09 мая 2016г.
Тиреоидные гормоны имеют значительное физиологическое значение. Они влияют на все виды обмена веществ в организме, в том числе усиливают резорбцию и синтез костной ткани, влияют на выработку гликозаминогликанов и протеогликанов в соединительной ткани [6,8]. Увеличение количества тиреоидных гормонов в организме ведёт к ускорению метаболизма костной ткани за счет роста числа и активности остеокластов и к стимуляции остеобластов. При недостатке тиреоидных гормонов увеличивается активность аденилатциклазы в синовиальных оболочках, что повышает продукцию гиалуроновой кислоты фибробластами. Все это приводит к накоплению синовиальной жидкости в суставах и вызывает клинические проявления синовита. Избыточная выработка антител к гормонам щитовидной железы инициирует инактивацию физиологического действия ферментов и блокирование их активных центров. Клинически увеличение содержания антител (АТ) к тиреоидным гормонам в крови больных аутоиммунным тиреоидитом проявляется прогрессированием аутоиммунного процесса [4, 5, 7].
Цель:
Целью работы явилась разработка и применение способа очистки крови от антител к тиреоидным гормонам с помощью иммобилизированного гранулированного магнитоуправляемого препарата.
Материалы и методы:
Через предварительно полученный методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота оригинальный гранулированный магнитоуправляемый препарат с иммобилизированной формой тиреоидного гормона проведена обработка сыворотки и нативной гепаринизированной крови 10 больных хроническим аутоиммунным тиреоидитом, находившихся на стационарном лечении в ГУЗ «ГКБСМП №25» г.Волгограда. В качестве контроля использовали 10 сывороток здоровых лиц.
В связи с низким молекулярным весом гормонов, мы применили ковалентную сшивку с носителем при помощи глутарового альдегида, имеющего две концевые альдегидные группы (первая из аминогрупп фиксируется к акриламиду, вторая к тироксину (Т4) и трийодтиронину (Т3), что создаёт более высокую концентрацию антигена именно на поверхности гранулы. При создании иммобилизированных гранулированных форм, химические группы активных центров гормонов остаются свободными для связывания с антителами [2]. Полученные гранулы имели размер, который варьировал от 10 до 100 мкм. Изучали содержание АТ к Т4 и Т3 в сыворотке исходно и после перфузии методом преципитации с полиэтиленгликолем, а также определяли содержание форменных элементов крови до и после процедуры перфузии. Для проведения сорбции АТ из плазмы крови больных в колонку, помещенную в устройство, создающее постоянное магнитное поле удерживающие гранулы во взвешенном состоянии вносили гранулы и перфузировали через неё сыворотку и нативную гепаринизированную кровь от больных аутоиммунным тиреоидитом. Далее препарат отмывали и регенирировали. Определяли содержание АТ к Т4 и Т3 в сыворотке [1,9].
В качестве прототипа использовали метод удаления антитиреоидных антител из крови путём пропускания её через иммуносорбент – тиреоидный гормон, иммобилизированный на сефарозе путем активации бромцианом [3]. У указанного способа есть ряд недостатков: крайне высокая стоимость реактивов, токсичность, сравнительно меньшая сорбционная ёмкость.
Результаты/обсуждение: Получаемые нами полиакриламидные микрогранулы использовали в качестве сорбента для связывания и удаления антитиреоидных антител из организма у больных с аутоимунными поражениями щитовидной железы. Перфузия через препарат вызывала снижение содержания антител на 99,5%, однако при помощи прототипа снижение достигалось лишь на 93% от исходного количества. Уровень антител к тиреоидным гормонам у доноров составил 0,034±0,008 Ед. по анти Т3 и 0,028±0,008 Ед. по анти Т4. Количество антител у больных хроническим аутоиммунным тиреоидитом до проведения перфузии по АТ к Т3 - 0,132±0.027 Ед. и по АТ к Т4 - 0,156±0,065 Ед.; после перфузии: АТ к Т3 0,037±0,007 Ед., АТ к Т4 0,039±0,009 Ед. В процентном соотношении содержание АТ до проведения сорбции, как в прототипе, так и в заявляемом образце составило 100%. Однако, после перфузии АТ к Т3 в заявляемом образце выявлялись в 0,5% случаев, а в прототипе 7%; а АТ к Т4, соответственно, 0,4% и 8%. Данные показатели наглядно демонстрируют преимущество перфузии через гранулы. Содержание форменных элементов в крови больных с аутоиммунным поражением щитовидной железы до и после перфузии через гранулированный магнитоуправляемый препарат с иммобилизированными формами Т4 и Т3 достоверно не изменялось. Уровень эритроцитов исходно составлял 4,5±1,1×10¹²л, после перфузии 4,2±1,5×109 (100% и 93,3% соответственно), лейкоциты 5,88±1,6×109л до проведения сорбции, после - 5,1±1,0×109л (100%- до очистки крови, 86.7% - по окончанию процедуры), тромбоциты исходно 253,5±56,1×109, 245,3±40,5×109л; после проведения сорбции (100% и 96,7% соответственно).
Выводы:
Таким образом, полученные нами препараты иммобилизированных гормонов имеют ряд преимуществ перед вышеупомянутом прототипом как по сорбционной ёмкости, так и по отсутствию лизиса форменных элементов крови.
Список литературы
1. Антитела. Методы// Под ред. Д. Кэтти.-М.: Медицина, 1991.- В 2 т.,- Т.2-385с.
2. Гонтарь, И.П. Способ очистки крови от антител к тиреоидным гормонам с помощью иммобилизированного гранулированного магнитоуправляемого препарата.// Патент на изобретение № 2366958 2008г.
3. Ермоленко, М.Н. Способ очистки антител к тиреоидным гормонам // патент на изобретение № 4221846/14, 1994г.
4. Кандор, В.И. Антитиреоидные антитела и аутоиммунные заболевания/ В.И. Кандор, И.О. Крюкова, С.И. Крайнова// Проблемы эндокринологии.-1997.-С. 28-30.
5. Ковалёва, Н.И. Аутоиммунный тиреоидит. Современные методы диагностики и лечения. // Лекарственный вестник.- 2006.-Том3.-№7 (23).- С. 23-25.
6. Левит, И.Д. Аутоиммунный тиреоидит: этиология, патогенез, клиника, диагностика, лечение.- Челябинск: Юж-Урал. кн. изд-во.- 1991. – 256С.
7. Лукьянчиков, В.С. Современные представления об этиологии и патогенезе аутоиммунных эндокринопатий./ В.С. Лукьянчиков, А.П. Калинин, В.В. Лукьянчиков.// Тер. архив. 1995.-Т. 67.№10.-С. 3- 6.
8. Роит, Ф.Б. Иммунология / А.Б. Роит, Дж. Бростофф, Д. Мейл.- М.: Мир, 2000.-593с.
9. Терещенко, И.В. Актуальные вопросы аутоиммунного тиреоидита/ И.В. Терещенко, Н.В. Каюшева // IV съезд иммунологов и аллергологов СНГ: Материалы съезда. - 2001.- Т. 2.- С. 120-123.
