25 июня 2016г.
Вирусы гепатита С и В имеют различные внепеченочные проявления, в частности, поражения кожи, почек, сердечно-сосудистой системы, легких и щитовидной железы, слюнных желез и другие [1,4]. Изменения со стороны полости носа изучено недостаточно. Частота встречаемости носового кровотечения при заболеваниях печени варьирует от 1% до 13,4% [3]. В данной статье рассмотрены изменения местного иммунитета слизистой оболочки носа для выявления возможных механизмов ее повреждения.
Цель исследования. Определить изменения местного иммунитета слизистой оболочки носа при хронических вирусных гепатитах.
Пациенты и методы исследования.
В исследовании принимали участие 18 человек от 30 до 60 лет, разделенных на 3 группы:
- первая группа состояла из 6 человек с хроническим вирусным гепатитом С, из них 3 человек с циррозом печени;
- вторая группа составила 6 пациентов с хроническим вирусным гепатитом В, из них 4 пациента с циррозом печени;
- третья группа – группа контроля, включала 6 человек, в сыворотке которых вирусных маркеров гепатита не было обнаружено.
Пациентам проводился скрининг гемоконтактных гепатитов: HBsAg и антитела к HCV исследовали методом иммуноферментного анализа с помощью тест-системы ЗАО «Вектор-Бест» III поколения.
Суспензию клеток из биопсийного материала получали с помощью механического дезинтегратора Medimachine (BD) для определения местного субсостава лимфоцитов. Использовали антитела: HLA DR-FITC, CD4-PE, CD3-ECD, CD56-PC5.5, CD25-PC7, CD8-APC, CD19-APC-AF700, CD45-APC-AF750 (Beckman Coulter).
Популяцию лимфоцитов оценивали как CD45+brightSSCdim клетки. Пробы рассчитывали на проточном цитофлюориметре Navios (Beckman Coulter) в многоцветном протоколе. Анализ образца осуществлялся при наборе не менее 200 событий в лимфоцитарном гейте. Результат считался достоверным, если набиралось более 25 событий в регионе субпопуляции лимфоцитов.
Результаты исследования и их обсуждение.
В субпопуляционном составе лимфоцитов слизистой оболочки носа выявлено преобладание Т-лимфоцитов на фоне низкого значения субпопуляций В- и NK-лимфоцитов, изменение соотношения хелперных и цитотоксических субпопуляций Т-лимфоцитов с увеличением последних, что характерно для местного иммунитета [2].
При анализе результатов исследования относительного количества субпопуляций лимфоцитов в слизистой оболочке носа у пациентов с хроническими гепатитами с результатами контрольной группы был установлен ряд достоверных отличий (Табл.1).
Таблица 1 Относительное количество субпопуляций лимфоцитов в слизистой оболочке носа пациентов с хроническими гепатитами В и С и контрольной крупы (%).
Показатели
|
Хронический
гепатит N=12
1 и 3 квартили, медиана
|
Контрольная группа N=6
1 и 3 квартили, медиана
|
CD3+ (Т-лимфоциты)
|
87-93
91
|
78-93
85
|
CD3+CD4+ (Т-хелперы)
|
17-41
|
33-36
|
|
27
|
35
|
CD3+CD8+ (Т-киллеры)
|
49-72
65
|
42-57
48
|
Соотношение CD4+/CD8+
|
0,24-0,8
0,4
|
0,6-0,75
0,6
|
СD3+CD56+ (ТNK-клетки)
|
5,5-8,6
6,9
|
4,1-7,4
7,0
|
CD19+ (В-лимфоциты)
|
1,8-3,1
2,5
|
2-9
3,3
|
CD 25+ (рецептор ИЛ-2)
|
2,1-3,1
2,7
|
2,2-5,2
3,5
|
CD3-CD56+ (NK-клетки)
|
4,1-7,2
5,0
|
3,7-12,1
6,4
|
HLA DR+
|
18-34
29*
|
13-23,4
19*
|
CD3+HLA DR+ (активир. Т-клетки)
|
12,4-34,4
25,7*
|
10,0-11,6
10,2*
|
CD56+HLA DR+ (активир. NK-клетки)
|
4,4-7,5
5,8*
|
2,6-3,5
2,7*
|
* - статистически достоверные отличия, p<0,05.
В биоптатах слизистой носа группы пациентов с хроническими гепатитами В и С по сравнению с нормой определена склонность к увеличению относительного количества цитотоксических Т-лимфоцитов (60,2±14,4% против 49,8±7,4%). Статистически установлено достоверное повышение относительного количества HLADR+ лимфоцитов (30,4±11,8% против 18,2±4,2, p<0,05) за счет повышения относительного количества активированных Т- и NK-лимфоцитов (26,6±14,6% против 11,7±3,4% и 6,2±2,2 против 2,8±0,6, p<0,05).
При сравнении результатов исследования относительного количества субпопуляций лимфоцитов в слизистой оболочке носа между подгруппами пациентов с хроническими вирусными гепатитами С, В и здоровыми лицами (группы 1, 2, 3) было выявлено (Табл.2):
Таблица 2 Сравнение относительного количества субпопуляций лимфоцитов слизистой носа в подгруппах пациентов с хроническими вирусными гепатитами С, В и здоровыми лицами (%).
Показатели
|
Группа 1
N=6
1 и 3 квартили, медиана
|
Группа 2
N=6
1 и 3 квартили, медиана
|
Группа 3
N=6
1 и 3 квартили, медиана
|
CD3+ (Т-лимфоциты)
|
86-93
88,9
|
92-93,5
93
|
78-93
85
|
CD3+CD4+ (Т-хелперы)
|
15-37,5
22,5
|
24-36
31
|
33-36
35
|
CD3+CD8+ (Т-киллеры)
|
44-75,5
66,5
|
55,5-67
62
|
42-57
48
|
Соотношение CD4+/CD8+
|
0,2-0,94
0,3
|
0,37-0,65
0,5
|
0,6-0,75
0,6
|
СD3+CD56+ (ТNK-клетки)
|
4,4-12
5,8
|
6,9-7,3
7,1
|
4,1-7,4
7,0
|
CD19+ (В-лимфоциты)
|
2,1-3,1
2,0
|
2,1-3,1
3,0
|
2-9
3,3
|
CD 25+ (рецептор ИЛ-2)
|
2,1-3,1
2,1
|
2,8-3,0
2,9
|
2,2-5,2
3,5
|
CD3-CD56+ (NK-клетки)
|
5,1-11,2
7,3
|
4-4,5
4,1
|
3,7-12,1
6,4
|
HLA DR+
|
27,0-43,5
29,5*¥
|
13-25
16*
|
13-23,4
19¥
|
CD3+HLA DR+ (активир. Т-
клетки)
|
21,5-44,1
31,9*¥
|
11,1-22,5
13,7*
|
10,0-11,6
10,2¥
|
CD56+HLA DR+ (активир. NK-
клетки)
|
6,5-9,4
6,8*¥
|
3,4-4,3
4,0*
|
2,6-3,5
2,7¥
|
* - статистически достоверные отличия между группами пациентов с гепатитами В и С, p<0,05.
¥ - статистически достоверные отличия между группой пациентов с гепатитом С и группой здоровых лиц.
В биоптатах слизистой носа в подгруппе пациентов с гепатитом С по сравнению с результатами пациентов с гепатитом В выявлено статистически достоверное повышение относительного количества HLADR+ лимфоцитов (35,5±13,0% против 18,2±4,2%, p<0,05) за счет повышения относительного количества популяций активированных Т- и NK-лимфоцитов (31,9±15,9% против 17,8±8,9% и 7,7±1,9% против 3,7±0,7% соответственно, p<0,05). При этом, значения в подгруппе пациентов с гепатитом В были сопоставимы с нормальными, а значения в подгруппе пациентов с гепатитом С превышали таковые (HLA DR+: 35,5±12,9% против 18,2±4,2%, CD3+HLA DR+: 31,9±15,9% против 11,7±3,4%, CD56+HLA DR+: 7,7±1,9% против 2,8±0,6, p<0,05).
Заключение.
У пациентов с гепатитом С отмечается повышение количества активированных Т- и NK- лимфоцитов в слизистой носа, свидетельствующее о выраженном иммунном ответе. Возможно это связано с участием клеток специфического иммунитета, прежде всего CD8+ Т-лимфоцитов, в повреждении слизистой оболочки носа у пациентов с хроническим гепатитом С.
У пациентов с хроническим вирусным гепатитом В субпопуляционный состав лимфоцитов слизистой оболочки был соизмерим с нормой.
Список литературы
1. Байкова Т.А., Лопаткина Т.Н. Многообразие внепеченочных проявлений хронических вирусных гепатитов В и С, общие принципы лечения // Терапевтический архив. – 2013. - №4. - С. 106-107.
2. Давыдова Н.И., Бычкова Н.В., Кобиашвили М.Г., Михайлова И.А. Анализ показателей местного иммунитета при некоторых вариантах течения и исхода хронического воспаления верхних отделов желудочно-кишечного тракта. // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. – 2013. - N1. - с. 60-66.
3. Epistaxis: Study of aetiology, site and side of bleeding/ Urvashi Razdan, [et al.]// Indian Journal of Medical Science -1999 – Vol.53, Issue 12 - p.545-552.
4. Lohr H.F., Goergen B., Buschenfelde K.H., Gerken G. HCV replication in mononuclear cells stimulates anti-HCV- secreting B cells and reflects nonresponsiveness to interferon-alfa // J. Med. Virol., 1995. - Vol. 46 - №4. - P.314- 321.