02 января 2016г.
Введение
Бронхиальная астма (БА) - фенотипически гетерогенное заболевание, что представляет трудность в своевременной диагностике этого заболевания, особенно у детей. Ряд авторов отмечает значительный рост распространенности астмы у детей за последние 25 лет [1,2]. Изучение генетических аспектов бронхиальной астмы в России проводились в направлении исследования полиморфизма генов интерлейкиновых лигандов и рецепторов, оценки их экспрессии. Полученные результаты подтвердили важную роль генетической компоненты в контроле воспаления при бронхиальной астме.
Среди большого числа генов-кандидатов БА и атопии внимание исследователей в большой степени привлечены к гену IL-4. Именно IL-4 на начальных стадиях развития воспаления, связываясь со своим рецептором на поверхности В-клеток, переключает их на производство IgE [3,4].Важная роль мутаций гена IL- 4RА в патогенезе атопии подтверждена и другими данными. Ген для IL-4RА (16р12.1-р11.2) остается, видимо, одним из главных кандидатных локусов БА и атопии. Исследования уже известных его полиморфизмов в связи с БА и атопией, а также поиск новых мутаций этого гена представляет большой интерес [5,6,7].
Цель исследования
Проанализировать полиморфизм гена IL- 4RA по мутации I50V и С-590Т гена IL- 4 у детей с бронхиальной астмой астраханской популяции и условно здоровых детей.
Материал и методы исследования
Обследована популяция детей, проживающих на территории Астраханской области. Дети были распределены по двум группам. Контрольная группа была представлена условно здоровыми детьми в количестве 91 человек и детей с бронхиальной астмой в количестве 86 человек. Мальчики – 58 человек, девочки - 28 детей. Пациенты получали лечение в пульмонологическом отделении ГБУЗ ДГКБ № 2 г. Астрахани. Диагноз бронхиальной астмы и ее тяжесть выставлен в соответствии с критериями международных документов, национальной программы по лечению и стратегии бронхиальной астмы у детей. Группы больных разделялись по степени тяжести заболевания. Дети с легкой персистирующей астмой - 18 человек (20,9 %), со среднетяжелой – 42(48,8 %) и тяжелой- 26 (30,3%). Средний возраст больных составил 10 лет, средний возраст дебюта заболевания составил 5 лет. Обследованы дети со стажем заболевания в анамнезе не менее 1 года.
Для выполнения молекулярно-генетического анализа производили выделение тотальной ДНК из цельной крови с помощью стандартного метода фенол-хлороформной экстракции. Генотипирование полиморфных маркеров изучаемых генов осуществляли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализа). Для проверки соответствия распределения генотипов ожидаемому при равновесии Харди–Вайнберга (РХВ), сравнения частот аллелей и генотипов, оценки связи аллелей генов с МВ использовали критерий χ2 Пирсона с поправкой Йетса на непрерывность.
Результаты и обсуждение
Выявлено, что по полиморфизму I50V гена IL-4RA у здоровых детей достоверно преобладает гетерозиготный генотип ivχ2(=16, р=0,001).С наименьшей частотой встречался гомозиготная комби нация мутантного аллеля v. При анализе генотипов пациентов с бронхиальной астмой, также выявлено преобладание гетерозиготного генотипа iv , что подтверждено статистически значимыми данными.Гомозиготные генотипы ii и vv,были практически равночастотные.
Таблица 1
Распределение частот генотипов по полиморфизму I50V гена IL-4RA у детей с астмой и в условно здоровой популяции
|
vv
|
ii
|
iv
|
Стат. значимость
|
Астма
N=86
|
20 (0,232)
|
23(0,267)
|
43(0,5)
|
χ2=10 р*=0,005
|
Контрольная группа N=91
|
19(0,208)
|
24 (0,263)
|
48 (0,527)
|
χ2=16, р*=0,001
|
|
χ2=0,1
р**=0,7
|
χ2=0,03
р**=0,87
|
χ2=0,18
р**=0,67
|
|
|
|
|
|
|
p*- между генотипами внутри группы
p**- между генотипами двух групп
Однако, при анализе различных генотипов между группами, не выявлено ассоциации c бронхиальной астмой ни по одному их генотипов по данному полиморфизму.
Таблица 2
Распределение частот генотипов по полиморфизму С-590Т гена IL-4 у детей с астмой и в условно здоровой популяции
генотипы
|
T/T
|
T/C
|
C/C
|
Здоровые
n=91
|
9
|
48
|
33
|
Астма
n=86
|
12
|
36
|
38
|
|
χ2=0,7 р=0,4
|
χ2=2 р=0,1
|
χ2=1 р=0,3
|
В группе условно здоровых детей по полиморфизму 590 T/C гена IL-4 вывлено преобладание гетерозиготного генотипа T/C, с наименьшей частотой встречался гомозиготный вариант T/T.В группе с бронхиальной астмой равночастотные варианты T/C ,C/C/. Таким образом, не выявлено ассоциации данного полиморфизма с риском возникновения бронхиальной астмы.
Таблица 3
Распределение частот генотипов по полиморфизму С-590Т гена IL-4 у детей с астмой в зависимости от тяжести заболевания
генотипы
|
T/T
|
T/C
|
C/C
|
Стат.значимость
|
|
1
|
2
|
3
|
|
Легкая
n= 18
|
-
|
8
|
10
|
χ2=1 р=0,3
|
Среднетяжелая
n=42
|
8
|
16
|
18
|
χ2= 4
р1-2= 0,04
χ2= 5
р1-3= 0,01
χ2= 0,3
р2-3= 0,5
|
Тяжелая
n=26
|
4
|
14
|
8
|
χ2= 10
р1-2= 0,001
χ2= 2,8
р2-3= 0,09
χ2= 1.7
р1-3= 0,18
|
Выявлено, что в группе со среднетяжелой степенью астмы достоверно ниже встречался генотип T/T. В группе с тяжелой степенью по полиморфизму С-590Т гена IL-4 достоверно преобладал гетерозиготный вариант T/C.
Выводы
Таким образом, данные проведенного исследования свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфного локуса I50V гена IL- 4 RA и С-590Т гена IL-4 с риском развития бронхиальной астмы у детей Астраханской области.
При сравнительном анализе частот генотипов по полиморфизму С-590Т гена IL-4, между группами различной степени тяжести, выявлено достоверное преобладание генотипов T/С С/С при среднетяжелой степени заболевания и T/С при тяжелой степени, а также отсутствие генотипа Т/Т при легкой степени заболевания.
Список литературы
1. Намазова, Л.С.. Эпидемиология и профилактика аллергических болезней и бронхиальной астмы на современном этапе / Л.С. Намазова, Н.И. Вознесенская, P.M. Торшхоева и др. // Вопросы современной педиатрии. -2004. - № 4. - С. 66-70.
2. Национальная программа «Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика» М.: Издательский дом «Атмосфера». 2008.- 108 с
3. Огородова Л.М., Фрейдин М.Б., Пузырёв В.П. Вклад полиморфизма генов интерлейкинов в изменчивость количественных факторов риска атопической бронхиальной астмы // Мед. генетика. 2003. Т. 2. No 3. С. 130-135.
4. Огородова Л.М., Козырицкая Д.В., Деев И.А., Екимовских А.В. Биологические маркеры атопического воспаления при аллергических заболеваниях как предикторы развития бронхиальной астмы в будущем // Педиатрия. 2007. Т. 86. No 4. С. 9-13.
5. Огородова Л.М., Дубаков А.В., Фрейдин М.Б., Тетенев Ф.Ф.Ассоциация полиморфизма генов IL-4 и IL- 4RA с показателями вентиляционной функции легких и патогенетическими признаками атопической бронхиальной астмы в семьях // Пульмонология. 2004. No 4. С. 10-15.
6. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Огородова Л.М., Кобякова О.С. Взаимосвязь полиморфных вариантов генов интерлейкинов и их рецепторов с атопической бронхиальной астмой // Мед. генетика.2002. Т. 1. № 2. С. 86–92.
7. Фрейдин М.Б., Пузырев В.П., Огородова Л.М. Полиморфизм генов интерлейкинов и их рецепторов: популяционная распространенность и связь с атопической бронхиальной астмой //Генетика. 2002. Т. 38. № 12. С. 1710–1718.