РОЛЬ АНТИТЕЛ К КСАНТИНОКСИДАЗЕ В ДИАГНОСТИКЕ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКИ С ЛАБОРАТОРНЫМИ ПРИЗНАКАМИ АНТИФОСФОЛИПИДНОГО СИНДРОМА

Системная красная волчанка (СКВ) на протяжении многих лет находится в центре внимания как клинической, так и теоретической медицины. Создание и разработка диагностических критериев СКВ значительно улучшило диагностику данного заболевания. Однако, несмотря на достигнутые успехи, задача своевременной постановки диагноза и назначения адекватной терапии часто бывает осложнена вариабельностью клинической картины и полиморфизмом проявлений СКВ.

В сыворотке крови больных СКВ часто обнаруживаются различные аутоантитела, в том числе и к ферментам, но как клиническое, так и диагностическое значение таких антител часто не определено. Наряду с этим у больных СКВ наблюдаются существенные изменения активности ферментов различных метаболических путей (антиоксидантной системы, пуринового метаболизма и др.) в сыворотке крови, которые коррелируют со степенью активности патологического процесса. Можно предположить, что изменение энзиматической активности отдельных ферментов при СКВ может быть в определенной степени связано и с усилением образования аутоантител к данным энзимам.

Целью работы явилось изучение процессов антителогенеза к ксантиноксидазе (ЕС 1.1.3.22) и разработка дополнительных критериев лабораторной диагностики у больных СКВ с признаками антифосфолипидного синдрома (АФС) с помощью антигенных наносистем на основе данного фермента.

Материалы и методы.

В исследование были включены 30 здоровых лиц и 60 пациентов с СКВ (55 женщин и 5 мужчин в возрасте от 22 до 68 лет) с различными клиническими проявлениями (см. Табл.1).

Таблица 1  

Исходные клинические показатели больных СКВ

Примечание: М – среднее значение, SD – стандартное отклонение, ДИ – доверительные интервалы, Ме –медиана, IQR – межквартильный размах.

Антитела к ксантиноксидазе (анти-КО) определяли в разработанной нами методике непрямого ELISA- теста с использованием иммобилизированной формы фермента в качестве антигенной матрицы. Иммобилизация КО происходила в поверхностном слое двойной полиакриламидной гранулы (антигенной наносистемы, АНС), что дало возможность создать высокую концентрацию антигена (КО) именно в реакционно-активной зоне и повысить чувствительность иммуноферментного анализа (ИФА) [2]. b2-гликопротеин-I-зависимые антитела к фосфолипидам (аФЛ) класса IgG и IgМ определяли с использованием коммерческого тест-набора «Anti- Phospholipid Screen IgG/IgM» (Orgentec Diagnostica GmbH). В группе здоровых лиц уровень аФЛ IgG/IgМ не превышал 10 GPL/MPL-U/ml.

Результаты исследования.

Было проведено предварительное изучение содержания анти-КО в сыворотке 30 практически здоровых людей (средняя концентрация составила 0,032±0,004 Ед, SD 0,022). Исходя из полученных данных при определении анти-КО в сыворотке крови пациентов значение оптической плотности равное 0,097 Ед (M±3s) в ELISA-тесте с использованием АНС было принято за верхнюю границу нормы (показатели, превышающие эти значения, считались положительными)

Дескриптивные статистики исходных показателей уровня анти-КО у больных с достоверным диагнозом СКВ [4] представлены в Табл.2.

Таблица 2

 Содержание антител к ксантиноксидазе у больных СКВ

При поступлении на лечение у больных СКВ по сравнению со здоровыми лицами было обнаружено увеличение содержания анти-КО (М(SD): 0,131 (0,083) против 0,032 (0,022), p<0,001; дисперсионный анализ в варианте с неравными дисперсиями). Количество больных СКВ с повышенным уровнем анти-КО составило 53,3% (32 человека). Повышенный уровень анти-КО не был выявлен (методом ИФА) ни у одного обследованного в контрольной группе (здоровые лица).

Сравнение между собой групп больных СКВ, позитивных (n=32) и негативных (n=28) по наличию анти- КО, продемонстрировало статистически достоверное увеличение частоты выявления признаков поражения почек (28,3% против 11,7%, c2=4,6, р=0,032) и РЭС (36,7% против 16,7%, c2=5,3, р=0,021), также была отмечена большая доля больных с поражением сосудов среди пациентов с наличием анти-КО (15,0% против 3,3%, c2=4,4, р=0,042).

Поражение сосудов достаточно часто встречалось в исследуемой группе больных СКВ и имело место у 11 (18,3%) пациентов (были объеденены клинические проявления, характерные как для васкулита, так и для невоспалительного поражения сосудов – тромбозы сосудов мелкого и среднего калибра, некротизирующие поражения кожных покровов, сетчатое ливедо). У значительной части больных эти проявления имели место в рамках вторичного антифосфолипидного синдрома при СКВ (n=9).

Антитела к фосфолипидам классов IgG/IgМ в значениях выше 50 GPL/MPL-U/ml были выявлены у 8 (13,3%) больных СКВ. Было отмечено, что у 6 пациентов с наличием высоких значений аФЛ класса IgG также были определены повышенные значения анти-КО (р<0,001). Не было выявлено статистически значимых различий в содержании аФЛ класса IgМ у больных СКВ в зависимости от наличия анти-КО (р>0,05). Повышенные уровни анти-КО выявлены у 11 из 18 женщин с СКВ и ПНБ в анамнезе, причем чаще обнаруживалось сочетание анти-КО и аФЛ в значениях выше 25 GPL/MPL-U/ml (9/18), чем изолированное определение анти-КО (3/18, c2 =4,52; р<0,05).

Несмотря на то, что механизмы связи анти-КО с сосудистой патологией до конца не ясны, достоверно более высокие уровень содержания и частота обнаружения анти-КО у больных СКВ с поражением сосудов позволяют обсуждать не только диагностическое, но и патогенетическое значение данных антител. По-видимому, одним из факторов, приводящих к развитию сосудистой патологии при наличии анти-КО, может являться накопление активных форм кислорода, оказывающих повреждающее действие на липиды, белки и другие компоненты сосудистой стенки [3].

С другой стороны следует отметить, что высокая ферментативная  активность КО, часто отмечаемая в сыворотке крови больных СКВ, также может являться причиной повреждения тканей, так как помимо антиоксидантных свойств (D-форма фермента), данный фермент обладает и прооксидантными свойствами (О- форма фермента), особенно в отношении липидов. Изменение функциональной активности КО у больных СКВ в свою очередь может быть связано и с аутоиммунными нарушениями, когда под воздействием специфических антител происходит усиление процессов трансформации D-формы фермента в О-форму [1], что в итоге ведет к существенному увеличению генерации супероксидных радикалов, оказывающих повреждающее действие на липиды, белки и другие компоненты клетки, в результате чего они приобретают свойства аутоантигенов и стимулируют выработку различных антител, имеющих вторичное повреждающее действие.

Таким образом, при СКВ имеет место образование антител к КО, одному из основных ферментов пуринового метаболизма. Изучение клинических корреляций анти-КО позволяет улучшить диагностические подходы и детализировать роль данных антител в повреждении органов и систем при СКВ, что, в свою очередь, позволит глубже понять патогенетические механизмы метаболических и иммунологических нарушений  при данном заболевании.

Список литературы

1.     Александров А.В., Мнацаканян С.Г., Алехина И.Ю., Махачев М.А., Шилова Л.Н., Зборовская И.А. Определение антител к ксантиноксидазе в диагностике ревматоидного артрита // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. 2008, №2. – С.41-44.

2.     Гонтарь И.П., Сычева Г.Ф., Александров А.В., Шилова Л.Н., Симакова Е.С., Емельянов Н.Н., Матасова Н.Н., Маслакова Л.А., Зборовский А.Б. Эмульсионная полимеризация как метод, модифицирующий ферменты с сохранением биологических свойств их наноструктур // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2010, Том 150, №12. – С. 715-719.

3.     Зборовская   И.А.   Ревматические  болезни и   антиоксидантная   система.  –  М.: ОАО  «Издательство «Медицина», 2007. – 128 с.

4.     Hochberg M.C. Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus // Arthritis Rheum. 1997; 40(9): 1725-9.