Новости
09.05.2023
с Днём Победы!
07.03.2023
Поздравляем с Международным женским днем!
23.02.2023
Поздравляем с Днем защитника Отечества!
Оплата онлайн
При оплате онлайн будет
удержана комиссия 3,5-5,5%








Способ оплаты:

С банковской карты (3,5%)
Сбербанк онлайн (3,5%)
Со счета в Яндекс.Деньгах (5,5%)
Наличными через терминал (3,5%)

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МАКРОФАГОВ РАЗЛИЧНЫХ ФРАКЦИЙ

Авторы:
Город:
Екатеринбург
ВУЗ:
Дата:
17 декабря 2016г.

Аннотация

Макрофаги ‒ это клетки иммунной системы, способные выполнять широкий спектр функций и представляющие собой центральное звено врождённого иммунного ответа. Популяция макрофагов  отличается гетерогенностью, благодаря наличию в ее составе органо- и тканеспецифичных макрофагов, а также фагоцитов различной степени зрелости. При изучении первичных культур макрофагов выделенных из различных органов здоровых крыс, были продемонстрированы значительные морфологические и функциональные различия макрофагов разных органов. Эти результаты являются основой для дальнейшего изучения поляризации и функциональных характеристик макрофагов при патологии.

Ключевые слова: макрофаги, морфофункциональная гетерогенность, жизнеспособность, пролиферативная активность.

 Макрофаги являются неотъемлемой частью врожденного иммунитета и играют центральную роль в воспалении и защите организма [4]. Они обладают сильным фагоцитарным и бактерицидным потенциалом, регулируют секреторную и пролиферативную активность других клеточных элементов, контролируют объем внеклеточного матрикса, инициируют и модулируют иммунные реакции [3]. Нарушение их функций приводит к развитию инфекций, хронических воспалений, аутоиммунных заболеваний, а также к инициации и прогрессии  опухолей. В связи  с этим актуальной является проблема медикаментозной коррекции и репрограммирования функций макрофагальной системы [2].

Макрофаги характеризуются структурной и функциональной гетерогенностью — в зависимости от степени зрелости, от области локализации, а также от их активации антигенами или лимфоцитами. Морфологическая и функциональная неоднородность макрофагов требует тщательного предварительного исследования их реакции на экспериментальные воздействия с целью прогнозирования системного ответа макрофагальной системы при терапевтической коррекции.

В качестве объекта исследования использовали первичные культуры тканевых макрофагов, выделенных из различных органов крыс линии Wistar: альвеолярные и перитонеальные макрофаги, а также макрофаги печени и селезенки. Исследовали морфометрические показатели, показатели жизнеспособности и функциональной активности.

Дифференцировку макрофагов в культуре проводили иммуногистохимическим методом с использованием моноклональных антител CD68, которые являются маркерами моноцитов и макрофагов.

В качестве морфологической характеристики использовали размер клеток и ядер, ядерно- цитоплазматическое отношение и количество многоядерных клеток.

Жизнеспособность клеток оценивали путем прямого подсчета клеток в камере Горяева с использованием красителя 0, 4%-ного трипанового синего для выявления клеточной гибели в результате нарушения проницаемости плазматических мембран.

Оценку пролиферативной активности макрофагов осуществляли, используя иммуноцитохимический метод окраски на клеточный маркер пролиферации белок Ki-67 [5]. Секреторную активность макрофагов оценивали гистохимическим методом на выявление неспецифической эстеразы и методом иммунноферментного анализа на продукцию двух цитокинов противоположного действия – IL-10 и TNF-α [1].

Статистическую обработку данных производили, используя компьютерные программы «MS Excel» и «Statistica 10». Вычислялась средняя арифметическая величина, ошибка средней арифметической величины. Для оценки значимости различий между группами использовали t-критерий Стьюдента и непараметрический критерий Манна-Уитни. При р ≤ 0,05 различия между средними величинами считались достоверными.

Установлено достаточно высокое содержание CD68-позитивных клеток в изучаемых культурах. Среди альвеолярных макрофагов CD68-положительные клетки составили 83,4±2,78%, среди перитонеальных – 83,8±7,31% ‒ 67%, в культурах макрофагов печени и селезёнки ‒ 84,2±2,82% и 88,8±1,97% соответственно.

Оценка уровня жизнеспособности клеток показала, что макрофаги всех исследуемых органов после выделения характеризуются высокой жизнеспособностью. Индекс жизнеспособности клеток для альвеолярных макрофагов составил 96,79±2,13%, для перитонеальных макрофагов 93,43±5,38%, для макрофагов печени 100%, для макрофагов селезёнки 96,71±2,9%.

Наибольшее количество полинуклеаров наблюдалось среди альвеолярных макрофагов: 18% составили двуядерные и 2 % - трехъядерные клетки. Процентное содержание двухядерных макрофагов печени и селезенке составило 4% и 1% соответственно. Среди перитонеальных макрофагов многоядерных клеток не выявлено. Наибольший показатель ядерно-цитоплазматического отношения был отмечен у макрофагов печени и селезенки, составляющих группу фиксированных резидентных макрофагов.

Максимальная пролиферативная активность отмечалась у альвеолярных макрофагов (82,29 ± 6,61%) и макрофагов печени (83,33 ± 16,64%). При оценке секреторной активности макрофагов было установлено, что наибольшую ферментативную активность проявили макрофаги мигрирующих фракций – альвеолярные и перитонеальные макрофаги. Наибольшая выработка фактора TNF-ɑ наблюдалась у альвеолярных макрофагов. Высокая продукция IL-10 была отмечена у группы фиксированных резидентных макрофагов печени и селезенки, что, вероятно, связано с функцией регуляции гомеостаза макрофагами этих органов.

Таким образом, произведенная оценка жизнеспособности, пролиферативной и секреторной активности макрофагов, выделенных из различных тканей здоровых крыс, свидетельствует о значительной морфологической и функциональной гетерогенности макрофагов различных органов в культуре. Полученный результат является основой дальнейшего исследования морфофункциональных особенностей резидентных макрофагов при патологии.

 

 

Список литературы

 

 

1.        Барышева С. В., Брюхин Г. В. Морфофункциональные особенности перитонеальных макрофагов у животных с экспериментальным гепатитом // Вестник Челябинского государственного университета. – 2008. – № 4. – С. 60-64.

2.        Лямина С.В., Малышев И.Ю. Поляризация макрофагов в современной концепции формирования имунного ответа //Медицинские науки. Фундаменталньые исследования №10, 2014, 930-935.

3.        Филоненко Т. Г., Бисюк Ю. А. Функциональная активность макрофагов при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких // Таврический медико-биологический вестник. – 2012. – С. 252-257.

4.        Murray P. J., Wynn T. A. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets // Nature reviews immunology. – 2011. – V. 11, №. 11. – P. 723-737.

5.        Scholzen T., Gerdes J. The Ki‐67 protein: from the  known  and the  unknown  //  Journal  of cellular physiology. – 2000. – V. 182, № 3. – P. 311-322.