КОРРЕКЦИЯ ИММУНИТЕТА ПЕПТИДОМ Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu У КРЫС С КАЛОВЫМ ПЕРИТОНИТОМ

Острый гнойный перитонит одно из тяжелых осложнений различных заболеваний и повреждений органов брюшной полости [9]. Прогрессирующее развитие процесса в замкнутом пространстве, быстрый рост интоксикации, резко нарушенный метаболизм чрезвычайно осложняют задачу терапии данного заболевания. Если рассматривать гнойную инфекцию как результат сложного взаимоотношения макро- и микроорганизма, то ведущая роль в генезе и генерализации инфекции отводится состоянию защитных сил организма, в основном, иммунной системе [1, 21]. Бактериальная интоксикация и применяемые в процессе лечения антибиотики, снижая антигенное действие бактерий, препятствуют включению иммунозащитных механизмов больного в борьбу с инфекцией [3, 18]. Чаще перитонит возникает на фоне снижения реактивности организма связанное с сопутствующей патологий [6, 21, 25], а само развитие воспаления в брюшине приводит к еще большему угнетению иммунных сил организма. Различные патофизиологические механизмы при деструктивных процессах в брюшной полости оказывают влияние на свертывающую систему крови и приводят к возникновению тромбогеморрагического синдрома [4, 16, 20].

Цель исследования: изучить влияние синтетического пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на иммунитет и гемостаз при каловом перитоните у крыс.

Материал и методы исследования.

Пептиды выделяли из ткани сумки Фабрициуса цыплят и затем фракционировали с помощью гель- фильтрации и высокоэффективной жидкостной хроматографии. На каждом этапе полученные фракции тестировали на наличие иммуностимулирующей активности. Дальнейшая работа велась только с наиболее активными фракциями. В результате разделения нами был выделен пептид, обладающий по результатам скрининговых исследований иммуностимулирующей активностью, и установлена на газофазном секвенаторе его первичная структура: Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu. Исследование активности пептида проводили с использованием его синтетического аналога. Пептид синтезировали на твердой фазе с использованием Boc схемы, структуру синтезированного пептида подтверждали масс спектрометрическим анализом [13, 16].

Нами исследования проведены на 30 белых крысах. Для проведения экспериментов было получено одобрение этическим комитом ЧГМА. Опыты на животных проводились с соблюдением правил гуманного обращения с животными «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», приказ МЗ РФ от 23.08.2010 г. № 708н. У 20 животных воспроизводили модель калового перитонита. 10 из них ежедневно во время заболевания получали пептиды по 1 мкг/кг массы тела (опыт). Другим 10 крысам с каловым перитонитом инъецировали физ. раствор (контроль). Затем крыс усыпляли и определяли титр антител на эритроциты барана, АОК и показатели гемостаза. Полученные данные обработаны с помощью пакета статистических программ Statistica 6. Статистическую значимость различий оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение.

У животных в первые часы после введения каловой взвеси развивалась клиническая картина перитонита: адинамия, диарея и т.д. Установлено, чтоу крыс с гнойным перитонитом снижается титр антител на эритроциты барана и число антителообразующих клеток селезенки. Введение пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu достоверно стимулируют иммунный ответ у животных с перитонитом (таблица). В группе нелеченных животных развивалась выраженная гиперкоагуляция: сокращалось время свертывания крови, уменьшалось АЧТВ, ингибировался Хагеманзависимый фибринолиз и повышалось содержание фибриногена. Изучаемое соединение в значительной степени нормализует гемостаз у таких животных.

Таблица 1  

Показатели иммунитета и гемостаза.

p1 – достоверность различий показателей интактных крыс и контролем

p2 – достоверность различий показателей опытной и контрольной группами

Представленные данные свидетельствуют о том, что пептиды, обладая иммуномодулирующим действием, одновременно способствуют нормализации системы гемостаза, что подтверждает данные литературы [19, 23]. Это может быть объяснено восстановлением иммунологической регуляции физиологических функций [2, 3]. Вместе с тем, эти сведения убедительно говорят о том , что пептиды могут быть с успехом применены при заболеваниях, сопровождающихся вторичным иммуным дефицитом и ДВС-синдромом: шоки [11, 15], ОДН [14, 17], инфаркт миокарда [10], ожоги [7, 8], отморожения [24, 25], тяжелые интоксикации [5, 12, 22] и другие.

Список литературы

1.      Гаин Ю.М., Леонович С.И. Иммунный статус при перитоните и пути его патогенетической коррекции. – М.: Юнипресс, 2001. – 256 с.

2.      Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н. Единая клеточно-гуморальная защита организма // Тромбоз, гемостаз и реология. 2005. №2. С. 3-16.

3.      Кузник Б.И., Лиханов И.Д., Цепелев В.Л., Сизоненко В.А. Теоретические и клинические аспекты биорегулирующей терапии в хирургии и травматологии. Новосибирск : Наука, 2008. 311 с.

4.      Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии.ЧГМА, Чита, 2010. 828 с.

5.      Мельникова    С.Л.,     Степанов    А.В.     Лейкоцитарный    фибринолиз     у    онкологических     больных    // Фундаментальные исследования. 2013. №3-1. С. 117-120.

6.      Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Степанов А.В. Изменение микроциркуляции при дермальных ожогах // Фундаментальные исследования. 2015. № 1-9. С. 1893-1896.

7.      Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Степанов А.В. Клиническая эффективность магнитоплазменной терапии ожогов кожи // Забайкальский медицинский вестник. 2015. № 2. С. 99-102.

8.      Подойницына М.Г., Цепелев В.Л., Степанов А.В. Применение физических методов лечения ожогов кожи // Современные проблемы науки и образования. 2015. № 5; URL: www.science-education.ru/128-22156.

9.      Савельев В. С., Гельфанд Б. Р., Филимонов М. И. Перитонит : Практическое руководство. - М.: Литтерра, 2006. - 208 с.

10.   Степанов А.В. Острые нарушения функции кровообращения. Чита: ИИЦ ЧГМА, 2008. 36 с.

11.     Степанов А.В. Сердечно-легочная реанимация: учебное пособие. – Чита: ИИЦ ЧГМА, 2002. – 52 с.

12.   Степанов А.В., Любин А.В., Перепелицын Н.И., Тарасова О.А., Малежик М.С. Медицинская защита при радиационных и токсических поражениях. Чита : ИИЦ ЧГМА, 2011. 343 с.

13.   Степанов А.В.      Пептидные регуляторы из сумки Фабрициуса // Забайкальский медицинский вестник. 2004. № 4. С. 97-101.

14.   Степанов А.В. Острые нарушения функций дыхания. Чита : ИИЦ ЧГМА, 2008. 66 с.

15.   Степанов А.В. Интенсивная терапия шоковых состояний. Чита : ИИЦ ЧГМА, 2006. 24 с.

16.   Степанов А.В., Цепелев В.Л., Цепелев С.Л., Аюшиев О.Д. Пептидные регуляторы гуморального иммунитета. Чита: Поиск, 2002. 160 с.

17.   Степанов А.В. Острая дыхательная недостаточность. Чита : ИИЦ ЧГМА, 2008. 48 с.

18.   Степанов А.В., Цепелев В.Л., Мельникова С.Л. Иммуностимулятор из центрального органа гуморального иммунитета - сумки Фабрициуса // Сибирский медицинский журнал. 2013. № 2. С. 32-34.

19.   Степанов А.В., Цепелев С.Л., Цепелев В.Л. и др. Результаты исследования эффективности синтетического иммуностимулятора нового поколения // Фундаментальные исследования. 2012. №12 (1). С. 142-145.

20.   Степанов А.В., Краденов А.В. Лейкоцитарный фибринолиз в тромболитической терапии // Забайкальский медицинский вестник. 2015. № 1. С. 125-128.

21.   Степанов  А.В.  Механизмы  коррегирующего  действия  полипептидов  из  лимфоидной  ткани  при иммунодефицитных состояниях и воспалении: Автореф. дис. докт. мед. наук. Иркутск, 1995. 40 с.

22.   Степанов А.В., Лазарева И.Ю., Любин А.В., Перепелицын Н.И., Тарасова О.А. Токсикология и медицинская защита. Чита: ИИЦ ЧГМА, 2009. 134 с.

23.   Цепелев В.Л., Степанов А.В.       Влияние регуляторных пептидов на продукцию провоспалительных цитокинов // Забайкальский медицинский вестник. 2015. № 2. С. 147-150.

24.   Шаповалов К.Г., Бурдинский Е.Н., Степанов. А.В. Оптимизация компонентов регуляции сосудистого тонуса и состояния микроциркуляторного гемостаза на фоне продленной регионарной блокады при местной холодовой травме // Анестезиология и реаниматология. 2008. №3. С.20-21.

25.   Шаповалов К.Г., Михайличенко М.И., Степанов. А.В.       Нарушение функции эндотелия при холодовой травме // Актуальные вопросы интенсивной терапии. 2007. №22. С.53-57.