ИССЛЕДОВАНИЕ КАРОТИНОИДНОГО СОСТАВА ПЛОДОВ И МАСЛА ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ

Анализ литературных источников свидетельствует об уникальном комплексе биологически активных веществ, содержащихся в плодах и масле растения рода Hippophaës, среди которых важную роль занимают каротиноиды, в частности β-каротин. Особенно ценится облепиховое масло, контроль качества и стандартизация которого имеют первостепенное значение. Данные о каротиноидном составе плодов и масла облепихи в литературе носят противоречивый характер, хотя их стандартизация проводится по содержанию этих важнейших компонентов. Пересчет каротиноидов плодов и масла на β-каротин [3], важность и значимость которого в витаминных и других препаратах неоспорима, сомнителен лишь потому, что он имеет смысл только при преобладании этого соединения в сумме каротиноидов. По данным ряда работ, облепиха крушиновидная является одним из важнейших источников не только каротинов (α-, β-каротины, ликопин), но и ксантофиллов (зеаксантин, лютеолин) в отличие от β-каротина, не обладающих провитаминной (А) активностью, но необходимых для предупреждения возрастной дегенерации макулы [2]. Следовательно, общая стандартизация масла и плодов облепихи по каротиноидам невозможна без разделения их на группы по типу биосинтеза каротиноидов в плодах. Кроме того, β-каротин, как и иные каротиноиды, имеет существенный недостаток – его молекула нестабильна и подвергается разложению под действием многих факторов, в первую очередь кислорода воздуха, с которым постоянно контактирует сырье при его технологической обработке, а также облучения УФ- света [2-4]. Поэтому исследования по разработке методик разделения и определения каротиноидов в растительных объектах, а также полученных на их основе жирных маслах и масляных экстрактов фармацевтического назначения, являются особенно актуальными.
Для разделения и идентификации сложных соединений, таких как каротиноиды, значительное внимание уделяется методу тонкослойной хроматографии (ТСХ). Преимущества этого метода (экспрессность, простота, доступность, возможность препаративного разделения и малое количество анализируемого вещества) делают его незаменимым при исследовании этого сложного класса веществ [1].
Цель работы - разработка методики разделения и определения каротиноидного состава масла и плодов облепихи крушиновидной методом хроматографии в тонком слое сорбента.
Объектами исследования являлись свежие плоды дикорастущего растения рода Hippophaës, собранные в Воронежской области согласно правилам заготовки лекарственного растительного сырья, и облепиховое масло отечественного производителя, соответствующее требованиям нормативной документации.
С целью идентификации в плодах и масле основного каротиноида - β-каротина, был проведен ТСХ-анализ:
1) Растворов масла в хлороформе в соотношении масло – растворитель (1:2);
2) Свежевыжатого сока плодов облепихи крушиновидной;
3) Хлороформенных вытяжек из свежих измельченных плодов, полученных методом простой экстракции в соотношении масло – экстрагент (1:3).
На хроматографическую пластинку (Рисунок 1) наносили 5 - 10 мкл хлороформенной вытяжки (точка 2, Рисунок 1), 3 - 5 мкл раствора масла в хлороформе в соотношении масло – растворитель (1:2) (точка 1, Рисунок 1), 10 мкл стандартного спиртового раствора β-каротина с содержанием 1 мг/мл (точка 4, Рисунок 1), 20 - 30 мкл сока свежих плодов (точка 3, Рисунок 1) и хроматографировали в системе растворителей гексан:н-пропанол:вода (10:1:0,2) восходящим способом. Вид полученной хроматограммы представленна Рисунке 1.
Как видно из Рисунка 1, состав каротиноидов плодов и масла одинаков. На хроматограммах обнаруживалось семь зон с характерной желто-оранжевой окраской в видимом свете. Были идентифицированы зоны β-каротина по значению величины Rf = 0,98 в сравнении с достоверным стандартным образцом.



Рис.1. Вид хроматограммыисследуемыхобъектоввсистемерастворителейгексан:н-пропанол:вода(10:1:0,2).

Полученные данные использованы для расчета основных параметров эффективности хроматографическогопроцессса в тонком слое сорбента, таких как величины (Rи Rs); коэффициент распределения (К); значение селективности сорбции (L) (Табл.1). На экспериментально определяемые значения Rfзаметно влияют условия хроматографирования. Для надежной идентификации каротиноидов необходимо проводить сравнение величин R f со стандартными образцами, что не всегда возможно ввиду высокой стоимости последних и лабильности веществ группы каротиноидов под действием факторов внешней среды. Более точной оценкой хроматографической подвижности, мало чувствительной к влиянию случайных отклонений в условиях проведения эксперимента, является величина Rs,представляющая собой отношение величины R f одного вещества к величине Rfдругого вещества, принятого за стандарт [2]. В Табл.1 представлены значения величин Rs для каротиноидов, выявленных на хроматограммах плодов и масла облепихи. В качестве стандарта был принят β- каротин (точка 4, Рисунок 1).
В использованной элюирующей системе наблюдается удовлетворительное разделение хроматографических зон каротиноидов, так как значение селективности сорбции больше единицы (Табл.1). Чем больше величина L, тем лучше будет разделение, так как зоны компонентов располагаются друг от друга на большом расстоянии.
                                                                                                                             Таблица 1

 Идентификация β-каротина и параметры хроматографического разделения каротиноидов в плодах и масле облепихи крушиновидной

Разработанная методика может быть включена в нормативную документацию в качестве способа экспресс- анализа состава каротиноидов и идентификации β-каротина в масле и плодах облепихи крушиновидной. Предложенная методика может найти применение для серийных анализов облепихового масла на предмет фальсификации и каротиноидного состава.

Список литературы

1. Тринеева О.В. Изучение хроматографических характеристик β-каротина в тонком слое сорбента / О.В. Тринеева, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Химико-фармацевтический журнал. - № 5. – 2012. - c. 52-54.
2. Чечета О.В. Методика определения каротиноидов методом хроматографии в тонком слое сорбента / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Сорбционные и хроматографические процессы. – 2008. - Вып. 2. – с. 320 – 326.
3. Чечета О.В. Стабильность каротиноидов в растительных маслах при хранении / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Фармация. –2008. - № 2. - с. 12 – 14.
4. Чечета О.В. Изучение каротиноидного состава растительных масел плодов облепихи и шиповника методом ТСХ / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Вопросы медицинской биологической и фармацевтической химии. – 2011. - № 2. - с. 3-6.