СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В ТКАНЯХ ПЕЧЕНИ И ПОЧЕК У БЕСПОРОДНЫХ КРЫС ПРИ ВВЕДЕНИИ ВАЛЬПРОАТА НАТРИЯ В ТОКСИЧЕСКОЙ ДОЗЕ

При развитии многих органопатий, в том числе токсических поражений, одним из ведущих патогенетических факторов является дисбаланс между интенсивностью процессов свободнорадикального окисления (СРО) и функциональной активностью антиоксидантных систем (АОС) организма [1,2]. Основными механизмами активации СРО служат значительное увеличение выработки активных форм кислорода (АФК) [1,2]. Интенсивность СРО поддерживается на стационарном уровне глутатионовой системой, включающей глутатион, глутатионпероксидазу (ГП), глутатионредуктазу (ГР) и глутатионтрансферазу (ГТ) [5]. Данная система в клетках млекопитающих обеспечивает детоксикацию Н2О2 , который является основным источником гидроксильного радикала [5].
Вальпроат натрия широко используемым противосудорожным препаратом. Учитывая, что в клинической практике применяется длительная фармакотерапия вальпроатом натрия при разных формах эпилепсии, изучение закономерностей ответа системы глутатиона на токсические воздействия при повторных введениях вальпроата натрия эксперементальным животным представляет несомненный интерес. Поиск подходов к лечению и профилактике токсических повреждений медикаментозными средствами должны включать патогенетические средства, оказывающие комплексное фармакологическое воздействие. Этой задаче в полной мере отвечает S- аденозил-L-метионин (адеметионин, гептрал). Адеметионин (гептрал) играет ключевую роль в реакциях трансметилирования, транссульфурирования, трансаминирования, участвуя также в обмене оксида азота, цитокинов. [3]
Целью работы явилось изучение динамики уровня восстановленного глутатиона (GSH) и активности ферментов его метаболизма: глутатионпероксидазы (ГП), глутатионредуктазы (ГР) и глутатионтрансферазы (ГТ) в печени, почках белых беспородных крыс при ежедневном введении вальпроата натрия и при введении вальпроата натрия с адеметионином (гептралом).
Материалы и методы.
Исследование проведено на 48 беспородных крысах-самцах с массой тела 190-210 г. Вальпроат натрия вводили интрагастрально в токсической дозе 600мг/кг массы. Длительность введения составляла 7, 14, 21, 28 суток, препарат вводили ежедневно. Все крысы были распределены на экспериментальные группы: 1.интактные животные – не получали противосудорожный препарат; 2.опытные – получали противосудорожный препарат 600мг/кг, ежедневно в течение 7 суток; 3.опытные – получали противосудорожный препарат 600мг/кг, ежедневно в течение 14 суток; 4.опытные –получали противосудорожный препарат 600мг/кг, ежедневно в течении 21 суток; 5.опытные – получали противосудорожный препарат 600мг/кг, ежедневно в течении 28 суток; 6.опытные - получали противосудорожный препарат 600мг/кг и адеметионин (гептрал) 1000мг/кг интраабдоминально ежедневно в течение 7 суток; 7.опытные - получали противосудорожный препарат 600мг/кг и адеметионин (гептрал) 1000мг/кг интраабдоминально ежедневно в течение 14 суток..
Стандартными спектрофотометрическими методами определяли концентрацию GSH и активность ферментов его метаболизма: ГП, ГР и ГТ в печени, почках животных [6].
Результаты и обсуждение.
При определении концентрации GSH в печени зарегистрировано его снижение у всех животных, в сравнении с группой интактных (Табл.1). Так, на 21 и 28 сутки эксперимента снижение GSH составило в печени 16,0% и 16,4% соответственно. (р<0,05).
                                                                                                                         Таблица 1

 Динамика изменений концентрации восстановленного глутатиона в тканях органов беспородных крыс при повторных введениях вальпроата натрия (600 мг/кг), (М±m, мкмоль/г)

Примечание. р<0,05: *по сравнению с животными интактными

При ежедневном введении вальпроата натрия у крыс отмечаются сдвиги со стороны активности ферментов антиоксидантной защиты – ГП и ГТ. Так, в тканях печени введение противосудорожного препарата в дозе 600мг/кг в течении 7 суток вызывало повышение активности ГР на 95,2%, а на 14 сутки на 99,3% (р<0,05). Активность ГП в печени животных увеличивается по сравнению с интактными на 72% на 28 сутки токсического действия препарата (р<0,05) (Табл.2).
                                                                                                                          Таблица 2

 Показатели активности ферментов метаболизма глутатиона в печени беспородных крыс при повторных введениях вальпроата натрия (600 мг/кг), (М±m, нмоль/мин на 1 мг белка)

Примечание. р<0,05: *по сравнению с животными интактными

Наибольшее усиление активности ферментов метаболизма глутатиона наблюдалось в тканях почек. Так, на 14 сутки введения противосудорожного препарата максимальное усиление активности ГР на 115% по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Тенденция к увеличению ГР сохранялась на 21, 28 сутки введения препарата на 48,8% и 51,2% соответственно (р<0,05). Такая же направленность изменений отмечалась и с активностью ГT, на 21 и 28 сутки активность увеличилась на 51,1% и 55,7% соответственно (р<0,05). Показатели ГП снижались через 14 суток введения вальпроата натрия на 53,4%, а на 21 и 28 сутки исследования, полученные результаты практически не отличались от активности ферментов у интактных животных.
Введение вальпроата натрия и адеметионина оказывало влияние на активность ферментов глутатиона, в большей степени на ГР. Уже на 7-е сутки наблюдали увеличение активности ГР в печени на 85%, почках 80,3% по сравнению с интактными животными (р<0,05). Значительные изменения ГР отмечены и на 14-е сутки опыта: показатели активности этого фермента по-прежнему были выше, чем у крыс интактных на 94,6% в печени, 129,6% в почках (р<0,05).
Кроме того, отмечали снижение активности ГП особенно значительно в почках на 43,1% на 7 сутки и на 46,3% соответственно на 14 сутки исследования по сравнению с соответствующими показателями в группе интактных животных (р<0,05). В печени показатель активности ГП уменьшился на 20,4% (р<0,05), спустя 14 суток на фоне применения препаратов.
Активность фермента ГТ, при курсовом введении лекарственных средств, уменьшилась на 7-е сутки наблюдения на 35,6% в почках (р<0,05), а на 14 сутки исследования показатели активности приближались к значениям у интактных крыс.
На основании полученных данных можно предположить, что курсовое введение адеметионина на фоне применения противосудорожного препарата вальпроата натрия способствует более быстрой нормализации концентрации глутатиона и активности ферментов метаболизма глутатиона в органах (печень, почки) у беспородных крыс.

Список литературы

1. Агарков А.А., Попова Т.Н., Семенихина А.В. Каталитические свойства глутатионредуктазы из печени крысы в норме и при токсическом гепатите // Биомедицинская химия. – 2009. – Т. 55. №2 – С. 169-176.
2. Андреещева Е.М., Попова Т.Н., Артюхов В.Г. и др. Интенсивность свободнорадикального окисления и каталитические свойства NADP-изоцитратдегидрогеназы в печени крыс в норме и при токсическом гепатите // Биомедицинская химия. – 2006. – Т. 52. №2. – С.153-160.
3. Барановский А.Ю., Райхельсон К.Л., Марченко Н.В. Применение S-аденозилметионина (Гептрала) в терапии больных неалкогольным стеатогепатитом // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. – 2010. – №1 – С. 1-8.
4. Калинина Е.В., Чернов Н.Н., Алеид Р. И др. Современные представления об антиоксидантной роли глутатиона и глутатионзависимых ферментов // Вестник российской АМН. – 2010. – №3 – С. 46-52.
5. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И., Сотникова Г.В. и др. Влияние направленного изменения концентрации глутатиона на температуру тела и толерантность к ишемии головного мозга // Биохимия. – 2003. – Т. 68. №5 – С. 656-663.