ЗНАЧИМОСТЬ ИММУНОЦИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ КАТАРАЛЬНЫМ ГИНГИВИТОМ

Хронический катаральный гингивит (ХКГ) характеризуется наличием клинических признаков воспаления в десне и сохранностью зубодесневого прикрепления [2,7]. Известно, что воспалительный процесс чаще вызывается не монокультурой, а микстовыми формами, находящимися в условиях микробных ассоциаций (биопленки) при снижении местных или общих факторов естественного или адаптивного иммунитета, и риск прогрессирования заболевания становится значительно выше при комбинации нескольких видов микроорганизмов [4,6,9]. Исследования количественного или качественного состава микрофлоры биопленок, состояния локальных факторов защиты пародонта возможны при применении объективных и информативных методов исследования – иммунологических, патоморфологических (микробиологических, гистологических, цитологических) [3,5]. Использование цитологических методов (иммуноцитограмм) малочисленны, в то же время они необходимы для уточнения этиопатогенеза и особенностей воспалительных процессов в ротовой полости, разработки объективных критериев и экспресс методов их выявления, назначения противовоспалительной и антибактериальной терапии, мониторинга за проводимым лечением, сокращения частоты обострений и поиска мер профилактики заболеваний пародонта [1].

Цель настоящего исследования заключается в оценке состояния локальных факторов защиты, состояния микробного пейзажа у больных хроническим катаральным гингивитом с использованием иммуноцитологического метода исследования.

Материалы и методы. Исследования проведены в ГБУЗ РБ Стоматологическая поликлиника №5 г. Уфа, у 75 больных хроническим катаральным гингивитом (ХКГ). Контрольную группу составили 20 практически здоровых лиц, не имевших жалоб и выраженной патологии тканей пародонта и слизистой оболочки полости рта. Диагноз заболевания хронический катаральный гингивит - К05.1 устанавливали в соответствии с нозологической международной классификацией стоматологических болезней (МКБ-С) на основе МКБ-10. Цитологические исследования проведены на кафедре лабораторной диагностики ИДПО ФГБОУ ВО «БГМУ Минздрава России». Для цитограмм биоматериал брали с поверхности зуба и окружающих его тканей через 3-5 часов после чистки зубов с помощью стерильной гладилки из кровоточащей или экссудатирующей зубодесневой борозды в наиболее воспаленном участке по 3-4 отпечатка из 4-6 зубов из каждого квадранта, фиксировали в метаноле и окрашивали по Паппенгейму. Цитологические препараты изучали под световым микроскопом при больших увеличениях с помощью окуляров 10х и объектива 90-100х. Подсчет клеток проводили в 2-х основных популяциях клеток (эпителиальной и соединительнотканной). При подсчете эпителиальных клеток в каждом поле зрения определяли их общее количество, подсчитывали клетки с явными признаками цитопатологии и выводили показатель каждого из ее типов по отношению к общему числу эпителиальных клеток (базофилия цитоплазмы, дистрофические изменения – вакуолизация цитоплазмы, деструкция ядра и т.д., «фагирующие» клетки). В 3-5 полях зрения подсчитывали абсолютное количество соединительнотканных клеток (лейкоциты, моноциты, лимфоциты, мононуклеары, сохранившие цитоплазму и голоядерные элементы, фибробласты, эндотелиоподобные клетки) и выводили средние показатели. На основании полученных данных составляли структуру обследованных больных с гингивитом по клеточному составу материала, полученного из зубо-десневого желобка. Состояние бактериальной микрофлоры оценивали в баллах: 1 балл– до 10 в поле зрения; 2 – балла – до 100 в поле зрения; 3 – балла – до 1000 в поле зрения; 4- балла – больше 1000 в одном поле зрения [5]. На основании полученных данных формировали показатели иммуноцитограмм больных с хроническим катаральным гингивитом. После проведенного исследования на каждого пациента оформляли бланк (карту) с результатами иммуноцитологического исследования и оформляли заключение о состоянии эпителия, микрофлоры, лейкоцитов, соединительной ткани, выраженность воспалительного процесса (деструкция). Статистическую обработку результатов проводили с использованием общепринятых стандартных методов. Определяли среднюю арифметическую (М), стандартную ошибку средней арифметической (SD), квадратичное отклонение. Оценку значимости различий показателей проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05 (8).

Результаты исследования и их обсуждение. По результатам наших исследований установлено, что среди 75 обследованных больных с ХКГ, из них 29 мужчин (средний возраст 24,7±1,9 лет) и 46 женщин (27,1±1,8лет). В контрольной группе обследовано 9 мужчин, средний возраст которых составил 22,1±0,8 лет и 11 женщин (22,6±0,8 лет).

По полученным нами данным, в контрольной группе у практически здоровых лиц в цитологических препаратах обнаруживалось незначительное количество ядросодержащих единичных клеток плоского эпителия в 100% случаев, практически отсутствовали клетки десневого эпителия (табл.1). У здоровых лиц происходила десквамация клеток с признаками ороговения и деструкции (разрушенные и голоядерные), неизмененные клетки поверхностного слоя эпителия в препаратах отсутствовали в 100% случаев, выявлялись в малом количестве элементы промежуточного и глубоких слоев плоского эпителия, встречались   единичные   клетки   с   признаками пролиферации,   отсутствовали  клетки эпителиоцитов, проявлявших функциональную активность (фагоцитоз).

Таблица 1

 Характеристика состояния эпителия десны по данным иммуноцитограмм у больных хроническим катаральным гингивитом (М±SD)

Примечание: *различие с контролем статистически значимо (р <0,05).

В норме у здоровых лиц выявлялось до 10 сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов в 1 поле зрения с сохранившимся или пикнотическим ядрами, светлой цитоплазмой без признаков фагоцитоза, среди которых преобладали разрушенные, обнаруживались единичные лимфоциты (табл.2).

Таблица 2

 Характеристика лейкоцитов по данным иммуноцитограмм у больных хроническим катаральным гингивитом

Примечание: * различие с контролем статистически значимо (р <0,05).

Среди микроорганизмов в контрольной группе в препаратах преобладали кокки в 100% случаев, выявлялись также нитчатые, фузиформные бактерии и спирохеты в небольшом количестве (табл.3).

Таблица 3

 Состояние микрофлоры полости рта у больных хроническим катаральным гингивитом по данным иммуноцитограмм (М±SD)

Примечание: р - различие с контролем статистически значимо (р<0,05).

Исследования клеточного состава цитограмм у больных ХКГ показали увеличение в препаратах числа клеток плоского эпителия в одном поле зрения, по сравнению с контролем в 1,5 раза, что свидетельствовало об усиленной десквамации эпителия у больных гингивитом, при этом единичный эпителий обнаруживался в 36,5%, в виде пластов - в 40,5% случаев, отсутствовали клетки промежуточного слоя в 100% случаев. Общее количество ороговевших клеток (разрушенных и голоядерных) и поврежденных клеток незначительно понижалось, реже выявлялись эпителиальные клетки с признаками деструкции, что является отражением недостаточности защитной реакции эпителия. Эпителий при этом имел признаки дистрофии (маленькое эксцентрично расположенное ядро) и раздражения (вакуолизация, четкие контуры и базофилия цитоплазмы). При этом число лиц с нормальными неизмененными клетками поверхностного слоя эпителия увеличивалось в 3 раза, возрастало число клеток глубоких слоев и пролиферирующих клеток, сохранялась повышенная функциональная активность клеток эпителия. Эти данные отражают усиление десквамации нормальных зрелых и молодых клеток, что сопровождается усилением пролиферативных процессов. Появлялись «фагоцитирующие» и «вакуолизированные» эпителиальные клетки, что отражает повышение функциональной активности клеток и ослабление межклеточных контактов в тканях пародонта. Продукты распада клеток провоцировали усиленную миграцию лейкоцитов и макрофагов в эпителий десны.

Исследования лейкоцитарных клеток показали, что при ХКГ количество лейкоцитов в 1 поле зрения снижалось в 3 раза по сравнению с контролем, было также значительно снижено число разрушенных клеток, появлялись единичные моноциты, эозинофилы, макрофаги, тучные клетки, фагоцитирующие лейкоциты. Полученные данные подтверждают, что экзо- и эндотоксины микрофлоры биопленки вызывают нарушения локального гомеостаза, что стимулирует миграцию клеток хронического воспаления.

При хроническом катаральном гингивите в цитологических препаратах чаще выявлялись колонии микроорганизмов (у 47,4% лиц против 2,9% в контрольной группе). Процент лиц, у которых снижалось количество кокковой, нитчатой и фузиформной микрофлоры, составил 52,6; 33,7 и 5,5 против 85,7; 72,8 и 14,3% в контрольной группе, соответственно. Наряду с этим число лиц со смешанной микрофлорой составило 41,0%, против 42,3% в контроле, т.е. в препаратах у больных ХКГ чаще обнаруживалось несколько морфологических типа микроорганизмов. Исследования количественного и качественного состава микробной флоры показали понижение количества кокков в группах ХКГ почти в 2 раза, в сравнении с контрольной группой. Количество нитчатых микроорганизмов при этом возрастало в 2 раза. При гингивите увеличилось в 2,6 раза фузобактерий, появлялись дрожжеподобные грибы в 2,6%, спорообразующие — в 2,6%, уменьшалось число извитых форм. Эти данные согласуются с литературными и отражают динамику развития воспаления: при гингивите микрофлора ротовой полости становится более разнообразной, чем в норме, число бактерий возрастает в 10-20 раз, они формируют колонии, чаще выявляется микст-инфекция, а не монокультура. Микрофлора различается в десне разных зубов как у одного, так и у разных больных, что придает особую значимость цитологическим исследованиям. Выявление в препаратах разных морфотипов и ассоциаций микроорганизмов, оценка их количества, формирование колоний вместе с данными иммуноцитограмм о состоянии эпителия и выраженности воспалительной реакции позволяет провести подбор адекватной противовоспалительной терапии, при необходимости сопутствующей иммунокорригирующей терапии, что необходимо для повышения эффективности лечения больных с хроническим катаральным гингивитом.

При воспалительных процессах у больных ХКГ в цитологических препаратах по составу клеток соединительной ткани отмечается увеличение количества эритроцитов в 1 поле зрения в 18 раз, что отражает расстройство микроциркуляции и повышение сосудисто-тканевой проницаемости. Полученные результаты соответствуют клинико-инструментальным данным и являются проявлением снижения антикоагулянтной активности эндотелия сосудов и нарушением тромборезистентности сосудистой стенки. При этом в препаратах из десны снижалось количество фибробластов в 2,8 раза и нитей коллагена в 2,7 раза в сравнении с контрольной группой, что отражает нарушение процессов регенеративной репарации.

Таким образом, при воспалительных процессах у больных ХКГ в препаратах отмечаются разнообразные изменения, отражающие степень десквамации плоского эпителия, его пролиферативную и функциональную активность, состояние микрофлоры на фоне выраженного роста патогенных и условно- патогенных микроорганизмов при снижении содержания представителей нормальной флоры и активности факторов естественной резистентности. На основании полученных данных возможно уточнение этиологического фактора, клинического диагноза, проведение динамического мониторинга эффективности лечения и прогнозирование отдаленных результатов, определие мер профилактики, что способствует повышению качества оказания пародонтологической помощи. В целом, проведенные исследования показали, что цитограмма биоматериала, полученного из зубодесневой борозды у больных с гингивитом, является высокоинформативным, чувствительным и интегральным показателем состояния эпителия, микробной флоры и местных факторов защиты ротовой полости, что позволяет рекомендовать ее использование в пародонтологии. Распространенность заболеваний пародонта (гингивит, пародонтит) особенно у лиц молодого трудоспособного возраста остается на высоком уровне, не имеет тенденции к снижению, поэтому морфологические исследования в пародонтологии приобретают особую значимость, если анализируются в сопоставлении со всеми данными клиники и во всем их объеме, имеющей научно- практическое и социально-экономическое значение.

Список литературы

1 Булгакова А.И, Васильева Н.А., Андреева Ю.В. Исследование показателей иммуноцитограмм у больных с воспалительными заболеваниями пародонта // Пародонтология.- 2012. -No 3 (64).- С. 22-26.

1.   Григорьян А.С., Грудянов А.И., Рабухина Н.А., Фролова О.А. Болезни пародонта. – М.: МИА, 2004.- 320с.

 2.   Грудянов А.И. Количественная оценка микробиоценозов полости рта при заболеваниях пародонта/А.И. Грудянов [и др.] // Пародонтология. - 2011. - No 2 (59). - C. 19 — 22.

 3.    Зеленова Е.Г., Заславская М.И., Салина Е.В., Рассанов С.П. Микрофлора полости рта: норма и патология. - Н.Новгород: НГМА, 2004. -158с.

4. Имельбаева Э.А., Васильева Н.А., Гильманов А.Ж., Мавзютов А.Р. Цитологический метод оценки состояния пародонта.Уфа: БГМУ, 2008.-38с.

6. Имельбаева Э.А., Васильева Н.А. Состояние локальных факторов защиты у больных хроническим генерализованным пародонтитом // РАЖ, Органоиммунология и иммунокоррекция. - 2007. -№3. - С. 208.

7. Орехова Л.Ю. Проблемы стоматологического здоровья у лиц молодого возраста (обзор литературы) / Л.Ю. Орехова [и др.]. // Пародонтология. - 2014. - No 2 (71). - С. 3 — 5.

 8.    Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы/ М.: Изд-во РАМН, 2000.–52с.

9.    Socransky S.S. Microbiology of periodontal disease-present status progressive        periodontitis / S.S. Socransky // J. Periodontol. - 2001. - Vol. 72.- P. 275-283.