30 марта 2016г.
С целью создания эффективных лекарственных средств широкого спектра действия использованы биологически активные вещества (БАВ), продуцируемые медицинскими пиявками Hirudo medicinalis. Лекарственной субстанцией может служить экстракт пиявок (Гирулюкс), содержащий полный комплекс БАВ: гирудин, дестабилаза, ингибитор калликреина плазмы крови, простагландины подобные простациклину (PGI2), холестерин-эстераза, триглицеридэстераза, гиалуронидаза, ингибиторы трипсина, плазмина, химотрипсина, эластазы, катепсина G, аналгетики и др. [2].
БАВ препятствуют тромбообразованию, стимулируют фибринолиз, нормализуют реологические свойства крови, активно вмешиваются в иммунную систему, регулируют процессы белкового синтеза и обмена липидов, защищают ДНК от патологического воздействия мутагенов, вызывают регресс атеросклероза [4]. Мощный ингибиторный потенциал слюны пиявок по отношению к протеолитическим ферментам обеспечивает противовоспалительное действие [3], обусловленное наличием в его составе бделлинов и эглинов - ингибиторов трипсина, химотрипсина, плазмина, акрозина, катепсина G и других нейтральных протеаз гранулоцитов [1].
Учитывая богатейший спектр фармакологической активности препарата Гирулюкс [4], в настоящее время на основе этой лекарственной субстанции разрабатываются лекарственные препараты различных способов применения. Поэтому представлялось важным проанализировать возможность его влияния на психо- эмоциональное состояние с целью коррекции способа применения лекарственного средства.
Материалы и методы
Лекарственную субстанцию Гирулюкс получали из цельных стандартизированных по возрасту, весу и срокам голодания пиявок Hirudo medicinalis, выращенных на биофабрике ЗАО «Международный Центр Медицинской ПИЯВКИ» в искусственно созданных условиях.
Эксперименты проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 220-250 г (n=45). Животным перорально вводили исследуемый препарат в дозах 50 мг/кг и 150 мг/кг. Контрольная группа животных получала равный объем 0,85% раствора NaCl.
Для изучения влияния препарата Гирулюкс на психо-эмоциональное состояние животных использованы стандартные тесты [5, 6]:
1 - «Открытое поле» представляет собой арену диаметром 80 см, разделенную на 19 секторов, в местах пересечения которых находятся отверстия. Арена окружена стенкой высотой 40 см. Над ареной на высоте 80 см помещена красная лампа мощностью 15 Вт. Опыты проводились в «бесстрессорной» модификации (в тишине, при свете красной лампы, в течение 2-х мин). Животное помещали в центр арены и визуально оценивали показатели поведения.
2 - «Темно-светлая камера» - экспериментальная камера (48х24х40 см), разделенная на два равных отсека перегородкой с отверстием. Крысу помещали в освещенный отсек и регистрировали латентный период перехода в темный отсек камеры; время, проведенное в светлом отсеке; суммарное время, проведенное в светлом отсеке и количество выходов в светлый отсек; количество стоек и груминга; количество заглядываний в темный отсек за 3 мин тестирования.
3 - «Условная реакция пассивного избегания» - обучение проводилось в экспериментальной камере (размер 30х22х35 см), разделенной перегородкой с отверстием на два отсека. В 1-ый день эксперимента животное помещали в освещенный отсек камеры и регистрировали латентный период перехода в темный отсек, в котором крысу подвергали неизбегаемому удару электрическим током длительностью 3 сек. Через 72 часа проводили проверку выработки навыка пассивного избегания болевого раздражителя.
4 - «Т-образный лабиринт» с пищевым подкреплением – в Т-образном лабиринте - размер рукавов лабиринта 30х10 см; размер стартовой камеры 20х10 см. В первый день эксперимента крыс помещали в лабиринт на 20 минут для угашения ориентировочно-исследовательской реакции. В последующие 4 дня проводилось обучение: каждое животное помещали в стартовую камеру лабиринта 5 раз подряд каждый день.
Визуально оценивали следующие показатели: латентный период; время реакции; число ошибок; количество выполненных реакций.
Статистическую обработку данных проводили с помощью Statistica for Windows 6.0 (StatSoft Inc.). Поскольку сравниваемые выборки удовлетворяли условиям нормальности распределения (использовали критерий Колмогорова-Смирнова) и равенства генеральных дисперсий, при установлении значимости различий данных, полученных от контрольных и экспериментальных животных, применяли t-критерий Стьюдента. Также использовали дисперсионный анализ (ANOVA).
Результаты
Перед началом введения препарата все животные проходили тест «Открытое поле» для исключения исходных различий в исследуемых группах. Экспериментальные животные были рандомизированы на 3 группы: крысам 1 группы (n=15) перорально вводили суспензию Гирулюкс в дозе 50 мг/кг, крысам 2 группы (n=15) - 150 мг/кг, крысам контрольной 3 группы (n=15) равный объем 0,85% р-ра NaCl.
В процессе введения препарата Гирулюкс, животных подвергали следующим тестам: на 8-й день введения - тесты «Темно-светлая камера» и «Условная реакция пассивного избегания»; на 11-й день - тест «Условная реакция пассивного избегания» (для проверки выученности животных); на 28-й день введения - тест «Т-образный лабиринт» с положительным подкреплением. Результаты проведенных экспериментов представлены на Рисунках 1, 2 из которых видно, что препарат Гирулюкс не оказывает выраженного нейротропного эффекта на интактных крысах в примененных тестах.
Полученный результат свидетельствует об отсутствии у препарата Гирулюкс активирующего, возбуждающего эффекта.
Выводы
Применение препарата Гирулюкс не оказывает негативного влияния на двигательную активность и обучение животных, а так же на их психо-эмоциональное состояние, что говорит о возможности длительного его применения, а также возможности курсового
лечения пациентов, занимающихся потенциально опасными видами деятельности, требующими повышенной концентрации внимания и быстроты психомоторных реакций.
Список литературы
1.
Геращенко Л., Никонов Г. Вам поможет медицинская пиявка: энциклопедия гирудотерапии: лечение без лекарств. Москва, АСТ астрель, Транзиткнига, 2005, 334 стр.
2.
Лебедева А.О., Митрохин Н.М., Никонов Г.И. Противоотечное и противовоспалительное действия лекарственной субстанции гирулюкс в экспериментах на животных. Разработка и регистрация лекарственных средств, 2014, 1 (6), 58-60
3.
Никонов Г.И. Биологически активные вещества, продуцируемые медицинскими пиявками, и механизмы их действия. Асклепейон, 1-4, 1998, 29-41
4.
Никонов Г.И. Гирудотерапия: история и современное состояние. В кн.: Гирудотерапия (Ред. Савинов В.А.), Москва, Медицина, 2004, 14-15
5. Cozby P.C. Methods in Behavioral Research. McGraw-Hill, 2006
6.
Methods of Behavior
Analysis in Neuroscience, 2nd edition. Edited by Jerry J Buccafusco. Boca Raton (FL): CRC Press; 2009
