20 декабря 2017г.
Половые железы высоко чувствительны к токсическому действию цитостатиков. Степень выраженности постцитотоксических изменений в яичниках влияет на сохранение репродуктивной функции: повреждение гонад с потерей функции фолликулярного аппарата и утратой части примордиальных фолликулов приводит к раннему наступлению менопаузы с нарушением детородной функции [2]. С учетом важной роли активации свободнорадикальных реакций в генезе токсических осложнений антибластомной химиотерапии, изучение эффективности антиоксидантных средств в снижении овариотоксичности цитостатиков патогенетически обосновано. Ранее показаны кардиопротекторный, миелопротекторный, гепатопротекторный эффекты ксимедона и мексидола при проведении противоопухолевой химиотерапии [1, 3] и других токсических воздействиях в эксперименте [4]. Однако данные по овариопротекторной эффективности этих средств в условиях антибластомной химиотерапии в литературе отсутствуют.
Целью работы явилось оценить влияние ксимедона и мексидола на показатели оксидантно- антиоксидантного статуса и гистологические изменения в тканях яичников у крыс с карциномой Walker-256 при химиотерапии доксорубицином и паклитакселом.
Материал и методы: эксперименты выполнены на 42 крысах-самках линии Wistar массой 150-250 г. Суспензию клеток карциномы Walker-256 (W-256) (106 клеток в растворе Хенкса) перевивали под кожу хвоста. Животные были распределены на 7 групп. Дизайн исследований представлен в табл. 1.
Таблица 1. Дизайн исследований
|
Группы
|
Режим эксперимента
|
|
Интактные животные (n=6)
|
Опухолевые клетки W-256 не вводили
|
|
1-я – опухолевый штамм W-256 (контроль)
(n=6)
|
1·106 опухолевых клеток W-256 под кожу хвоста
|
|
2-я – W-256, Доксорубицин –
W-256+ДР (n=6)
|
1·106 опухолевых клеток W-256, доксорубицин в/бр (4
мг/кг) на 11-е сутки после имплантации опухолевых клеток
|
|
3-я – W-256, Доксорубицин, Паклитаксел –
W-256+ДР+ПТ (n=6)
|
1·106 опухолевых клеток W-256, доксорубицин (4 мг/кг) и
паклитаксел (6 мг/кг) в/бр на 11-е сутки после имплантации опухолевых клеток
|
|
4-я – W-256, Доксорубицин, Паклитаксел,
Ксимедон 100 мг/кг – W-256+ДР+ПТ+Ксим (n=6)
|
Так же, как и в 3-й группе, ксимедон в/м в дозе 100 мг/кг
ежедневно, начиная с 11-х суток эксперимента, 10 суток
|
|
5-я – W-256, Доксорубицин, Паклитаксел,
Мексидол 50 мг/кг – W-256+ДР+ПТ+Мек (n=6)
|
Так же, как и в 3-й группе, мексидол в/м в дозе 50 мг/кг
ежедневно, начиная с 11-х суток эксперимента, 10 суток
|
|
6-я – W-256, Доксорубицин, Паклитаксел,
Мексидол 50 мг/кг, Ксимедон 100 мг/кг –
W-256+ДР+ ПТ+ Мек + Ксим (n=6)
|
Так же, как и в 3-й группе, мексидол в дозе 50 мг/кг и
ксимедон в дозе 100 мг/кг ежедневно в/м, начиная с 11-х суток эксперимента, 10 суток
|
Исследование проводили на 22-е сутки эксперимента после выведения животных из опыта под общей анестезией тиопенталом натрия. В гомогенатах яичников определяли содержание малонового диальдегида (МДА), активность каталазы и уровень восстановленного глутатиона [1]. Статобработку результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни. Гистологические изменения в яичниках изучали светооптическим методом, предварительно фиксируя их в 10% растворе нейтрального формалина. После приготовления препаратов по общепринятой методике окрашивали их гематоксилином и эозином с исследованием в световом микроскопе «Микмед-6» при увеличении ´ 100 и ´ 400.
Результаты исследования: у животных 1-ой (контрольной) группы отмечались снижение активности каталазы и уровня восстановленного глутатиона на 16% и 29% соответственно. При этом гистологическая структура яичников в целом не отличалась от исходной у интактных крыс. Аналогичные депрессивные изменения в показателях каталазы и восстановленного глутатиона отмечались во 2-ой группе животных (с монотерапией ДР) с тенденцией к росту уровня МДА. В яичниках отмечали снижение числа примордиальных и третичных фолликулов при росте количества атрезирующих на фоне явлений фиброза (табл. 2).
Таблица 2. Показатели оксидантно-антиоксидантного статуса тканей яичников крыс с карциномой W-256 при введении ксимедона и мексидола на фоне химиотерапии доксорубицином и паклитакселом
|
Группы
|
МДА
мкмоль/л
|
Каталаза
мккат/л
|
Восстановленный
глутатион ммоль/г ткани
|
|
Интактные
|
7,2±0,5
|
4,6±0,2
|
1,7±0,05
|
|
1–W-256 (контроль)
|
5,4±0,7
|
3,9±0,1*
|
1,2±0,07*
|
|
2–W-256+ДР
|
8,8±0,5**
|
3,0±0,2* **
|
1,3±0,1*
|
|
3–W-256+ДР+ПТ
|
9,5±,8* **
|
6,2±0,5* **
|
1,07±0,02*
|
|
4–W-256+ДР+ПТ+Ксим
|
8,5±0,6**
|
4,0±0,29&
|
1,4±0,04* &
|
|
5–W-256+ДР+ПТ+Мек
|
7,5±0,8
|
2,6±0,2* ** & #
|
1,3±0,05* &
|
|
6–W-256+ДР+ПТ+
Мек+Ксим
|
8,9±0,6**
|
2,6±0,3* ** & #
|
1,8±0,08& # !
|
Примечание:
* – достоверность различий рассчитана по отношению к интактным животным; ** – к группе 1; & – к группе 3; # – к группе 4; ! – к группе 5.
Полихимиотерапия ДР+ПТ (в 3-ей группе) достоверно приводила к усилению процессов перекисного окисления липидов, что выражалось в росте содержания МДА в тканях яичников на 32% относительно интактных крыс. При этом активность каталазы увеличивалась и превышала исходный уровень на 35%, а содержание восстановленного глутатиона было на 37% меньше, чем у интактных крыс. Гистологически отмечали резкое уменьшение количества примордиальных фолликулов (единичные) и снижение числа первичных, вторичных и третичных фолликулов, а также желтых тел и их размеров. Увеличивалось количество атретических, в основном, вторичных фолликулов. Число неизмененных стромальных клеток уменьшалось, и они замещались фиброзной тканью. Строма становилась разреженной и отечной. Ядра стромальных клеток увеличивались в размерах и становились гиперхромными. Усиливались явления васкуляризации и появлялись признаки липоматоза.
Применение ксимедона (в 4-ой группе) приводило к снижению активности каталазы на 35% (до интактного уровня) и увеличению содержания восстановленного глутатиона на 31% по сравнению с 3-ей группой крыс. Гистологически отмечали увеличение количества вторичных и третичных и снижение числа атретических фолликулов, увеличение числа желтых тел, разрежённость и отечность стромы с явлениями фиброза, разрастание сосудов.
Применение мексидола (в 5-ой группе) приводило к снижению активности каталазы на 58% и увеличению содержания восстановленного глутатиона на 22% по сравнению с 3-ей группой крыс. При этом уровень МДА максимально приближался к исходному интактных крыс. В тканях яичников отмечали увеличение числа примордиальных, первичных и вторичных фолликулов и уменьшение количества атрезирующих до исхода. Увеличивалось количество желтых тел по сравнению с 3-ей группой. Явления фиброза сохранялись, строма оставалась разреженной и отечной.
Совместное применение ксимедона и мексидола сопровождалось снижением активности каталазы на 58% (ниже интактного уровня) и увеличением содержания восстановленного глутатиона на 68% по сравнению с 3-ей группой крыс. При этом гистологическая картина тканей яичников аналогична таковой крыс в группе с ксимедоном.
Таким образом, ксимедон и мексидол обладают овариопротекторным эффектом при химиотерапии доксорубицином и паклитакселом, однако ксимедон уступает мексидолу в коррекции пула примордиальных фолликулов. При этом интенсивность процессов перекисного окисления липидов максимально снижается при использовании мексидола. Сочетание мексидола и ксимедона не имеет морфологических преимуществ в снижении овариотоксичности проводимой терапии, несмотря на нормализацию содержания восстановленного глутатиона в ткани яичников в сравнении с раздельным применением антиоксидантов.
Список литературы
1. Костина Ю.А. Исследование эффективности комбинированного применения производных 3- гидроксипиридина и пиримидина в снижении кардиотоксичности противоопухолевой химиотерапии в эксперименте. Автореф. канд. мед. наук. Саранск, 2015. 22 с.
2. Рощина Н.В., Цырлина Е.В., Пунанов Ю.А., Сафонова С.А., Берштейн Л.М., Костромина Е.В., Малинин А.П., Морозова Е.В. Оценка овариального статуса у женщин, получивших противоопухолевую терапию в детском и подростковом возрасте // Вопросы онкологии. 2014. Т.60,№3. С. 360-364.
3. Сипров А.В., Масягин В.А. Миелопротективная эффективность комбинации производных пиримидина и 3-гидроксипиридина при антибластомной химиотерапии в эксперименте // Саратовский научно-медицинский журнал. 2015. Т.11, №3. С. 258-262.
4. Чаиркина Н.В., Инчина В.И., Семенова Е.В., Семенов А.В., Исаак И.Н. Возможности коррекции гибридными антиоксидантами морфофункциональных изменений при токсическом повреждении печени // Морфологические ведомости. 2007. Т.1, №1-2. С. 232-236.
