11 января 2016г.
В настоящее время препараты группы сартанов очень широко применяются для лечения больных с любыми формами гипертонии. Они блокируют ангиотензиновые рецепторы АТ1 и благодаря этому препятствуют развитию эффектов ангиотензина, приводящих к повышению артериального давления (АД): вазоконстрикция, задержка соли и воды и пролиферативные процессы в стенках сердца и сосудов. Если ме ханизмы взаимодейс твия сартанов с ренин-ангиотензин-альдостероновой системой (РААС) достаточно понятны, то их отношения с гипотензивной системой натрийуретических пептидов остаются не изученными. Основным источником натрийуретических пептидов в организме являются миоциты предсердий, которые синтезируют, накапливают и секретируют пептиды в ответ на растяжение стенки избыточным давлением или объемом крови. Задачей да нного исследования было изучить влияние стойкого снижения АД у крыс-гипертоников под действием лозартана на строение правого предсердия и секреторную активность миоэндо кринных клеток.
Материал и методика
Линия крыс НИСАГ с наследственной индуцированной стрессом артериальной гипертензией как модель эссенциальной гипертонии была получена в Институте цитологии и генетики СО РА Н путем селекции на основе аутбредной линии Вистар [1]. В экспериментальной группе пять самцов в возрасте 6 мес. получали ежедневно в 9 час утра антагонист рецепторов ангиотензина II (AT1-подтип) лозартан (Losartan, Козаар, 50 мг, Мерк Шарп и Доум Б.В., Нидерланды) в дозе 10 мг/кг в виде водного раствора через зонд в желудок в течение 16 дней. Пять одновозрастных животных в группе плацебо получали воду в тех же условиях и объеме. До начала эксперимента, на 10-й и на 16-й дни эксперимента измеряли артериальное давление сфигмографическим методом на хвосте . На 17-й день крыс выводили из эксперимента гильотинированием под эфирным наркозом согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животны х». Одновозрастные кр ысы-самцы линии ВАГ (WAG) служили нормотензивным контролем.
Для морфологического исследования ушко правого предсердия фиксировали в растворе 2,5 % глутарового альдегида и 1 % параформа, дофиксировали в 1,5 % растворе OsO4, заливали в смесь эпона с аралдитом. На полутонких поперечных срезах миокарда, окрашенных толуидиновым синим, с помощью открытой квадратной тестовой решетки с шагом 10 мкм определяли относительные объемы кардиомиоцитов, соединительной ткани и отдельно просветов капилляров в миокарде, подсчитывали численную плотность капилляров на единицу площади среза и вычисляли паренхимо -стромальное отношение. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца, просматривали в электронном микроскопе JEM -1400 (Япония). С помощью квадратной тестовой решетки с шагом 1 мкм при увеличении ×10000 определяли относительные объемы органоидов в цитоплазме кардиомиоцитов, подсчитывали численную плотность секреторных гранул и измеряли их диаметр. Статистическую обработку вариационных рядов проводили в пакете Statistica 6.0. Результаты представлены в виде среднего и ошибки среднего (M±m). Достоверность различий с контролем определяли t критерием Стьюдента для p<0,05.
Результаты исследования и обсуждение
В эксперимент были взяты взрослые крысы самцы линии НИСАГ весом 350±7,3 г и систолическим АД 174±1,3 мм рт. ст. У крыс, получавших лозартан, уже на 10-е сутки лечения АД было достоверно снижено до 146±5,2 мм рт. ст., или на 16,5% по сравнению с группой, получавшей воду. Еще через неделю, в конце эксперимента межгрупповая разница составляла 36 мм рт. ст. или 20% (142±4,2 и 178±2,6 мм рт. ст., соответственно в экспериментальной группе и группе «плацебо»). Гипотензивный эффект сартана был ожидаемым, он неоднократно описан и в других экспериментальных моделях гипертонии [5, 6]. Достоверных различий в массе тела, абсолютной и относительной массе сердца (масса сердца/масса тела) между группами не обнаружено.
Ультраструктурное исследование правого предсердия показало, что относительные объемы миофибрилл и мито хондрий в цитоплазме клеток обеих групп не различались, при этом степень развития секреторного аппарата в них оказалась принципиально разной. В миоэндокринных клетках крыс, леченых лозартаном, обнар уживались признаки резкого угнетения секреторной активности: относительный объем пластинчатых комплексов был уменьшен в три раза (0,7±0,11 и 2,2±0,23%, соответственно), а секреторных гранул – на 30% по сравнению с аналогичными показателями в группе «плацебо» (4,5±0,48 и 6,4±0,57%, соответственно). Редукция совокупного запаса секреторного продукта в клетках крыс опытной группы была обусловлена как уменьшением численной плотности гранул почти на 40% (557±45 и 337±28 на 1000 мкм 2), так и их меньшим диаметром (223±3,6 и 297±6,5 нм, соответственно).
Не только количественные показатели, но и качественный состав секреторных гранул претерпевал существенные изменения во время лечения лозартаном. Традиционно для оценки эндокринной активности миоцитов предсердий мы выделяли три морфологические разновидности гранул, условно соотносящиеся с фазами секреторного процесса: формирующиеся, зрелые и растворяющиеся формы [2]. Подсчитано, что в миоэндокринных клетках у крыс группы «плацебо» около половины гранул – зрелые, содержащие запас пептидов. Формирующихся и растворяющихся гранул в саркоплазме клеток приблизительно поровну, что свидетельствует о достаточно сбалансированном процессе секреции. У животны х, получавших лозартан, в мышечных клетках предсердия в зоне редуцированного комплекса Гольджи формирующиеся гранулы вообще отсутствовали, а зрелые формы составляли менее 10% всего запаса в цитоплазме. Почти все гранулы имели признаки разных стадий деградации, причем большинство можно было отнести к типичным растворяющимся формам с размытыми контурами без ограничительной мембраны и зернистой сердцевиной сниженной электронной плотности. Однако около четверти гранулярного пула пришлось условно обозначить как «рудиментарные» формы. Это мелкие (менее 200 нм в диаметре) тельца без ограничительной мембраны с очень уплотненным негомогенным содержимым неопределенной формы. В группе «плацебо» они встречались в 10 раз реже. Кроме того, в составе фагосом можно было различить слившиеся гранулы, что по хоже на активную внутриклеточную утилизацию секреторного продукта по типу кринофагии. Их совокупный относительный объем достигал почти 1%, в то время как в группе плацебо они были единичные и встречались далеко не во всех клетках. Приведенные данные свидетельствуют о том, что у крыс-гипертоников после введения лозартана и стабильного снижения АД эндокринная активность предсердных миоцитов тормозится. Имеются отдельные указания [3, 5, 8], что у больных с гипертонией и у крыс при экспериментальных гипертензиях после лечения лозартаном концентрация натрийуретических пептидов в крови снижалась, однако другие исследователи [4, 7] подобного эффекта не обнаружили.
Нормализация АД на фоне введения лозартана у гипертензивных крыс НИСАГ сопровождалась не только субклеточными, но и тканевыми перестройками. Число открытых капилляров на единицу площади среза оказалось выше в полтора раза (146±14,5 и 208±10 профилей на 0,1 мм 2), а их объемная плотность увеличилась более чем вдвое (3,26±0,49 и 7,8±0,77%, соответственно). Увеличение диаметра кардиомиоцитов с 7,9±0,26 до 9,4±0,25 мкм и площади сечения их ядер с 12,4±0,81 до 9,1±1,12 мкм 2 по сравнению с группой, получавшей плацебо, дают основания полагать, что в условиях эксперимента с лозартаном кардиомиоциты подвергаются отеку. Однако существенный сдвиг паренхимо-с тромальных отношений в пользу стромы (3,4±0,23 в группе плацебо и 2,5±0,21 после лечения) свидетельствует о задержке жидкости преимущественно в межклеточном пространстве.
Можно заключить, что у крыс НИСАГ на фоне высокого давления и гиперсекреции сердечных пептидов миоэндокринные клетки со храняю т способность адекватно реагировать на изменения гемодинамики и соответствующие специфические стимулы. Это свидетельствует об участии сердечных натрийуретич еских пептидов в регуляции водно-солевого баланса не только в норме, но и на фоне гипертензии. Введение лозартана гипертензивным крысам сопровождается полнокровием и отеком миокарда правого предсердия. Широкое применение сартранов для достижения и поддержания целевого АД у гипертоников требует уточнения их взаимодействия с сердечными натрийуретическими пептидами.
Список литературы
1. Маркель А.Л. 1985. Генетическая модель индуцированной стрессом артериальной гипертензии. Изв. АН СССР. Сер. биол. 3 : 466-469.
2. Коростышевская И.М., Максимов В.Ф., Курганов С.А. 2013. Ультраструктурная оценка секреторной
активности миоэндокринных клеток сердца. Цитология. 55. (8): 539-547.
3. Araujo I.G., Elias L.L., Antunes-Rodrigues J. et al. 2013. Effects of acute and subchronic AT1 receptor blockade on cardiovascular, hydromineral and neuroendocrine responses in female rats. Physiol Behav. 122:104-112.
4. Christoffersen T.E., Aplin M., Strom C.C. et al. 2006. Increased natriuretic peptide receptor A and C gene e xpression in rats with pressure-overload cardiac hypertrophy. Am J Physiol.Heart Circ Physiol. 290(4): H1635- H1641.
5. Koprdova R., Cebova M., Kristek F. 2009. Long-term effect of losartan administration on blood pressure, heart and structure of coronary artery of young spontaneously hypertensive rats. Physiol Res. 58(3): 327-335.
6. Moubarak M., Jabbour H., Smayra V. et al., 2012. Cardiorenal syndrome in hypertensive rats: microalbuminuria,
inflammation and ventricular hypertrophy. Physiol Res. 61(1): 13-24.
7. Oh Y.B., Gao S., Shah A. et al. 2011. Endogenous angiotensin II suppresses stretch -induced ANP secretion via AT1 receptor pathway. Peptides. 32(2): 374-381.
8. Shiga Y., Miura S., Mitsutake R. et al. 2012. Effect of fixed-dose losartan/hydrochlorothiazide on brain natriuretic peptide in patients with hypertension. J Renin Angiotensin Aldosterone Syst. 13(1): 107-112.
