Новости
09.05.2023
с Днём Победы!
07.03.2023
Поздравляем с Международным женским днем!
23.02.2023
Поздравляем с Днем защитника Отечества!
Оплата онлайн
При оплате онлайн будет
удержана комиссия 3,5-5,5%








Способ оплаты:

С банковской карты (3,5%)
Сбербанк онлайн (3,5%)
Со счета в Яндекс.Деньгах (5,5%)
Наличными через терминал (3,5%)

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОСТНОМОЗГОВОГО КРОВЕТВОРЕНИЯ И СОСТАВА ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ПРИОБРЕТЕННОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ 2-БУТОКСИЭТАНОЛОМ И ФЕНИЛГИДРАЗИНОМ

Авторы:
Город:
Пермь
ВУЗ:
Дата:
13 апреля 2016г.

Введение: Большая распространенность промышленных ядов в среде обитания определяет высокую частоту и неблагоприятные исходы отравлений данными веществами. Расширяющееся с каждым годом внедрение химических соединений в различные виды промышленности, быта, науки, создают условия для развития гемолитичекой анемии [10, 11, 12]. Все гемолитические яды первоначально вызывают раздражение костного мозга с появлением ретикулоцитоза и нейтрофильного лейкоцитоза, вслед за которыми проявляется гемолитическое действие препарата, выражающееся в постепенном снижении количества эритроцитов и в меньшей степени - гемоглобина [5]. Действие яда сопровождается также нарушениями функций со стороны многих органов и систем; наблюдается увеличение селезенки и печени [2].

Токсическая гемолитическая анемия – это группа заболеваний, где гемолиз эритроцитов обусловлен воздействием химических веществ, биологических ядов и бактериальных токсинов [8]. Лекарственная гемолитическая анемия возникает вследствие аутоиммунной реакции организма, при этом нередко лекарственные средства являются гаптеном, которые связываются с белками плазмы, образуя антиген [9]. После диссоциации этого комплекса на поверхности эритроцитов остается комплемент. В других случаях лекарственные средства прочно связываются с неповрежденными эритроцитами [7]. Антитела реагируют с веществами, повреждая эритроциты и вызывая их гемолиз. Данный вид лекарственной гемолитической анемии возникает при введении больших доз токсических веществ. Картина крови приобретенной гемолитической анемии характеризуется малым количеством эритроцитов (до 1000000 в 1 мкл) и низким содержанием гемоглобина- 20-30%. В периферической крови наблюдается значительный ретикулоцитоз и нормоэритробластоз, а также гиперлейкоцитоз с ядерным сдвигом влево (до миелоцитов). В пунктате костного мозга отмечается резкая эритробластическая реакция [1].

Фенилгидразин – гемолитический яд, вызывающий распад эритроцитов и лейкоцитов крови, а также превращение гемоглобина в метгемоглобин. В опыте Евразийского национального университета имени Л.Н. Гумилева было доказано его токсическое действие с изменением картины периферической крови за счет поражения печени фенилгидразином и с проявлением активации перекисного окисления липидов, которое угнетает функции многих внутренних органов. [13].

Лабораторными исследованиями доказано токсическое действие 2-бутоксиэтанола на организм человека и животных. Это гликолевый эфир, вызывающий гемолиз эритроцитов у крыс и некоторых других млекопитающих, в том числе и у человека [6]. Действие in vivo в настоящее время не доказано.

Цель исследования: оценка и сравнительный анализ клеточного состава красного костного мозга и периферической крови экспериментальных животных при моделировании приобретенной токсической гемолитической анемии, вызванной 2-бутоксиэтанолом и фенилгидразином - веществами с гемолитическим эффектом, которые являются промышленными ядами.

Материалы и методы: Проведено две серии экспериментов: I – введение экспериментальным животным 2- бутоксиэтанола, II - введение фенилгидразина. Исследования проводились на 80 нелинейных крысах на базе ЦНИЛ. В первом эксперименте животные были разделены на две группы: контрольная группа (n=20) содержалась в стандартных условиях вивария, опытной (n=20) вводили однократно интраперитонеально бутоксиэтанол в дозе 20 мг/кг. Во втором эксперименте животные также были разделены на 2 группы, контрольная группа (n=20) содержалась в стандартных условиях вивария, опытной (n=20) вводили однократно интраперитонеально фенилгидразин в дозе 20 мг/кг.

Показатели периферической крови определяли при помощи гематологического автоматического анализатора Medonic M20, производство Boule Medical A.B., Швеция. Через 10 дней животных выводили из эксперимента с соблюдением правил эвтаназии, мазки красного костного мозга, полученные из бедренной кости,




окрашивали красителем-фиксатором Майн-Грюнвальда и по Романовскому-Гимзе, микроскопировали под иммерсией, проводили подсчет миелограмм. Статистическую обработку полученных данных осуществляли с использованием приложения Microsoft ® Excel полнофункционального офисного пакета Microsoft Office 2007.

Результаты: Контрольная группа крыс содержалась в нормальных условиях вивария с доступом к воде и пище. Из хвостовой вены была взята периферическая кровь и проведен анализ клеточного состава. Через 10 дней их выводили из эксперимента с соблюдением правил эвтаназии под эфирным наркозом. Из бедренной кости был взят пунктат красного костного мозга и составлена миелограмма.

Первой опытной группе вводили 2-бутокиэтанол, второй – фенилгидразин. Обе группы содержали в нормальных условиях вивария с доступом к воде и пище. Через 10 дней у данных групп животных забирали кровь из хвостовой вены с проведением анализа клеточного состава. Опытных крыс выводили из эксперимента с соблюдением правил эвтаназии под эфирным наркозом. Из бедренной кости был взят пунктат красного костного мозга и составлена миелограмма. На основании данных миелограммы были подсчитаны следующие показатели: лейко-эритробластическое отношение и индекс созревания эритрокариоцитов.

Лейко-эритробластическое (ЛЭО) отношение вычисляется как отношение суммы процентного содержания всех лейкоцитов к общему содержанию всех ядерных элементов эритроидного ряда - от пронормобласта до зрелых форм. В контрольной и опытных группах (2-бутокиэтанол и фенигидразин) ЛЭО составлял 4,22; 11,49 (p=0,128) и 5,35 (p=0,202) соответственно, таким образом, отличия показателей в обоих группах в сравнении с контрольной статистически незначимы.

Индекс созревания эритрокариоцитов (ИСЭ) - отношение количества гемоглобинсодержащих нормобластов. В контрольной и опытных группах (2-бутокиэтанол и фенигидразин) ИСЭ составлял 0,85; 0,94 (p=0,02) и 0,84(p=0,836) соответственно, то есть показатели статистически значимо возрастают в опытной группе с 2-бутоксиэтанолом (рис. 1).

При проведении анализа показателей периферической крови животных с введением фенилгидразина установлено, что в опытных группах наблюдалось статистически значимое снижение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов.

У животных с введением фенилгидразина выявляли статистически значимое увеличение количества ретикулоцитов периферической крови. Установлено, что введение фенилгидразина сопровождается увеличением показателя MCH, показателя MCV и показателя RDW, снижением показателя MCHС.

Суммируя полученные по результатам исследования эритроцитарных индексов данные, можно утверждать, что при моделировании гемолитической анемии при помощи введения фенилгидразина была смоделирована макроцитарная, гипохромная и, учитывая количество ретикулоцитов, - гиперрегенераторная анемия.

По данным литературы, анемия вызванная фенилгидразином характеризуется анизо- и пойкилоцитозом, увеличением содержания микро- и макроцитов на 35 % по отношению к нормоцитам, выявлением микросфероцитов [3]. Также отмечается  увеличение среднеклеточного диаметра эритроцитов - характерный признак макроцитарной анемии, уменьшается концентрация гемоглобина и эритроцитов [4]. Количество тромбоцитов во всех экспериментальных группах имело тенденцию к росту.

При проведении анализа показателей периферической крови животных, подвергнутых введению 2- бутокиэтанола, установлено, что в опытных группах к концу эксперимента отмечалось статистически значимое снижение концентрации гемоглобина и уменьшение количества эритроцитов и статистически значимое увеличение количества ретикулоцитов периферической крови.

У животных при введении 2-бутокиэтанола выявляли статистически значимое увеличение количества ретикулоцитов периферической крови. Установлено, что введение 2-бутокиэтанола сопровождается увеличением показателя MCH, показателя MCV и показателя RDW, снижением показателя MCHС (табл. 1).

Выводы:

1.     У животных опытной группы с введением 2-бутокиэтанола к концу эксперимента отмечалась тенденция к гиперплазии эритроидного ростка, что проявлялось в увеличении индекса созревания эритрокариоцитов в сравнении с контрольной группой. Полученные данные могут свидетельствовать о том, что при токсической гемолитической анемии, как и при любой другой гемолитической анемии, костный мозг стремится компенсировать потерю эритроцитов стимуляцией эритропоэза, но в условиях токсического воздействия эта стимуляция оказывается неэффективной.

2.     Введение 2-бутокиэтанола и фенилгидразина сопровождается увеличением показателей MCH, MCV и RDW. При моделировании гемолитической анемии при помощи введения 2-бутокиэтанола была получена макроцитарная, нормохромная, а в случае фенилгидразина - гипохромная анемия.



Таблица 1 Сравнительный анализ животных контрольной и двух опытных групп (2-бутокиэтанол и фенилгидразин) показателей периферической крови, * p<0,05

Показатели

Контрольная группа

Фенилгидразин

2-Бутоксиэтанол

MCH

17,82±0,28

21,84±0,59

22,07±0,69

MCHC

343,0±2,08

327,36±2,25*

337,75±1,87

MCV

52,11±1,07

66,79±1,85*

66,79±1,85

RDW

17,93±0,52

30,05±0,96*

26,78±2,05


Список литературы

1.     Бурчинский Г.И., Внутренние болезни / Под. ред. проф. Г. И. Бурчинского. ― 4-е изд., перераб. и доп. ― К.: Вища шк. Головное изд-во, 2000. ― 656 с. http://medactiv.ru/yhaematol/haematology-0035.shtml

2.     Гончаренко А.В., Гончаренко М.С. Изучение механизмов повреждающего действия токсических концентраций марганца на клеточном и субклеточном уровнях. Микроэлементы в медицине 2012; 13 (4): 32−37.

3.     Жернов Ю.В. Изучение антиоксидантного эффекта гуминовых кислот пелоидов при приобретенной гемолитической анемии // Кислород и антиоксиданты. 2009; 1: 73-74.

4.     Иванникова Н.О. Динамика поведенческих и морфофункциональных изменений у крыс с экспериментальным внутримозговым кровоизлиянием после эмоциональной стрессовой нагрузки. Автореф. дисс. … канд. мед. наук. Москва, 2012; 29.

5.     Everds N.E., Snyder P.W., Bailey K.L., Bolon B., Creasy D.M., Foley G.L., Rosol T.J., Sellers T. Interpreting Stress Responses during Routine Toxicity Studies A Review of the Biology, Impact, and Assessment. Toxicol Pathol. 2013; 7; 55 pages: http://tpx.sagepub.com/content/early/2013/03/01/0192623312466452.full.html.

6.     Ghanayem B.I., Sullivan C.A. Assessment of the haemolytic activity of 2-butoxyethanol and its major metabolite, butoxyacetic acid, in various mammals including humans. Hum Exp Toxicol. 1993; 12(4): 305-311.

7.     Klajnert B., Pikala S , Bryszewska M. Haemolytic activity of polyamidoamine dendrimers and the protective role of human serum albumin. Proceedings 2015; 471 (2175): DOI: 10.1098/rspa.2009.0050Published 29 March 2010.

8.     Minnesota Department of health 2013 Health Risk Limits for Groundwater Health Risk Assessment Unit, Environmental Health Division 651-201-4899 Adopted as Rule: September 30, 2013 Toxicological Summary for Naphthalene: CAS: 91-20-3: http://www.health.state.mn.us/divs/eh/risk/guidance/gw/naphthalene. pdf.

9.     Munday R., Smith B.L., Munday C.M. Structure-activity relationships in the haemolytic activity and nephrotoxicity of derivatives of 1,2- and 1,4-naphthoquinone. J Appl Toxicol. 2007; 27(3): 262-269.

10. Schick P., Besa E.C. Hemolytic Anemia Treatment & Management. Drug, Diseases & Procedures. 2011; 8: 1234- 1237.

11. Schwartz R.S. Autoimmune and intravascular hemolytic anemias. In: Goldman L, Ausiello D. Cecil Medicine. 23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007:chap 164.

12. Sekar A., Paudel S., Sivakumar S.P., Verma A. Methemoglobinemia and Uremia from an Unusual Poison. Clinical Toxicology 2014; 4(5): 3 pages: http://dx.doi.org/10.4172/2161-0495.1000217.

13. Shukla P., Yadav N.K., Singh P., Bansode F.W., Singh R.K. Phenylhydrazine induced toxicity: a review on its haematotoxicity. International Journal of Basic and Applied Medical Sciences. 2012; 2(2): 86-91.