24 января 2016г.
Аннотация.
Проводили исследование активности диаминооксидазы и полиаминооксидазы в процессе превращения лимфоцитов в бласты при воздействии различных концентраций фитогемагглютинина в тесте «реакция бласттрансформации лимфоцитов». Степень агрегации клеток гепаринизированной венозной крови определяли по сдвигу минимума кривой поверхностного плазмонного резонанса в градусах. Соотношения между уровнем снижения агрегации клеток крови и активностью диаминооксидазы и полиаминооксидаза под воздействием различных разведений фитогемагглютинина подчѐркивает важную роль трансмембранного потенциала в пролиферативной активности лимфоцитов в процессах воспаления и при опухолевом росте.
Ключевые слова: диаминооксидаза, полиаминооксидаза, лимфоциты, воспаление, опухолевый рост, пролиферативная активность, фитогемагглютинин.
I. Введение.
Опухоль-асоциированное воспаление стимулирует рост и прогрессию злокачественных глиом головного мозга [4], однако механизмы этих процессов мало изучены. Лимфоциты периферической крови играют важную роль в опухоль-ассоциированном воспалении, мигрируя в очаг воспаления и стимулируя опухолевые клетки к пролиферации и инвазии в окружающие здоровые ткани. Ферменты окисления полиаминов - диаминооксидаза и полиаминооксидаза, являются важными факторами в регуляции пролиферативной функции клеток при воспалении, в первую очередь лимфоцитов. Накопление полиаминов в III стадии воспаления (пролиферации и дифференцировки клеток) регулируется этими ферментами. Они окисляют полиамин в иминоальдегиды, которые могут быть ингибиторами пролиферации. Одним из регуляторов клеточных функций, в частности, миграции клеток крови и адгезии лейкоцитов, служит степень агрегации клеток крови, которую можно рассматривать в качестве опосредованного показателя трансмембранного потенциала. Фитогемагглютинин, который является мембраномодифицирующим препаратом и активатором пролиферативной функции лимфоцитов, может влиять на уровень трансмембранного потенциала. В работе был использован новый метод определения степени агрегации клеток крови на основе эффекта поверхностного плазмонного резонанса [2].
II. Постановка задачи.
Целью работы стало исследование активности диаминооксидазыи полиаминооксидазыв процессе превращения лимфоцитов в бластыпри воздействии различных концентраций фитогемагглютининав тесте «реакция бласттрансформации лимфоцитов».
Объект и методы исследования. Объектом исследования служили образцы крови, взятые натощак у больных с глиомами головного мозга различной степени злокачественности. Фитогемагглютинин разводили в пределах концентрационного градиента от 10-1 до 10-5 раз. Предварительно клетки крови (без сыворотки) инкубировали с различными концентрациями препарата 20 мин при температуре +37o С. Контролем служил исходный раствор фитогемагглютинина. Затем добавляли питательную среду RPMI, антибиотик и культивировали клетки согласно общеизвестной методике «реакция бласттрансформации лимфоцитов»[1].
При определении степени агрегации клеток кровиклеточную фракцию гепаринизированной венозной крови использовали для определения сдвига минимума кривой поверхностного плазмонного резонанса в градусах, отображающего степень агрегации клеток крови[5].
Активность диаминооксидазыи полиаминооксидазы определяли спектрофотометрическим методом в нашей модификации [3].
Статистическую обработку полученных данных проводили в пакете ―Statistica-5.5‖ с использованием непараметрических методов оценки данных. Стандартизацию различных показателей проводили по формуле: Хn – ХΣ / σ, где Хn – индивидуальное значение; ХΣ –среднее значение; σ – стадия отклонения.
III. Результаты.
В группе здоровых лиц показатели степени агрегации клеток крови и активности ферментов диаминооксидазы и полиаминооксидазы находятся в пределах нормы с незначительными отклонениями в зависимости от степени разведения фитогемагглютинина. При снижении показателей поверхностного плазмонного резонанса отмечается значительное снижение пролиферативной активности лимфоцитов. При этом активность диаминооксидазы и полиаминооксидазы также снижена. При повышении показателей поверхностного плазмонного резонанса происходит повышение уровня активности ферментов диаминооксидазы и полиаминооксидаза. Количество бластов при этом остаѐтся сниженным.
При глиомах II ст. зл. снижение показателей поверхностного плазмонного резонанса совпадает с уменьшением количества бластов и активности диаминооксидазы и полиаминооксидазы. Увеличение показателей поверхностного плазмонного резонанса совпадает со снижением количества бластов и увеличением активности диаминооксидазы и полиаминооксидазы при окислении спермина. Активность полиаминооксидазы при окислении спермидина, наоборот, снижена.
При глиомах III ст. зл. снижение показателей поверхностного плазмонного резонанса сопровождается снижением активности диаминооксидазыи полиаминооксидаза и повышением количества бластов. При повышении уровня показателей поверхностного плазмонного резонанса количество бластов снижается одновременно со снижением активности диаминооксидаза, и повышением активности полиаминооксидаза.
IV. Выводы.
Отличия исследуемых показателей между доброкачественными глиомами (II ст. зл.) и злокачественными глиомами (III ст. зл.) состоят в том, что на фоне повышения уровня агрегации клеток крови и снижения активности диаминооксидазыи полиаминооксидазы при доброкачественных глиомах количество бластов снижается, а при злокачественных глиомах их количество повышается. Изменение активности диаминооксидазы и полиаминооксидазы в культуральной среде, синтезированных клетками крови в процессе превращения лимфоцитов в бласты при воздействии различных разведений фитогемагглютинина, свидетельствует об их регуляторной роли в процессах пролиферативной активности лимфоцитов при нейрохирургической патологии, включающей глиомы головного мозга различной степени злокачественности. Соотношения между уровнем снижения агрегации клеток крови и активностью диаминооксидазы и полиаминооксидаза под воздействием различных разведений фитогемагглютинина подчѐркивает важную роль трансмембранного потенциала в пролиферативной активности лимфоцитов в процессах воспаления и при опухолевом росте.
Список литературы
1. Гридина Н.Я., Болтина И.В., Ушенин Ю.В., Лапина А.В. и др. Возрастные аспекты связи между агрегацией клеток крови и хромосомными аберрациями в лимфоцитах периферической крови у больных с глиомами головного мозга //Пробл. старения и долголетия.-2008.-Т.17, №3.-С.328-337.
2. Гридина Н.Я., Маслов В.П., Ушенин Ю.В. Опухоль-ассоциированное воспаление и глиомы головного мозга // LambertAcademicPublishing, Saarbrucken, 2013, 196 стр.
3. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Окислительное дезаминирование полиаминов в гепатомах с различной скоростью роста // Вопр. мед.химии. – 1979. – Т. 25, № 5. – С. 611-617.
4. Шварцбурд П.М. Хроническое воспаление повышает риск развития эпителиальных новообразований, индуцируя предраковое микроокружение: анализ механизмов дисрегуляции // Вопросы онкологии. -2006. – Т.52, №2. – С.137-144.
5. N.Ya. Gridina. Utilizing SPR as a Novel Technique to Measure Cell Aggregation for Ketamine Treated Brain Gliomas //Cancer and Oncology Research- 2013.-V.1 (1): 1-5.
