ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА РАСТИТЕЛЬНОГО СБОРА ДИУРЕТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ

В последние годы во многих странах отмечается неуклонный рост количества патологий мочевыделительной системы. Лечение урологических воспалительных заболеваний, несмотря на значительный арсенал антибактериальных препаратов, представляет собой трудную задачу [1]. Антибактериальная химиотерапия позволяет успешно справляться с инфекцией, подавлять активный воспалительный процесс, но не всегда дает полное излечение, что ведет к развитию хронических процессов, требующих длительного лечения. Кроме того, разнообразные синтетические лекарственные средства при их выраженном терапевтическом эффекте не лишены побочного действия, имеют противопоказания и ограничения к применению. В связи с этим, проблема восстановления функциональной активности органов мочевыделительной системы, профилактика сезонных обострений является актуальной и достаточно сложной. Это определяет необходимость разработки комплексных подходов к их лечению, в том числе с применением лекарственных растительных средств, которые имеют широкий спектр лечебного и профилактического действия, обладают низкой токсичностью, мягкостью действия, способны устранять симптомы обострения, предупреждать рецидивы и способствовать восстановлению нарушенных функций мочевыделительной системы [4,5].
Объектом нашего исследования стал диуретический сбор, состоящий из цветков бузины, плодов рябины и травы хвощ.
Доля каждого растительного компонента в предлагаемом сборе, рациональность их соотношений определялась с учѐтом значимости в формировании диуретического эффекта. Указанный состав входящих компонентов содержит различные группы биологически активных веществ, обеспечивающих в совокупности диуретическое, общеукрепляющее, противовоспалительное действие. С целью выбора оптимального соотношения входящих в сбор ингредиентов были изучены несколько вариантов (Табл.1).
                                                                                                                           Таблица 1

Для оценки содержания действующих веществ в исходной композиции из растительного сырья разработана методика количественного определения в сборе – суммы флавоноидов в пересчѐте на лютеолин методом спектрофотометрии. Содержание суммы флавоноидов в извлечении из сбора определяли в максимуме поглощения с алюминия хлоридом при длине волны 408±5 нм.
Результаты свидетельствуют о том, что наибольшее количество флавоноидов содержится в сухом экстракте, полученном из варианта №5 сбора. Проведенное предварительное фармакологическое изучение пяти вариантов сборов подтвердило оптимальность данного соотношения компонентов.
Таким образом для дальнейшего изучения выбрана следующая композиция сбора: цветков бузины, плодов рябины и травы хвоща в соотношении 2: 1 : 1.
Поскольку фармакологическая активность фитопрепаратов обусловлена действием комплекса биологически активных веществ (БАВ) нами изучен химический состав данного сбора и его водного настоя настоя с использованием фармакопейных методик помощью качественных реакций с раствором железо- аммониевых квасцов (дубильные вещества), с 0,1 г порошка магния и 1 мл концентрированной кислоты хлористоводородной (флавоноиды), с реактивом Фелинга (восстанавливающие сахара), с раствором калия феррицианида и 3% раствора железа окисного хлорида (кислота аскорбиновая) и осаждения спиртом (полисахариды).
Результаты качественных реакций представлены в Табл.2.

                                                                                                                            Таблица 2

 Результаты качественного анализа состава БАВ сбора

Исследование фенольных соединений методом ТСХ проводилось с применением в качестве неподвижной фазы хроматографических пластин «KIЕSELGEL 60 F 254» размером 20х20 см, в качестве подвижной фазы смеси растворителей: этилацетат – метилэтилкетон – кислота муравьиная – кислота уксусная ледяная – вода в соотношении 50:30:7:3:10.
В качестве исследуемого раствора использовали водно-спиртовое извлечение из сбора, полученное по следующей методике: 10,0 г исследуемого образца помещали в колбу объѐмом 100 мл, прибавляли по 40 мл спирта этилового 70%, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч с момента закипания смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, и объѐм доводили растворителем до метки. 10 мл извлечения упаривали на водяной бане, и остаток растворяли в 2 мл смеси этилацетат-метанол в соотношении (95:5). В качестве растворов сравнения использовали 0,05% растворы стандартных образцов рутина, кверцетина, галловой кислоты, хлорогеновой кислоты, кофейной кислоты, гиперозида, лютеолина, лютеолин-7-гликозида в смеси растворителей: этилацетат-метанол в соотношении (95:5) .
На хроматограмме в исследуемом растворе после обработки 5 % раствором фосфорномолибденовой кислоты обнаружено 9 зон, окрашенных в синий цвет со значениями Rf около 0,13 (неидентифицирована), около 0,25 (неидентифи-цирована); около 0,49 (рутин); около 0,53 (гиперозид); около 0,63 (аскорби-новая кислота); около 0,69 (хлорогеновая кислота); около 0.82 (галловая кислота); около 0,90(лютеолин); около 0,95 (кверцетин).
Изучение БАВ предлагаемой растительной композиции методом ВЭЖХ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы GILSON с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром.
Для фенольных соединений в качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка Kromasil C18 размером 4,6х250 мм с размером частиц 5 мкм; в качестве подвижной фазы метанол-вода- фосфорная кислота конц. в соотношении 40:60:0,5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 1 мл/мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 254 нм [2].
Для органических кислот в качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 6.5х300 мм ALTECH OA-1000 Organic Acids, в качестве подвижной фазы 0,005 N раствор серной кислоты. Скорость подачи элюента 0,5 мл/мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 190 нм.
Для сахаров в качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 6.5х300 мм ALTECH OA-1000 Organic Acids.
В качестве подвижной фазы 0,005N раствор серной кислоты. Скорость подачи элюента 0,4 мл/мин. Температура колонки 65 ºС. Детектирование проводилось с помощью детектора REFRACTOMETR GILSON.
В результате проведенного исследования в изучаемой композиции подтверждено присутствие следующих БАВ: фенольных соединений – эпигаллокатехингаллат, танин, к-та галловая, изоферуловая, хлорогеновая, цикориевая, неохлорогеновая, коричная, феруловая; лютеолин, кумарин, гиперозид, рутин, кверцетин; углеводы – глюкоза, галактоза, фруктоза, рамноза; органические кислоты – щавелевая, фумаровая, янтарная, лимонная, аскорбиновая к-та.

Список литературы

1. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой. – Киев: Наукова думка, 1976. – 168 с.
2. Беликов В.В. Применение ВЭЖХ в анализе флавоноидных препаратов / В.В.Беликов // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств.- М., 1991.- Т.2, 4.2. - С.14-15.
3. Беликов В.В. Унифицированная методика определения флавоноидов для стандартизации фитохимических препаратов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова Н.Т. Колесник // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всероссийской научной конференции. – Томск, 1989. – Вып. 2. – С. 21-22.
4. Георгиевский В.П. К вопросу о стандартизации фитопрепаратов из растительного сырья / В.П. Георгиевский // Лекарственные растения в традиционной и народной медицине: Тез. докл. научной конференции. – Улан-Удэ, 1987. – С. 45-47.
5. Георгиевский В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. – Новосибирск: Наука, 1990. – 332 с.