Новости
09.05.2023
с Днём Победы!
07.03.2023
Поздравляем с Международным женским днем!
23.02.2023
Поздравляем с Днем защитника Отечества!
Оплата онлайн
При оплате онлайн будет
удержана комиссия 3,5-5,5%








Способ оплаты:

С банковской карты (3,5%)
Сбербанк онлайн (3,5%)
Со счета в Яндекс.Деньгах (5,5%)
Наличными через терминал (3,5%)

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АНТИТЕЛ К КСАНТИНОКСИДАЗЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА

Авторы:
Город:
Волгоград
ВУЗ:
Дата:
14 апреля 2016г.

Общепризнано, что активные формы кислорода (АФК) могут оказывать патогенное воздействие на биомолекулы и структуры клетки непосредственно, либо инициируя процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме больных ревматическими заболеваниями (РЗ), приводя к деградации коллагена, гиалуроновой кислоты, повреждению соединительной ткани. Исследования, направленные на изучение эндогенных факторов, способствующих интенсификации свободнорадикального окисления и ПОЛ при развитии ревматоидного артрита (РА) представляют несомненный интерес.

Одним из таких факторов является ксантиноксидаза (ЕС 1.1.3.22, КО). Принимая во внимание характерные иммунологические нарушения при РА можно предположить, что  изменение энзиматической активности ряда ферментов антиоксидантной системы и пуринового метаболизма, в том числе КО, может быть обусловлено, как влиянием метаболических нарушений, так и гиперпродукцией антител (Ат) к этим энзимам.

Целью работы явилось усовершенствование иммунологической диагностики РА путем исследования процессов антителообразования к КО.

Материалы и методы.

Под наблюдением находились 89 больных с достоверным РА по критериям Американской коллегии ревматологов. Среди больных РА было 70,8% женщин и 29,2% мужчин. Средний возраст больных составил 48,9 ± 13,2 года, средняя продолжительность заболевания – 11,14 ± 2,33 года. Степень активности патологического процесса определялась в соответствии с диагностическими критериями, рабочей классификацией РА и индексом DAS28 (Disease Activity Score), рекомендованным EULAR. I-ая (минимальная) степень активности выявлена у 17 (19,1%), II-ая (умеренная) – у 64 (71,9%) и III-я (максимальная) – у 8 (9%) больных РА.

Рентгенологическая стадия поражения суставов I определялась у 9, II-ая – у 52, III-я – у 24, IV-я – у 4 больных РА. У большинства больных (91%) выявлялся полиартрит. У 73% больных РА был обнаружен ревматоидный фактор (РФ).

Контрольную группу составили 30 практически здоровых лиц в возрасте от 24 до 46 лет (19 женщин и 11 мужчин) - доноров станции переливания крови, прошедших обычное обследование. Зависимости уровня Ат к КО, активности КО от пола и возраста обследуемых лиц данной группы выявлено не было.

Ат к КО определяли в ELISA-тесте с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента на основе КО в качестве антигенной матрицы. Иммобилизацию антигена (коммерческий препарат КО производства «Sigma», США, Cat. № Х2252) проводили методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в структуру полиакриламидного геля по методике И.П. Гонтаря с соавт. [1]. Результаты учитывали на многоканальном спектрофотометре АС-8К при длине волны 450 нм, полученные значения выражали в условных единицах оптической плотности (е.о.п.). Наличие Ат считалось положительным при превышении значений оптической плотности на 2 средних квадратических отклонения от значений контрольной группы (для Ат к КО – более 0,097 е.о.п.).

Активность КО в сыворотке крови определяли по методике Калькара в модификации Дягиной Е.Г. с использованием ксантина [2], а активность ксантиндегидрогеназы (КДГ) – по методу Devenyi Z.J. с использованием ксантина и окисленной формы НАД [3]. Амплитуда колебаний активности ферментов у здоровых людей по формуле М±2s составила для КО 2,37–4,97 мкмоль/л х мин, для КДГ 4,01–7,41 мкмоль/л х мин, коэффициент КО/КДГ 0,52–0,80.

Статистическая обработка полученных результатов проводилась на персональном компьютере с использованием пакета «STATISTICA 6.0 for Windows». Достоверными считались результаты при уровне р<0,05.

Результаты исследования.

Ат к КО были обнаружены в сыворотке крови 53 больных РА (59,5%) и не были выявлены ни у одного обследованного в контрольной группе.

У больных РА был выявлен ряд статистически значимых корреляций уровней Ат к КО  и активности фермента с клиническими и лабораторными показателями (Табл.1).

Таблица 1 Корреляции уровня антител к КО и активности фермента с клиническими и лабораторными показателями у больных РА

 

Показатель

Активность ксантиноксидазы

R

p

R

P

Активность РА (индекс DAS28)

0,654 *

0,000

0,308 *               0,003

Концентрация IgM (г/л)

- 0,090

0,403

0,370 *               0,000

Концентрация IgG (г/л)

- 0,130

0,486

0,414 *               0,000

СОЭ (мм/час)

- 0,082

0,661

0,254 *               0,022

ЦИК (Ед.)

0,260 *

0,014

0,265 *               0,012

Активность КДГ (мкмоль/л х мин)

- 0,652 *

0,002

- 0,434 *              0,000


 
л к е



 

Аланинаминотрансфераза (Ед/л)

0,165

0,122

0,335 *

0,001

Примечание: звездочкой (*) отмечены корреляции с достоверностью р<0,05.

 

При I степени активности РА по сравнению со здоровыми лицами обнаружено повышение ферментативной активности КО (5,69 ± 1,40; р<0,001), КДГ (6,24 ± 0,70; р=0,039), увеличение соотношения КО/КДГ (0,95 ± 0,29; р<0,001) и увеличение уровня антител к КО (0,081 ± 0,015; р<0,001).

С нарастанием активности патологического процесса (сравнивались показатели при минимальной и умеренной активности РА) отмечалось увеличение содержания Ат к КО (0,143 ± 0,045; р<0,001) на фоне снижения биохимической активности КДГ (1,61 ± 1,12; р=0,026) и роста активности КО (7,59 ± 3,6; р=0,037). При высокой активности РА тенденция к увеличению активности КО сохранялась (9,87 ± 1,30; р=0,082), но рост коэффициента КО/КДГ (2,42 ± 0,31; р=0,047) происходил в основном за счет снижения активности КДГ (4,35 ± 0,34; р=0,041). Следует отметить, что у больных с III степенью активности РА были отмечены наиболее высокие уровни Ат к КО (0,211 ± 0,016; р<0,001), кроме того, если у больных РА с низкой активностью патологического процесса Ат к КО выявлялись в низком проценте случаев (29,4%), у больных с умеренной активностью – в 67,2%, то при высокой активности заболевания частота положительных результатов достигала 100%.

Снижение активности КДГ на фоне повышенной активности КО у больных РА происходит, по-видимому, за счет трансформации Д-формы КО в О-форму при нарастании воспалительных явлениях в тканях, гипоксии, а также за счёт повышения активности протеолитических энзимов в очагах воспаления и свидетельствует о существенном увеличении генерации супероксидных радикалов. Учитывая выявленную тесную взаимосвязь иммунологической и ферментативной активности КО роль Ат к КО в данной трансформации представляется весьма вероятной и может выражаться в непосредственном воздействии на активный и/или аллостерический центр молекулы энзима.

Заключение.

Определение Аи к КО в сыворотке крови больных РА иммуноферментным методом с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента может использоваться для улучшения качества диагностики данного заболевания. Полученные результаты позволяют рассматривать совместное определение активности КО, КДГ и антител к КО в качестве дополнительных диагностических критериев при уточнении степени активности патологического процесса при РА.

Список литературы

1.     Гонтарь И.П., Зборовский А.Б., Левкин С.В., Сычева Г.Ф. Способ получения магнитных полиакриламидных гранул // Авторское свидетельство на изобретение N 1582657. – 1990.

2.     Дячина Е.Г. Активность КО в сыворотке крови у больных с хирургическими заболеваниями печени, желчевыводящих путей и другими заболеваниями // Лаб. дело. - 1973. - № 11. - С. 647-649.

3.     Devenyi Z.J., Orchard J.L., Powers R.E. Xanthine oxydase activity in mause pancrease: effect of caerulein-induced acute pancreatitis // Biochem. and Biophys. Res. Commun. - 1987. - Vol.149. - №3. - P.841-843.