаратами 2-ДМА-1,3-БФСТП людей, в том числе с летальным исходом [6, 7].
Широкое применение 2-ДМА-1,3-БФСТП, его токсические свойства, Наличие случаев летального отравления данным веществом делают его потенциальным объектом химико-токсикологического анализа.
Вместе с тем, до настоящего времени 2-ДМА-1,3-БФСТП в химико-токсикологическом отношении изучен недостаточно. В частности, относительно мало изучена устойчивость вещества в биологических объектах и сохраняемость его в трупном материале.
Цель настоящей работы - изучение сохраняемости данного соединения в гнилостно разлагающемся биологическом (трупном) материале.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования явился 2-диметиламино-1,3-бис-(фенил-сульфонилтио)пропан (2-ДМА-1,3- БФСТП) (СОП 342-034-2003, содержание вещества ≥97%).).
Изучение сохраняемости 2-ДМА-1,3-БФСТП в гнилостно разлагающемся трупном материале проводили при температуре 0-36оС.
Для этого к мелкоизмельченной (размер частиц 0,2-0,5 см) ткани трупной печени прибавляли исследуемое вещество (размер частиц 5-50 мкм) из расчета 0,1 г на 100 г печени и тщательно перемешивали печеночную ткань с веществом. Полученные искусственные смеси сохраняли в плотно закрытых склянках темного стекла, содержимое которых в дальнейшем периодически перемешивали. В подобных же условиях хранили контрольные образцы печени, не содержащие анализируемое вещество.
Исследования искусственных смесей и контрольных образцов с целью определения рассматриваемого соединения проводили через полтора часа после начала эксперимента и далее – через определенные равные промежутки времени – до тех пор, пока объект исследования не переставал обнаруживаться в трупном материале [4].
Для исследования в каждом опыте брали по 5 г искусственной смеси, содержащей исследуемое вещество или такое же количество контрольного образца печени. Искусственную смесь настаивали с 10 мл этилацетата в течение 45 минут при периодическом перемешивании. Жидкое извлечение отделяли от твердого остатка. Операцию настаивания повторяли. Отдельные извлечения объединяли и испаряли растворитель. Остаток растворяли в 5 мл этилацетата.
Предварительная идентификация методом ТСХ. 0,3-0,8 мл раствора наносили на линию старта пластины
«Силуфол» UV-254. Хроматографировали, применяя элюент гексан-диоксан-пропанол-2 (8:4:0,8), в присутствии вещества-свидетеля и проявляли хроматограммы в УФ-свете. Рассчитывали значение Rf анализируемого вещества.
Подтверждающая идентификация методом ВЭЖХ. 1,5 мл этилацетатного раствора вносили в выпарительную чашку, испаряли в токе воздуха при температуре 18-20оС. Остаток растворяли в 5 мл диоксана, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 15 мл гексана, 1 мл пропанола-2 и доводили объём раствора до метки смесью гексан-диоксан-пропанол-2 (15:5:1). 2-8 мкл полученного раствора хроматографировали в колонке размерами ×624 мм с сорбентом «Силасорб -600». Элюент- гексан-диоксан- пропанол-2 (15:5:1), скорость его подачи-100 мкл/мин. Аналитическая длина волны - 256 нм. Определяли время удерживания анализируемого вещества.
Подтверждающая идентификация методом УФ-спектрофотометрии и количественное определение. После хроматографирования методом ТСХ пятно вещества вырезали из хроматограммы, помещали в пробирку, элюировали вещество из сорбента ацетонитрилом в течение 15 минут и исследовали поглощение элюата в интервале длин волн 200-360 нм на фоне контрольного раствора. Фиксировали значение оптической плотности при длине волны 255 нм на фоне элюата, полученного в контрольном опыте, и, используя уравнение калибровочного графика, рассчитывали количество извлеченного 2-ДМА-1,3-БФСТП.
Результаты исследования
При обнаружении и проведении предварительной идентификации методом ТСХ анализируемое вещество проявлялось в УФ-свете в виде темного пятна на более светлом общем фоне пластины. Идентифицировали 2- ДМА-1,3-БФСТП по величине Rf, которая совпадала с величиной Rf стандарта и составляла 0,56±0,03.
В процессе подтверждающей идентификации методом ВЭЖХ 2-ДМА-1,3-БФСТП идентифицировали по характерному времени удерживания, которое составляло 6,35±0,06.
При определении методом УФ-спектрофотометрии на основе особенностей поглощения в этаноле анализируемое соединение идентифицировали по характерной форме спектральной кривой и положению максимумов полос поглощения. Спектральная кривая, вещества, извлекаемого из биологического материала в каждом случае имела характерную форму, близкую к форме спектральной кривой вещества-стандарта.
В УФ-спектре 2-ДМА-1,3-БФСТП, изолированного из биологического материала на различных сроках сохранения, обнаруживалось, как и в УФ-спектре стандартного вещества, присутствие двух выраженные полос поглощения: в области 210±2 нм и 255±1 нм.
Уравнение градуировочного графика для фотометрического определения банкола по поглощению в УФ- области спектра имело вид: А = 0,01412•С – 0,00135, где А-оптическая плотность, С - концентрация анализируемого вещества в фотометрируемом растворе (мкг/мл).
Относительная ошибка среднего результата при определении банкола методом УФ-спектрофотометрии не превышала 0,9 % (n=6; Р=0,95).
2-ДМА-1,3-БФСТП, рассчитанные по величине оптической плотности этанольного раствора при 255 нм, уменьшались с увеличением продолжительности сохранения биологических объектов.
Результаты исследования сохраняемости 2-ДМА-1,3-БФСТП в гнилостно-разлагающемся трупном материале представлены на Рисунок 1.
Рис.1. Зависимость степени извлечения 2-ДМА-1,3-БФСТП от температуры и продолжительности сохранения биологического материала
Как свидетельствуют полученные данные, 2-ДМА-1,3-БФСТП в гнилостно-разлагающемся трупном материале сохраняется в течение четырех суток при температурах от 0°С до 36°С.
Установленные сроки сохранения 2-ДМА-1,3-БФСТП в биоматериале позволят при проведении экспертиз летальных отравлений данным соединением правильно оценить целесообразность проведения химико- токсикологического исследования и ориентировочно предположить давность наступления смерти по результатам проведения подобного исследования.
Выводы
1. На примере модельных смесей с тканью печени исследована сохраняемость 2-диметиламино-1,3-бис- (фенилсульфонилтио)пропана в гнилостно разлагающемся трупном материале.
2. Показано, что при температуре 0-36оС продолжительность сохранения 2-диметиламино-1,3-бис-
(фенилсульфонилтио)пропана в модельных смесях составляет не более 4 суток.
Список литературы
1. Григорьев, А.М. Идентификация и определение производных и продуктов метаболизма банкола и методами ГЖХ-МС и ВЭЖХ для целей судебно-химического и химико-токсикологического анализа / А.М. Григорьев, А.А. Мельник, Л.В. Рудакова // Сорбционные и хроматографические процессы.- 2008.-Т. 8, вып. 5.-С. 766-778.
2. Мельников, Н.Н. Пестициды и регуляторы роста растений: справочник / Н.Н. Мельников, К. В. Новожилов, С. Р. Белан. – М.: Химия, 1995. – 575 с.
3. Определение остаточных количеств бенсултапа в воде, почве, клубнях картофеля, зерне и соломе зерновых колосовых культур, томатах и баклажанах методом газожидкостной хроматографии: методические указания (Утверждены Минздравом РФ 24 июня 2003 г. N 4.1.1427-03) // Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний. Вып. 4. Ч. 1.-Москва: Минздрав России, 2004.-13 с.
4. Особенности определения и изучение сохраняемости тетраэтилтиурамдисульфида в биологическом материале / А.П. Просветова, В.К. Шорманов, Е.П. Дурицын, Т.Н. Илюшина // Судебно-медицинская экспертиза.-2010.-Т. 53 , № 6.-С. 31 – 34
5. Попов, С.Я. Основы химической защиты растений / С.Я. Попов, Л.А. Дорожкина, В.А. Калинин; под ред. профессора С.Я Попова. - М.: Арт-Лион, 2003. - 208 с.
6. Судебно-химическое определение банкола / В.К. Шорманов, Ю.Н. Баранов, Е.П. Дурицын [и др.] // Судебно-медицинская экспертиза.-2010.-Т. 53 , № 6 .-С. 39-41.
7. Mikov, M. Acute human poisoning with bensultap (Bancol) / M. Mikov, M. Jecez, J. Popovic // Arch. Toxicol. Kinet. Xenobiot. Metab.-1997.-Vol. 5.- Р. 231-233.
8. Summary of Toxity Studies on Bensultap. (Development Department, Plant Protection Research, Agro Division, Taceda Chemical Industries, Ltd.) // J. Pesticide Sci. - 1989. -Vol. 14, N 4.-P. 523 – 529.
